【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于药物输送，涉及一种疏水性药物纳米制剂，具体涉及一类载疏水性抗癌药物紫草肟的纳米胶束的制备和应用。
技术介绍
1、传统化疗药中，有诸多为脂溶性的化合物，它们在临床应用中有很大的限制。改善疏水性药物的策略包括：设计前体药物，即通过结构改造增加化合物的水溶性，但通常会导致活性降低；利用乳化技术，即将疏水药物分散在油相中，但通常会有稳定性差的问题。随着纳米技术的出现，利用载体将药物包封于纳米颗粒内部逐渐成为一个解决药物疏水问题的可行办法，常见的载体包括脂质体、胶束等。胶束是由两亲性物质在水溶液中达到临界胶束浓度(cmc)时，通过分子间氢键、范德华力以及静电作用等自发形成的一种具有疏水内核和亲水外部的核壳结构。与脂质体内部的水环境不同，胶束的内部为疏水环境，根据相似相溶原理，其对疏水性药物更具有相容性，除此以外，胶束还具有在临界胶束浓度以上结构稳定、在血液中浓度较高等特点。然而，由于大多数聚合物分子通常为外源性物质，且分子量较大，进入体内后容易引发免疫反应，因此在增加药物溶解度的同时，还应该考虑材料的安全性以降低载体毒性。聚(ε-己内酯)-b-聚(2-乙基-2-噁唑啉)(pcl-peoz)是一种两亲性高分子材料，具有良好的体内长循环特点和生物相容性。pcl作为疏水段，具有结晶性和生物相容性，因为其熔融温度为60℃左右，在常温下与药物容易形成结晶，这样形成的疏水内核稳定性更高，提高了载药量以及胶束在体内循环的稳定性。peoz为亲水段，不但具有柔顺性、抑制蛋白吸附的功能，还具有ph敏感性。细胞内内体ph约为5.4左右，而在环境p
2、在过去二十年里，纳米药物在抗癌治疗中的研究呈指数增长。纳米技术是一种尺寸在几百纳米之间的制剂，以改善药物输送，提高治疗效果，减少副作用和克服耐药性为优势。纳米载体可以逃避肾脏清除，不能穿透正常血管中内皮细胞的紧密连接，却可以通过增强的血管通透性和滞留(epr)效应渗入血管结构异常的肿瘤组织。与常规药物疗法相比，使用纳米疗法治疗肿瘤具有明显的优势。第一，使用纳米载体可以改善难溶性药物的水溶性并增强组织通透性，以提高肿瘤化疗药物的生物利用度。第二，通过epr效应降低药物的全身毒性，增强对癌细胞的杀伤力。第三，降低癌细胞的药物外排能力，可在一定程度上保护肿瘤患者免于产生多药耐药性。然而被动靶向具有严重的局限性，例如肿瘤之间的显著异质性，药物在病灶部位的停留时间过短以及肿瘤细胞对药物的吸收过少等。在此基础上，为了增强细胞对药物的内吞作用，主动靶向递送系统的发展得到了逐步突破。主动靶向递送主要指通过携带特定配体的纳米载体与肿瘤细胞上过表达受体特异性结合，增强细胞对纳米颗粒的内吞，从而将药物定向输送到肿瘤细胞内。受体介导的主动靶向药物递送不仅能够借助受体配体的特异性结合来增强纳米制剂在肿瘤环境中的滞留，还能够通过其介导的内吞作用增加药物进入肿瘤细胞的机会，从而降低药物的全身毒性，进一步增强药物对病灶部位的杀伤力。
