【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医药及保健食品，具体涉及一种刺梨多糖的制备方法、鉴定方法和应用。
技术介绍
1、癌症是全球主要的死亡原因之一，尤其是肺癌。根据最新统计，于2022年估算的约970万例癌症病例中，肺癌为首要原因。在180万癌症死亡人数中，死于肺癌的人数约占18.7%。根据不同的生长和扩散模式，肺癌可分为两类：小细胞癌症（sclc）和非小细胞癌症（nsclc），后者约占病例的80%~85%，是更为常见与致命的形式。尽管传统癌症治疗方式有一定的治疗效果，但5年内nsclc的存活率仍不到20%。因此，迫切需要探索更加有效的创新方法来治疗癌症。
2、2018年诺贝尔生理学或医学奖被授予james p.allison和tasuku honjo以表彰他们在肿瘤免疫治疗领域的突破，标志着癌症治疗取得重大进展。在肿瘤微环境中，免疫功能处于抑制状态。检查点抑制剂以及免疫激动剂等具有激活先天或获得性免疫反应的功能，因此被用于肿瘤免疫治疗。其中免疫激动剂通过激活免疫细胞分泌各种细胞因子，从而参与识别肿瘤抗原和肿瘤分泌的有害因子，进一步杀死肿瘤。在临床实践中，免疫检查点抑制剂和免疫激动剂，如香菇多糖、灵芝多糖、pembrolizumab和atezolizumab，已被用于肿瘤治疗或肿瘤辅助治疗，以增强身体免疫力，从而获得令人满意的治疗结果。免疫调节剂在肿瘤治疗中发挥着越来越重要的作用，需要进一步的研究来了解其机制。
3、多糖是通过糖苷键连接单糖的生物聚合物。多糖在自然界中广泛分布，由于其多样性和显著的生物活性，如免疫调节、抗氧化特性
4、刺梨（ rosa roxburghii）属于蔷薇科植物，是一种珍贵的药食同源类植物。这种植物的果实富含维生素c，被认为具有极高的食用价值。刺梨果实可用于生产各种食品、饮料和保健品。刺梨果实在清除自由基、对抗癌症、免疫、预防动脉粥样硬化、治疗糖尿病和治疗其他疾病方面发挥着重要的药理作用。此外，刺梨中含有丰富的萜烯、单宁酸、有机酸、黄酮、多酚、多糖等有机化合物以及微量元素。其中刺梨多糖具有抗肿瘤效果，但是近年来国内外对刺梨果实中均一多糖的结构表征、抗肿瘤活性探索及机制研究较少。因此，期望将提取纯化得到的纯品刺梨多糖开发为具有免疫调节和抗肿瘤活性的药物。
技术实现思路
1、为了解决现有技术存在的问题，本专利技术提供了一种刺梨多糖及其制备方法、鉴定方法和应用。本专利技术制备方法简单，反应条件温和，可用于放大生产；且本专利技术对得到的高纯度刺梨多糖化学结构进行了鉴定，明确了其成分并为其药理活性机制提供结构依据。同时，本专利技术得到的刺梨多糖为刺梨多糖药物、质量控制及深入研究其构效关系和作用机制奠定基础。
2、本专利技术提供了一种刺梨多糖rrtp2-1。专利技术人通过对刺梨多糖粗品提纯分离得到刺梨多糖rrtp2-1，且经结构分析得到其分子量范围为7000-10000 da。
3、进一步地，所述刺梨多糖rrtp2-1的结构如图8所示。
4、同时，本专利技术也提供了一种刺梨多糖制备方法，包括以下步骤：
5、s1粉碎：将刺梨的干燥果实切成适当大小的块状，用水清洗干净、晾干；
6、s2水提：将步骤s1所得刺梨果实加入水中浸泡，加热提取，过滤，得提取液和药渣；
7、s3分级醇沉：
8、将步骤s2所得提取液减压浓缩，得浓缩液1；向浓缩液1中加入乙醇，至乙醇体积浓度为a%，静置，收集沉淀和上清液，得粗多糖rrt1和上清液1；
9、将上清液1减压浓缩，得浓缩液2；向浓缩液2中加入乙醇，至乙醇体积浓度为b%，静置，收集沉淀，得粗多糖rrt2；
10、其中10≤a＜b＜100；
11、s4纯化：
12、一次纯化：
13、将步骤s3所得粗多糖rrt1、rrt2进行除蛋白，透析，冻干，得刺梨多糖；
14、二次纯化：
15、将一次纯化后的多糖rrt2进行离子交换柱层析，用0~2 m的nacl进行梯度洗脱，使用苯酚-硫酸法跟踪洗脱曲线，根据洗脱曲线分别收集糖部分，浓缩、冷冻干燥得刺梨多糖rrt2-1；
