【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微生物鉴定，尤其涉及一种动物双歧杆菌乳亚种bl-99菌株的鉴定方法、所用检测引物、检测试剂盒及相关应用。
技术介绍
1、动物双歧杆菌乳亚种（ bifidobacterium animalis subsp. lactis）属于革兰氏阳性细菌，具有不运动、无芽孢、严格厌氧，具有易培养、产量高、生长速度快、耐储存等优势，已成为益生菌应用中最广泛的双歧杆菌之一，因具备良好的安全性和长久的安全食用历史，已被收录至中国《可用于食品的菌种名单》、欧盟ops名单和美国gras名单中。动物双歧杆菌乳亚种bl-99是已在cn110964657b中公开的菌株，该菌株分离自中国健康婴幼儿肠道，研究表明其具备调节肠道菌群平衡、缓解消化不良、缓解肠道炎症、改善便秘、改善骨质疏松等益生功效。
2、益生菌的功能性和安全性具有菌株特异性，在菌株水平对益生菌开展精准鉴定是功能性开发、安全性评价及产业化应用的重要基础。常规的检测手段一般只能鉴定到微生物种水平，在菌株水平实现特定益生菌的快速精准鉴定是行业目前面临的共性难题。因此，通过针对性地开发动物双歧杆菌乳亚种bl-99菌株的专属鉴定方法，实现其菌株水平的快速、精准鉴定，是其知识产权保护及全球商业化生产应用的重要技术保障。
技术实现思路
1、本案专利技术人在研究中发现，动物双歧杆菌的厌氧粪卟啉氧化酶hemn编码基因序列中对应seq id no:1所示核苷酸序列第861位的碱基具有单核苷酸多态性
2、一方面，本专利技术提供了对应seq id no:1所示核苷酸序列第861位的多态性位点和/或检测该多态性位点的试剂在鉴定待测菌样本中是否包含动物双歧杆菌乳亚种bl-99菌株中的应用。
3、根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术中，所述多态性位点的碱基为g，待测菌样本中包含动物双歧杆菌乳亚种bl-99。
4、另一方面，本专利技术还提供了一种鉴定待测菌样本中是否包含动物双歧杆菌乳亚种bl-99菌株的方法，该方法包括：
5、检测待测菌的厌氧粪卟啉氧化酶hemn基因序列中对应seq id no:1所示核苷酸序列第861位的碱基是否为g，从而鉴定待测菌样本是否包含动物双歧杆菌乳亚种bl-99菌株。
6、根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术中，可采用现有技术中任何可行的方法检测待测菌的厌氧粪卟啉氧化酶hemn基因序列中对应seq id no:1所示核苷酸序列第861位的碱基是否为g。
7、在本专利技术的一些具体实施方案中，采用pcr方法检测待测菌的厌氧粪卟啉氧化酶hemn基因序列中对应seq id no:1所示核苷酸序列第861位的碱基是否为g。
8、根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术中，pcr方法中，采用针对seq id no:1所示核苷酸序列或其特异性片段设计的引物对待测菌的基因组dna进行扩增；
9、其中，所述引物的目的扩增产物覆盖seq id no:1所示核苷酸序列第861位。
10、根据本专利技术的优选具体实施方案，所述引物的目的扩增产物的长度不超过2000bp，例如可以是100-2000bp。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述引物的目的扩增产物的长度为100-1000bp。
11、根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术中，所述引物包括seq id no:2、seq id no:3、seq id no:4、seq id no:5所示引物中的一种或多种。
12、根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术中，所述引物包括seq id no:2和seq id no:3所示引物。
13、根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术中，所述待测菌为动物双歧杆菌。
14、根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术中，所述待测菌样本可为来源于菌剂或含菌发酵食品的样本。
15、另一方面，本专利技术还提供了一种核酸分子，其可用于编码厌氧粪卟啉氧化酶hemn，其中，所述核酸分子对应seq id no:1所示核苷酸序列第861位的碱基为g。
16、另一方面，本专利技术还提供了一种核酸分子或其特异性片段，其中，所述核酸分子包括如seq id no:1所示核苷酸序列，所述特异性片段为来源于seq id no:1所示核苷酸序列、且包含seq id no:1所示核苷酸序列第861位碱基、并且为动物双歧杆菌专有的核酸片段。
17、在本专利技术的一些具体实施方案中，所述特异性片段为来源于seq id no:1所示核苷酸序列、且包含seq id no:1所示核苷酸序列第861位碱基的长度至少100bp、至少150bp、至少200bp、至少250bp、至少300bp、至少350bp、至少400bp、至少450bp、至少500bp、至少550bp、至少600bp、至少650bp、至少700bp、至少750bp、至少800bp、至少850bp、至少900bp、至少950bp、至少1000bp、至少1050bp、至少1100bp、至少1150bp或至少1200bp的片段。
18、另一方面，本专利技术还提供了一种引物，其中，所述引物为特异性扩增所述的核酸分子或其特异性片段的引物，并且所述引物的目的扩增产物覆盖seq id no:1所示核苷酸序列第861位。
19、根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术中，所述引物包括seq id no:2、seq id no:3、seq id no:4、seq id no:5所示引物中的一种或多种。
20、根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术中，所述引物包括seq id no:2和seq id no:3所示引物。
21、另一方面，本专利技术还提供了一种引物，其中，所述引物为特异性扩增所述的核酸分子或其特异性片段的引物，并且所述引物的核苷酸序列覆盖seq id no:1所示核苷酸序列第861位。