3、紫草肟(dmako)是上海交通大学李绍顺教授团队开发的一种经紫草素结构修饰改造而得到的新型紫草素衍生物(崔家华等人，dmako-20作为一种由肿瘤特异性cyp1b1酶激活的新型多靶点抗癌前药，分子药剂学，2019，7；16(1):409-421)。与传统抗癌药物不同，紫草肟本身毒性很小，因为它是通过肿瘤细胞特异性过表达细胞色素p450酶(cyp1b1)催化后产生活性物质来发挥作用的。已有研究发现，dmako对结直肠癌细胞具有显著的抑制效果，同时对人正常成纤维细胞等毒性很低，因此是一种极具潜力的抗肿瘤物质。然而dmako极强的疏水性导致其生物利用度很低，严重限制了其进一步的体内抗癌研究和应用。目前还没有有效制剂实现其体内有效输送。急需合适的输送体系可以确保其在体内安全高效地到达肿瘤部位，进一步发挥其优良的抗肿瘤活性。
4、西妥昔单抗是一种egfr抑制剂，临床上用于治疗转移性结直肠癌。它是一种人鼠嵌合型单克隆igg1抗体，可以靶向结合egfr产生拮抗作用，阻止受体二聚化的构象转变，诱导癌细胞凋亡并抑制癌细胞增殖，由于西妥昔单抗与egfr稳定的特异性结合，在药物递送系统的构建中，西妥昔单抗常常被用作修饰配体来靶向egfr阳性的病灶以提高抗肿瘤药物的有效性和安全性，即使患者出现kras突变，egfr失去对下游相关通路的控制，使得患者对西妥昔单抗本身的治疗应答大大降低，但受体配体的结合仍然可以介导纳米颗粒的内吞。大量以西妥昔单抗作为egfr靶向配体的研究结果表明，无论是否存在kras突变，偶联西妥昔单抗的纳米颗粒均可以被egfr高表达细胞识别并促进其被内吞，从而提高药物在肿瘤部位的浓度，增强药物对病灶部位的破坏能力，降低全身毒性，本专利技术利用特定胶束对疏水性药物具有良好的装载能力这一优势，来解决紫草肟不溶于水的问题，利用ph敏感性胶束将紫草肟靶向输送到结肠癌中，实现紫草肟和西妥昔单抗的联合靶向输送。
技术实现思路
1、为了克服现有技术中所存在的问题，例如现有疏水性药物和抗体联合在体内输送技术中的不足，本专利技术的目的在于提供一类载疏水性抗癌药物紫草肟的纳米胶束的制备和应用；具体提供一种疏水性药物如紫草肟等疏水性药物的纳米制剂，并在此基础上将抗体连接载药纳米颗粒形成抗体－纳米颗粒复合物。
2、也就是说提供一种可以紧密包裹疏水性药物形成稳定均一的纳米制剂、然后在其表面连有抗体，最终实现抗体连接的的体内长效循环并靶向特定细胞的药物传递体系；更具体来说，本专利技术是利用两亲性结晶性嵌段共聚物包裹疏水性药物来构建非靶向纳米制剂和一种抗体连接载药纳米颗粒(即前述非靶向纳米制剂)的抗体－纳米颗粒复合物，虽然本专利技术示例分别利用抗egfr单抗cetuximab和抗her2单克隆抗体与聚己内酯-聚(2-乙基-2-噁唑啉)(pcl-peoz-cooh)载紫草肟药物靶向特定细胞表面高效安全的纳米结晶胶束体系(targeted nanocrystalline micelles)，但其专利技术适合其他抗体和结晶性两亲性嵌段共聚物载疏水性化学药物的抗体－纳米颗粒复合物。
3、为了实现上述目的以及其他相关目的，本专利技术采用如下技术方案：
4、本专利技术提供了一类适用于载紫草肟的非靶向载药胶束，胶束载体具有壳-核结构，所述胶束载体的制备材料为两亲性材料，包括聚(ε-己内酯)-聚乙二醇(pcl-peg)、聚(ε-己内酯)-聚(2-乙基-2-噁唑啉)(pcl-peoz)、plga-peg或plga-peoz；疏水嵌段聚己内酯pcl或plga与疏水性化学药物共同形成壳-核结构的内核，亲水性嵌段聚乙二醇peg或聚(2-乙基-2-噁唑啉)(peoz)形成壳-核结构的外壳；所述疏水性化学本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一类适用于载紫草肟的非靶向载药胶束，所述胶束载体具有壳-核结构，所述胶束载体的制备材料为两亲性材料，包括聚(ε-己内酯)-聚乙二醇PCL-PEG、聚(ε-己内酯)-聚(2-乙基-2-噁唑啉)PCL-PEOz、PLGA-PEG或PLGA-PEOz；疏水嵌段聚己内酯PCL或PLGA与疏水性化学药物共同形成壳-核结构的内核，亲水性嵌段聚乙二醇PEG或聚(2-乙基-2-噁唑啉)PEOz形成壳-核结构的外壳；所述疏水性化学药物包括紫草肟。