16、将rrt2-1再进行凝胶柱层析，用水进行洗脱，利用苯酚-硫酸法检测洗脱曲线，根据洗脱曲线收集糖部分，浓缩、冷冻干燥，得rrtp2-1。
17、本专利技术人通过研究发现刺梨果实块状的优选大小为1~5 cm3；同时，本专利技术采用热水浸提与分级醇沉法相结合，乙醇浓度由低到高进行分级醇沉，对刺梨多糖进行初步分离，且高浓度乙醇能将极性大、水溶性好的多糖与极性小、水溶性差的多糖分离，解决了传统水煮法提取多糖导致其后期分离繁杂、困难的问题。
18、进一步地，所述步骤s2中水的添加量为所述刺梨果实重量的5~12倍，加热温度为80~100 ℃，提取时间1~10 h。
19、进一步地，所述步骤s3中减压浓缩温度为40~70 ℃，静置的时间为10~36 h。
20、另外，本专利技术还提供了一种刺梨多糖的鉴定方法，包括以下步骤：
21、取刺梨多糖样品rrtp2-1，完全酸水解，水解产物液pmp衍生化后液相色谱检测；
22、取刺梨多糖样品rrtp2-1，干燥，压片，红外光谱检测；
23、取刺梨多糖样品rrtp2-1，甲基化，水解、还原，乙酰化，进行gc-ms检测；
24、取刺梨多糖样品rrtp2-1溶于d2o，进行核磁共振分析。
25、本专利技术人为了进一步开发刺梨这一宝贵资源，发掘新药源，通过大量实验研究得到本专利技术：以刺梨果实为原料，采用水提醇沉法提取分离得到粗多糖，对提取的粗多糖进行脱蛋白，然后利用离子交换层析和凝胶柱层析方法纯化刺梨粗多糖，首次制备出一种新的刺梨多糖纯品，对此多糖纯品的理化性质、分子量、单糖组成等进行了系统的分析鉴定，成功得出了刺梨多糖的结构信息，其中刺梨多糖rrtp2-1为由葡萄糖、半乳糖以及阿拉伯糖组成的杂多糖，主链由→5)- α-l-ara f-(1→，→6)- α-d-glc p-(1→，→2,5)- α-l-ara f-(1→，→4,6)- 本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种刺梨多糖，其特征在于所述刺梨多糖RRTP2-1的结构如下所示：
2.如权利要求1所述的刺梨多糖RRTP2-1的制备方法，其特征在于，所述刺梨多糖RRTP2-1的结构如图8所示。
3.如权利要求1所述的刺梨多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
4. 如权利要求3所述的刺梨多糖的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中水的添加量为所述下刺梨果实重量的5~12倍，加热温度为80~100 ℃，提取时间1~10 h。
5. 如权利要求3所述的刺梨多糖的制备方法，其特征在于，所述步骤S3中减压浓缩温度为40~70 ℃，静置的时间为10~36 h。
6.如权利要求1-5所述的刺梨多糖的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：
7.如权利要求1所述的刺梨多糖在制备激活免疫的抗肿瘤药物中的应用。
【技术特征摘要】
1.一种刺梨多糖，其特征在于所述刺梨多糖rrtp2-1的结构如下所示：
2.如权利要求1所述的刺梨多糖rrtp2-1的制备方法，其特征在于，所述刺梨多糖rrtp2-1的结构如图8所示。
3.如权利要求1所述的刺梨多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
4. 如权利要求3所述的刺梨多糖的制备方法，其特征在于，所述步骤s2中水的添加量为所述下刺...
【专利技术属性】
技术研发人员：许婧，刘文慧，李娜，侯剑彤，江浩静，郭远强，
申请(专利权)人：南开大学，
类型：发明
国别省市：
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