【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医药，具体涉及一种蛋白琥珀酸铁的制备方法。
技术介绍
1、贫血(aniema)是指循环血液中的红细胞数或血红蛋白长期低于正常值的病理现象。通常贫血分为三类：缺铁性贫血(iron deficiency aneima，ida)、巨幼红细胞性贫血和再生障碍性贫血。缺铁性贫血产生原因主要为血液损失或铁吸收不足所致，如女性月经过多、消化系统溃疡、痔疮等慢性失血性贫血，营养不良、妊娠、儿童生长期等缺铁性贫血。
2、蛋白琥珀酸铁(iron-protein succinylate，简称isp)是一种多肽类蛋白补铁药物，用于治疗各种缺铁性贫血，于1987年由意大利泛马克大药厂研制并在在意大利成功上市。之后在西班牙、葡萄牙、希腊、阿根廷、韩国、中国等20多个国家等陆续上市并销售。
3、蛋白琥珀酸铁为红棕色粉末，无特别气味，是一种有机铁化合物，其中铁离子通过分子间的作用力，与酪蛋白的酰化位点结合，被包裹在酪蛋白分子结构内，其在酸碱度ph值小于4时呈沉淀物，而在酸碱度ph较高时(ph值为7.5～8时)又可变为可溶性物质。
4、由于上述这些性质，蛋白琥珀酸铁所含的铁受蛋白膜的保护，而不与胃液中盐酸和胃蛋白酶发生反应，因此不能被胃蛋白酶消化，服用后无铁离子的胃肠道刺激反应，不会造成胃粘膜损伤。但在中性ph值时可被胰蛋白酶水解，因此蛋白琥珀酸铁保持了酪蛋白对ph值的敏感特性，使其具有了肠靶向性。蛋白琥珀酸铁中的铁在十二指肠内开始释放，特别在空肠中释放，因为正常ph值的升高使得这种化合物重新变得可溶，并且使蛋白
5、总之蛋白琥珀酸铁吸收率不受胃酸减少、食物成分的影响，对胃肠道黏膜无刺激和腐蚀作用，避免了消化道的不良反应。尤其适用于妊娠与哺乳期妇女贫血的治疗，也适合有消化道溃疡，又伴缺铁性贫血的患者服用。
6、现有技术公开的蛋白琥珀酸铁的制备技术，一般步骤为，首先在酪蛋白中加入琥珀酸酐获得酰化的琥珀冼蛋白，之后获得的琥珀冼蛋白与三价铁离子进行载铁反应，得到蛋白琥珀酸铁，合成路线如下所示：
7、
8、如专利ep0939083a2记载的对蛋白琥珀酸铁的制备方法包含向酪蛋白溶液中加入丁二酸酐反应，通过不断加入氢氧化钠溶液保持反应液ph值6～9，反应完后，加酸使沉淀，使ph值1～4，过滤取沉淀；将沉淀分散在水中，强力搅拌，并加氢氧化钠溶液搅拌使溶解，向溶解所得的琥珀酸蛋白溶液中加入三氯化铁水溶液开始反应，反应溶液ph值从6～9缓缓下降至2～3，停止反应，过滤，取沉淀，即为蛋白琥珀酸铁粗品，该技术方案所制备得到的蛋白琥珀酸铁的铁含量为5.4％(重量比)。专利cn101321776a记载的蛋白琥珀酸铁制备其最终铁含量为5.1％～5.4％。现有技术采用传统的蛋白琥珀酸铁的制备方法制备出的产品的载铁量仅为5％左右，其主要原因为蛋白质为一种高分子化合物，铁和琥珀酸以络合的方式存在，传统的方法在蛋白质上接琥珀酸时，并未把蛋白质充分打开，由于空间位阻效应，导致琥珀酸接枝率低，同时由于空间位阻效应，导致三价铁和蛋白质上的琥珀酸络合率低，从而导致采用传统方法制备出来的琥珀酸蛋白铁的载铁量低，进而导致给药剂量高，且不利于开发成给药及贮存方便的传统固体制剂，现有技术制备的蛋白琥珀酸铁普遍存在蛋白琥珀酸铁溶解性差、溶解速度慢，且配制所得口服溶液黏度大、沉降物较多等问题。
9、酪蛋白在酰化反应中被酰化的氨基与酪蛋白初始游离氨基的百分比被称作酰化度。酰化度越高的琥珀酰蛋白，其水溶性越好、水溶液黏度越低、载铁能力越强，相应最终制备所得蛋白琥珀酸铁水溶性好、水溶液黏度低。因此，急需提高酪蛋白酰化度以此达到提高载铁能力及大其水溶解性以及降低其水溶液黏度。
10、专利cn102838667a记载的蛋白琥珀酸铁制备方案，通过控制酪蛋白与丁二酸酐投入量及控制丁二酸酐的滴加速度，酰化度提升至95％～96.8％；专利cn108864271a记载通过加入大量的丁二酸酐(酪蛋白量的2.5～5倍)及多次控制加入量(20次)，酰化度提高至96％～99％。现有技术提高酰化度的方法，一方面需要加入大量的丁二酸酐，导致生产成本增加，过量的丁二酸酐酰化完成后水解成丁二酸，大量的丁二酸残留杂质不易去除，导致最终产品丁二酸残留超标，影响产品质量；另一方面，制备过程丁二酸酐加入速度是影响酰化度的重要因素，现有技术均是丁二酸酐添加均为少量多次，应用到大规模生产中，较难操作控制。