2.一类适用于载紫草肟的靶向载药胶束，其包括如权利要求1所述的非靶向载药胶束和与所述非靶向载药胶束连接的靶向基团，所述靶向基团通过自身表面的-NH2与外壳表面PEG末端的-COOH形成酰胺键进行连接。
3.根据权利要求2所述的适用于载紫草肟的靶向载药胶束，其特征在于，所述非靶向载药胶束中，紫草肟的载药量为2～12％。
4.根据权利要求2所述的适用于载紫草肟的靶向载药胶束，其特征在于，所述靶向基团为靶向抗体，包括单克隆抗体的全抗，或是抗体的某个具有靶向功能性的片段；或者，所述靶向基团为靶向多肽。
5.根据
6.一种根据权利要求1所述的适用于载紫草肟的非靶向载药胶束的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
7.一种根据权利要求2所述的适用于载紫草肟的靶向载药胶束的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
8.根据权利要求7所述的适用于载紫草肟的靶向载药胶束的制备方法，其特征在于，步骤B1中，所述有机溶剂选自氯仿或四氢呋喃，所述有机溶剂与水的体积比为1:(10-30)。
9.根据权利要求7所述的适用于载紫草肟的靶向载药胶束的制备方法，其特征在于，步骤B1中，去除未包封的药物后采用透析和离心的方式进一步去除残留的有机溶剂。
10.根据权利要求8所述的适用于载紫草肟的靶向载药胶束的制备方法，其特征在于：步骤B1中，两亲性材料与疏水性化学药物的质量比为100:(1-12)；步骤B3中，非靶向载药胶束与靶向基团共混时，PEOz末端的-COOH与靶向基团表面的-NH2的摩尔比为(10-50)：1。
...【技术特征摘要】
1.一类适用于载紫草肟的非靶向载药胶束，所述胶束载体具有壳-核结构，所述胶束载体的制备材料为两亲性材料，包括聚(ε-己内酯)-聚乙二醇pcl-peg、聚(ε-己内酯)-聚(2-乙基-2-噁唑啉)pcl-peoz、plga-peg或plga-peoz；疏水嵌段聚己内酯pcl或plga与疏水性化学药物共同形成壳-核结构的内核，亲水性嵌段聚乙二醇peg或聚(2-乙基-2-噁唑啉)peoz形成壳-核结构的外壳；所述疏水性化学药物包括紫草肟。
2.一类适用于载紫草肟的靶向载药胶束，其包括如权利要求1所述的非靶向载药胶束和与所述非靶向载药胶束连接的靶向基团，所述靶向基团通过自身表面的-nh2与外壳表面peg末端的-cooh形成酰胺键进行连接。
3.根据权利要求2所述的适用于载紫草肟的靶向载药胶束，其特征在于，所述非靶向载药胶束中，紫草肟的载药量为2～12％。
4.根据权利要求2所述的适用于载紫草肟的靶向载药胶束，其特征在于，所述靶向基团为靶向抗体，包括单克隆抗体的全抗，或是抗体的某个具有靶向功能性的片段；或者，所述靶向基团为靶向多肽。
5.根...
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