22、另一方面，本专利技术还提供了一种鉴定动物双歧杆菌乳亚种bl-99的检测试剂盒，其中，所述试剂盒包括本专利技术所述的特异性引物。
23、根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术中，所述试剂盒还包括特异性检测所述的核酸分子或其特异性片段的探针。
24、在本专利技术的一些具体实施方案中，本专利技术的动物双歧杆菌乳亚种bl-99的鉴定方法，至少包括以下步骤：
25、s1、提取待测菌株的基因组dna；
26、s2、针对seq id no:1所示的核苷酸序列设计引物，引物的目的扩增产物需要覆盖seq id no:1的多态性位点；
27、s3、利用引物对基因组dna进行扩增，获得实际扩增产物；
28、s4、如实际扩增产物与目的扩增产物的长度不一致，则待测菌株鉴定为非动物双歧杆菌；
29、s5、如实际扩增产物与本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.对应SEQ ID NO:1所示核苷酸序列第861位的多态性位点和/或检测该多态性位点的试剂在鉴定待测菌样本中是否包含动物双歧杆菌乳亚种BL-99菌株中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述多态性位点的碱基为G，待测菌样本中包含动物双歧杆菌乳亚种BL-99。
3.一种鉴定待测菌样本中是否包含动物双歧杆菌乳亚种BL-99菌株的方法，其特征在于，该方法包括：
4. 根据权利要求3所述的方法，其特征在于，采用PCR方法检测待测菌的厌氧粪卟啉氧化酶HemN基因序列中对应SEQ ID NO:1所示核苷酸序列第861位的碱基是否为G。
5. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于，PCR方法中，采用针对SEQ ID NO:1所示核苷酸序列或其特异性片段设计的引物对待测菌的基因组DNA进行扩增；
6. 根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述引物包括SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5所示引物中的一种或多种。
7. 根据权利要求5所述的方法，其特
8.根据权利要求3-7任一项所述的方法，其特征在于，所述待测菌为动物双歧杆菌。
9.根据权利要求3-7任一项所述的方法，其特征在于，所述待测菌样本为来源于菌剂或含菌发酵食品的样本。
10. 一种核酸分子，其用于编码厌氧粪卟啉氧化酶HemN，其特征在于，所述核酸分子对应SEQ ID NO:1所示核苷酸序列第861位的碱基为G。
11. 一种核酸分子或其特异性片段，其特征在于，所述核酸分子包括如SEQ ID NO:1所示核苷酸序列，所述特异性片段为来源于SEQ ID NO:1所示核苷酸序列、且包含SEQ ID NO:1所示核苷酸序列第861位碱基、并且为动物双歧杆菌专有的核酸片段。
12. 一种引物，其特征在于，所述引物为特异性扩增权利要求11所述的核酸分子或其特异性片段的引物，并且所述引物的目的扩增产物覆盖SEQ ID NO:1所示核苷酸序列第861位。
13. 根据权利要求12所述的引物，其特征在于，所述引物包括SEQ ID NO:2、SEQ IDNO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5所示引物中的一种或多种。
14. 根据权利要求12所述的引物，其特征在于，所述引物包括SEQ ID NO:2和SEQ IDNO:3所示引物。
15. 一种引物，其特征在于，所述引物为特异性扩增权利要求11所述的核酸分子或其特异性片段的引物，并且所述引物的核苷酸序列覆盖SEQ ID NO:1所示核苷酸序列第861位。
16.一种鉴定动物双歧杆菌乳亚种BL-99的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求12-15任一项所述的引物。
17.根据权利要求16所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括特异性检测权利要求11所述的核酸分子或其特异性片段的探针。
...【技术特征摘要】
1.对应seq id no:1所示核苷酸序列第861位的多态性位点和/或检测该多态性位点的试剂在鉴定待测菌样本中是否包含动物双歧杆菌乳亚种bl-99菌株中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述多态性位点的碱基为g，待测菌样本中包含动物双歧杆菌乳亚种bl-99。
3.一种鉴定待测菌样本中是否包含动物双歧杆菌乳亚种bl-99菌株的方法，其特征在于，该方法包括：
4. 根据权利要求3所述的方法，其特征在于，采用pcr方法检测待测菌的厌氧粪卟啉氧化酶hemn基因序列中对应seq id no:1所示核苷酸序列第861位的碱基是否为g。
5. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于，pcr方法中，采用针对seq id no:1所示核苷酸序列或其特异性片段设计的引物对待测菌的基因组dna进行扩增；
6. 根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述引物包括seq id no:2、seq id no:3、seq id no:4、seq id no:5所示引物中的一种或多种。
7. 根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述引物包括seq id no:2和seq id no:3所示引物。
8.根据权利要求3-7任一项所述的方法，其特征在于，所述待测菌为动物双歧杆菌。
9.根据权利要求3-7任一项所述的方法，其特征在于，所述待测菌样本为来源于菌剂或含菌发酵食品的样本。
10. 一种核酸分子，其用于编码厌氧粪卟啉氧化...
【专利技术属性】
技术研发人员：蒋秋悦，姚粟，洪维鍊，何剑，葛媛媛，宋智泉，陈胜，马霞，赵雯，刘艺茹，
申请(专利权)人：内蒙古伊利实业集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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