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【技术实现步骤摘要】
本申请涉及生物,尤其涉及一种筛选结直肠癌性别偏好的微生物的方法及其应用。
技术介绍
1、目前结直肠癌(crc)是常见癌症死亡的原因之一,每年约有120万新增病例和600000人死亡。而根据全球的癌症统计,男性的年龄标准化发病(23.6/100000人年)比女性(16.3/100000人年)高45%(abancens et al.2020)。由于crc的发病机制具有多因素性及不确定性,因此给临床的诊断和治疗增加了一定的难度。
2、鉴于crc的病因目前仍不完全清楚,现阶段研究的主要焦点集中在肠道微生物群与结直肠癌的相互作用上,而生活习惯及环境因素对crc的影响主要依赖于肠道微生物菌群稳态的改变,其中,肠道微生物菌群是指栖息在肠道内并与宿主共生的微生物。现有研究表明,肠道微生物菌群失调将会影响机体的正常免疫反应而导致肠道慢性炎症,从而促进crc的发展,与健康个体肠道微生物群相比,crc患者的肠道微生物群(如拟杆菌属、埃希氏菌属、梭杆菌属和卟啉单胞菌属)具有更高的物种丰富度,从而推动结直肠癌的发生。同时,在crc患者肠道内产生的保护肠道类丁酸盐的细菌如roseburia和fecalibacterium也显著减少,而丁酸盐可以减轻炎症,并能抑制癌细胞的生长和诱导细胞凋亡。因此可以通过改善肠道微生物预防和减缓肠道结直肠癌的发展。
3、目前基于肠道微生物的cpc预防需要先进行cpc的肠道有害菌和有益菌的分析,而一般采用宏基因组的方式分析粪便,但是目前的宏基因组分析都局限在单一性别,没有针对两种性别的结直肠癌小鼠有害菌或
技术实现思路
1、本申请提供了一种筛选结直肠癌性别偏好的微生物的方法及其应用,以解决现有技术中。
2、第一方面,本申请提供了一种筛选结直肠癌性别偏好的微生物的方法,所述方法包括:
3、采用高脂饲料分别饲喂雌性和雄性的apcmin/+结直肠癌动物模型至死亡,并分别收集雌性和雄性的所述动物模型的粪便和肠道组织;
4、分别根据雌性和雄性的所述肠道组织,判断雌性和雄性的所述动物模型是否存在表型差异;
5、若是,则分别保存雌性和雄性的所述粪便;
6、分别将所述粪便移植到不同性别的伪无菌动物模型中进行共培养,以进行性别偏向验证,并判断所述粪便是否具有肠道性别偏向;
7、若是,则对所述粪便进行宏基因组分析,并进行代谢组流程分析和关联统计分析,分别得到雌性和雄性的分析结果;
8、分别对所述分析结果采用结直肠癌细胞进行验证,并筛选出具有结直肠癌雌性偏向的肠道微生物和具有结直肠癌雄性偏向的肠道微生物。
9、可选的,所述别根据雌性和雄性的所述肠道组织,判断雌性和雄性的所述动物模型是否存在表型差异,具体包括:
10、统计雌性和雄性的所述肠道组织中肠腺瘤及肠腺瘤相关细胞的分布数据,并对所述雌性和雄性的肠道组织进行分析,得到肠道组织分析结果;
11、根据所述肠道组织分析结果,判断雌性和雄性的所述动物模型是否存在表型差异;
12、若是,则分别保存雌性和雄性的所述粪便。
13、可选的,所述统计雌性和雄性的所述肠道组织中肠腺瘤及肠腺瘤相关细胞的分布数据,并对所述雌性和雄性的肠道组织进行分析,得到肠道组织分析结果,具体包括:
14、分别统计雌性和雄性的所述肠道组织中肠腺瘤的形态、ki-67阳性细胞和杯状细胞的数量;
15、分别对雌性和雄性的所述肠道组织依次进行染色,后进行蛋白免疫痕迹分析,得到包含肠道组织中肠腺瘤的形态、ki-67阳性细胞和杯状细胞的数量的肠道分析结果。
16、可选的,所述染色包括he染色、免疫组织化学染色和pas染色。
17、可选的,所述对所述粪便进行宏基因组分析,并进行代谢组流程分析和关联统计分析,分别得到雌性和雄性的分析结果,具体包括:
18、分别构建雌性和雄性的所述粪便中肠道微生物群的pe文库;
19、分别对雌性和雄性的所述pe文库进行宏基因组分析,后进行代谢组流程分析,分别得到雌性和雄性肠道微生物的差异微生物菌种和雌性和雄性动物模型的差异代谢物;
20、分别对雌性和雄性的所述差异微生物菌种和所述差异代谢产物进行关联分析,后进行统计学分析验证,得到差异微生物菌种和差异代谢物的相关性分析结果。
21、可选的,分别对所述分析结果采用结直肠癌细胞进行验证,并筛选出具有结直肠癌雌性偏向的肠道微生物和具有结直肠癌雄性偏向的肠道微生物,具体包括:
22、根据分析结果所得的肠道微生物菌种,分别向结直肠癌细胞中加入预设感染度的所述肠道微生物菌种进行培养,统计结直肠癌细胞的数量;
23、根据所述结直肠癌细胞的数量变化,对所述肠道微生物菌种进行筛选,得到具有结直肠癌雌性偏向的肠道微生物和具有结直肠癌雄性偏向的肠道微生物;