11、此外专利cn111004314a在蛋白质上接琥珀酸及在琥珀酰蛋白与铁络合反应两个过程中，通过加入蛋白质结构展开剂(2-巯基乙醇、2-硫苏糖醇等)，使得琥珀酸接枝率提高，fe3+的络合率提高，从而提高蛋白琥珀酸铁的载铁量，然后恢复蛋白质空间结构，使得铁离子包裹在蛋白质中，形成屏障。但是由于所用的蛋白质展开剂本身也具有易与琥珀酸酐反应的羟基或巯基，会与酪蛋白本身的氨基竞争反应，使得酪蛋白的酰化度降低，且酰化过程及载铁过程两次蛋白结构展开剂如2-巯基乙醇添加导致2-巯基乙醇残留问题，最终产品需要额外控制测定2-巯基乙醇残存。
12、综上，鉴于目前在工艺生产便利性及提高蛋白琥珀酸铁载铁量以及相关中间体酰化度时存在以上诸多不足。因此，开发一种易于实现工业化生产及获得高酰化度、高载铁量的蛋白琥珀酸铁的方法仍是目前需要解决的问题。
技术实现思路
1、为了克服现有技术问题，本专利技术目的在于提供一种操作简便，制备高酰化度、高载铁量的蛋白琥珀酸铁的方法。
2、本专利技术的具体技术方案如下：
3、本专利技术涉及一种蛋白琥珀酸铁的制备方法，包括如下步骤：
4、(1)酰化：将酪蛋白加入纯化水中，向其加入氢氧化钠溶液调节溶液ph，搅拌溶解后，加入胰蛋白酶，边搅拌边加入琥珀酸酐，并滴加氢氧化钠保持溶液ph稳定，反应完毕，向反应液中滴加盐酸调节溶液ph，析出酰化蛋白，过滤，收集固体，得琥珀酰蛋白；
5、(2)载铁：将步骤(1)所得的琥珀酰蛋白加入纯化水中，向其加入氢氧化钠溶液调节溶液ph，搅拌溶解后，向溶液中缓慢滴加三氯化铁溶液，并滴加氢氧化钠保持溶液ph稳定，搅拌反应完毕后，向反应液中滴加盐酸调节溶液ph，析出蛋白琥珀酸铁，过滤，水洗，得蛋白琥珀酸铁粗品；
6、(3)精制：将步骤(2)所得的蛋白琥珀酸铁粗品加入纯化水中，向其加入氢氧化钠溶液调剂ph使粗品溶解，控制溶液温度，采用膜热过滤除不溶性杂质，所得滤液加盐酸调节ph，析出固体，过滤，纯化水洗涤，滤饼冷冻干燥后得蛋白琥珀酸铁。
7、优选地，步骤(1)所述纯化水加入量为酪蛋白质量的10～15倍。
8、优选地，步骤(1)所述氢氧化钠溶液浓度为1～6mol/l，进一步优选4mol/l。
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【技术保护点】
1.一种蛋白琥珀酸铁的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的蛋白琥珀酸铁的制备方法，其特征在于，步骤1)所述酪蛋白与琥珀酸酐的投料质量比为1:0.1～0.5，优选为1:0.2～0.4。
3.根据权利要求1所述的蛋白琥珀酸铁的制备方法，其特征在于，步骤1)所述的加氢氧化钠调节溶液的pH值为6～8.5，优选为7.5～8.5。
4.根据权利要求1所述的蛋白琥珀酸铁的制备方法，其特征在于，步骤1)所述的酪蛋白与胰蛋白酶投料质量比为1：0.005～0.02，优选为0.01～0.015。
5.根据权利要求1所述的蛋白琥珀酸铁的制备方法，其特征在于，步骤2)所述的加氢氧化钠调节溶液的pH值为7～11。
6.根据权利要求1所述的蛋白琥珀酸铁的制备方法，其特征在于，步骤2)所述氯化铁的投料量为酪蛋白质量的0.15～0.60倍。
7.根据权利要求1所述的蛋白琥珀酸铁的制备方法，其特征在于，步骤2)所三氯化铁水溶液述配置浓度为5wt％～20wt％。
8.根据权利要求1所述的蛋白琥珀酸铁的制备方法
9.根据权利要求1所述的蛋白琥珀酸铁的制备方法，其特征在于，步骤3)所述溶液过滤的滤膜为1.2μm微孔滤膜或1.2μm陶瓷膜。
10.根据权利要求1所述的蛋白琥珀酸铁的制备方法，其特征在于，步骤3)所述热过滤温度为60～80℃，优选为65～75℃。
...【技术特征摘要】
1.一种蛋白琥珀酸铁的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的蛋白琥珀酸铁的制备方法，其特征在于，步骤1)所述酪蛋白与琥珀酸酐的投料质量比为1:0.1～0.5，优选为1:0.2～0.4。
3.根据权利要求1所述的蛋白琥珀酸铁的制备方法，其特征在于，步骤1)所述的加氢氧化钠调节溶液的ph值为6～8.5，优选为7.5～8.5。
4.根据权利要求1所述的蛋白琥珀酸铁的制备方法，其特征在于，步骤1)所述的酪蛋白与胰蛋白酶投料质量比为1：0.005～0.02，优选为0.01～0.015。
5.根据权利要求1所述的蛋白琥珀酸铁的制备方法，其特征在于，步骤2)所述的加氢氧化钠调节溶液的ph值为7～11。
...【专利技术属性】
技术研发人员：张贵民，崔维琛，齐敏，
申请(专利权)人：山东新时代药业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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