24、其中,所述预设感染度为100。
25、可选的,所述肠道组织包括小肠和/或大肠。
26、可选的,所述代谢组流程分析依次包括非靶向代谢组测序、数据预处理和差异代谢物分析。
27、可选的,所述具有结直肠癌雌性偏向的肠道微生物为金拟杆菌;
28、所述具有结直肠癌雄性偏向的肠道微生物为阿克曼氏菌。
29、第二方面,本申请提供了一种筛选结直肠癌性别偏好的微生物的方法的应用,所述应用包括将第一方面所述的方法所得的微生物用于改善肠道炎症或辅助精准治疗结直肠癌中。
30、本申请实施例提供的上述技术方案与现有技术相比具有如下优点:
31、本申请实施例提供的一种筛选结直肠癌性别偏好的微生物的方法,区别于传统的针对动物模型的宏基因组测序集中在单一性别上的方法,通过先对apcmin/+结直肠癌动物模型的表型差异进行判断,明确动物模型具有肠道性别偏向,再针对动物模型所分离出的粪便采用伪无菌动物模型进行验证,从而进一步确认动物模型具有肠道性别偏向,再对分离出的粪便进行宏基因组分析、代谢组流程分析和关联统计分析,精准的筛分出影响结直肠癌的肠道微生物群,再采用结直肠癌细胞进行验证,从而能针对不同的性别准确的分析出与结直肠癌相关的有害菌和有益菌,进而准确的得到结直肠癌性别偏好性的有益肠道微生物。
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1.一种筛选结直肠癌性别偏好的微生物的方法,其特征在于,所述方法包括:
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述分别根据雌性和雄性的所述肠道组织,判断雌性和雄性的所述动物模型是否存在表型差异,具体包括:
3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述统计雌性和雄性的所述肠道组织中肠腺瘤及肠腺瘤相关细胞的分布数据,并对所述雌性和雄性的肠道组织进行分析,得到肠道组织分析结果,具体包括:
4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述染色包括HE染色、免疫组织化学染色和PAS染色。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述对所述粪便进行宏基因组分析,并进行代谢组流程分析和关联统计分析,分别得到雌性和雄性的分析结果,具体包括:
6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述分别对所述分析结果采用结直肠癌细胞进行验证,并筛选出具有结直肠癌雌性偏向的肠道微生物和具有结直肠癌雄性偏向的肠道微生物,具体包括:
7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述肠道组织包括小肠和/或大肠。
8.根据权利要求
9.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述具有结直肠癌雌性偏向的肠道微生物为金拟杆菌;
10.一种筛选结直肠癌性别偏好的微生物的方法的应用,其特征在于,所述应用包括将如权利要求1-9任一项所述的方法所得的微生物用于改善肠道炎症或辅助精准治疗结直肠癌中。
...【技术特征摘要】
1.一种筛选结直肠癌性别偏好的微生物的方法,其特征在于,所述方法包括:
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述分别根据雌性和雄性的所述肠道组织,判断雌性和雄性的所述动物模型是否存在表型差异,具体包括:
3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述统计雌性和雄性的所述肠道组织中肠腺瘤及肠腺瘤相关细胞的分布数据,并对所述雌性和雄性的肠道组织进行分析,得到肠道组织分析结果,具体包括:
4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述染色包括he染色、免疫组织化学染色和pas染色。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述对所述粪便进行宏基因组分析,并进行代谢组流程分析和关联统计分析,分别得到雌性和雄性的分析结果,具体包括:<...
【专利技术属性】
技术研发人员:陈振夏,王玲,涂懿璇,陈露,杨淑乔,于可纯,
申请(专利权)人:华中农业大学,
类型:发明
国别省市:
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