【技术实现步骤摘要】
本申请涉及医疗检测，尤其涉及一种利用液相色谱-串联质谱检测短链脂肪酸的方法。
技术介绍
1、短链脂肪酸(scfas)主要指含有1～6个碳原子(c1-c6)的脂肪酸，包括甲酸、乙酸、草酸、乙醇酸以及参与三羧酸循环的丙酮酸、柠檬酸、苹果酸、α-酮戊二酸、富马酸、琥珀酸等。scfas作为一类重要的代谢物小分子，主要由未消化吸收的的碳水化合物经结肠厌氧菌酵解产生，scfas不仅是宿主及微生物的能量来源，而且能通过多种代谢途径被多种外周组织利用，反映特定生物系统的代谢和生化状态，为疾病的诊断和预后提供独特的信息。例如三羧酸循环是需氧生物体内普遍存在的代谢途径，是机体将糖或其它物质氧化而获得能量最有效的方式，三羧酸循环作为人体重要代谢途径，该途径的代谢紊乱与糖尿病，肾脏疾病和癌症等许多疾病有着直接或间接的联系；又如草酸作为一种二羧酸，几乎全部由肾脏排泄，易在肾小管形成结晶，草酸的测定有利于高草酸尿症的筛查和诊断，尤其是对于原发性高草酸尿症的筛查，可避免患者在婴幼儿时期产生不可逆的肾损伤，因此对scfas的准确测定有利于scfas相关临床研究的开展和临床诊断的实施。
2、目前scfas通常采用分光光度法、酶学法、气相色谱、高效液相色谱或离子对色谱方法进行检测，这些检测方法存在检测灵敏度有限、重现性较差或前处理过程复杂的缺点，且很难实现各种不同低分子量有机酸的同时测定。虽然随着液相色谱串联质谱技术的发展，使得该技术在非挥发性极性化合物的分析方面具有独特的优势，并成为低分子量有机酸测定最有前景的技术之一。但实际上由于低分子量有机酸的极
技术实现思路
1、本申请提供了一种利用液相色谱-串联质谱检测短链脂肪酸的方法，以解决现有技术中scfas难以同时准确测定的技术难题。
2、第一方面，本申请提供了一种利用液相色谱-串联质谱检测短链脂肪酸的方法，所述方法包括：
3、混合待测样本和内标工作液，后加入含氨基的衍生剂进行衍生反应，并进行冷却和离心，得到上清液；
4、将上清液稀释后得到待测液，后采用液相色谱-串联质谱对待测液进行检测，并通过校准曲线进行计算，得到短链脂肪酸的含量。
5、可选的，所述待测样本和所述含氨基衍生剂的体积比为1:1～1:3。
6、可选的，所述含氨基衍生剂包括4-甲基-1,2-苯二胺、邻苯二胺和4,5-二甲氧基-1,2-苯二胺中的至少一种。
7、可选的，所述衍生反应的温度为110℃～130℃，所述衍生反应的时间为15min～25min。
8、可选的，所述待测样本和所述内标工作液的体积比为1:6～1:12。
9、可选的，所述待测样本的取样量为10μl～100μl。
10、可选的，所述离心的转速≥12000rpm，所述离心的时间为5min～15min。
11、可选的，所述上清液所用稀释溶剂为含有机溶剂的水溶液，所述水溶液的中有机溶剂的百分含量为1％～30％。
12、可选的，所述液相色谱-串联质谱包括液相色谱，所述液相色谱的色谱柱为反相色谱柱，所述液相色谱的柱温为30℃～50℃，所述液相色谱的进样量为2μl～10μl，所述液相色谱的流速为0.2ml/min～0.5ml/min。
13、可选的，所述液相色谱采用梯度洗脱方式进行色谱分离，所述梯度洗脱的流动相a包括含甲酸的水溶液，所述梯度洗脱的流动相b包括含甲酸的乙腈溶液。
14、可选的，所述液相色谱串联质谱中质谱包括电喷雾离子源，所述质谱在正负离子下采用多反应监测(mrm)模式进行检测；
15、所述质谱的正离子模式下离子源参数包括气帘气：25psi～35psi，碰撞气：8psi～10psi，离子源电压：4000v～5500v，离子源温度：450℃～550℃，雾化气：35psi～45psi，辅助加热气：45psi～55psi。负离子模式下离子源参数包括：气帘气：25psi～35psi，碰撞气：8psi～10psi，离子源电压：-4000v～-5000v，离子源温度：450℃～550℃，雾化气35psi～45psi，辅助加热气：45psi～55psi。
16、本申请实施例提供的上述技术方案与现有技术相比具有如下优点：
17、本申请实施例提供的一种利用液相色谱-串联质谱检测短链脂肪酸的方法，通过在短链脂肪酸的检测过程中引入液相色谱串联质谱，在待测样本中加入内标工作液和含氨基衍生剂，通过内标工作液对待测样本中少量蛋白进行沉淀，因此无需固相萃取，同时内标工作溶液可以使得待测样本更接近色谱流动相的组成和极性，有利于降低背景化学噪音的影响，提高信噪比；而引入含氨基衍生剂可以提高低分子量有机酸在液相色谱上的保留能力，且有利于提高质谱响应信号，并提高待测样本的热稳定性，避免待测样本中短链脂肪酸的热降解，从而方便液相色谱串联质谱检测的快速进行，并且衍生剂的使用可减少在检测过程中因峰拖尾所造成的重复进样和试验，进一步提高液相色谱串联质谱检测的准确性；再对衍生反应后的上清液进行稀释，可以改变溶液组成使其更接近于流动相，从而进一步降低背景化学噪音的影响，提高信噪比，以此提高检测的准确性。此外，本方法衍生时间短、试剂成本低、样本用量小，有利于实现大规模的临床样本检测。
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1.一种利用液相色谱-串联质谱检测短链脂肪酸的方法，其特征在于，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待测样本和所述含氨基衍生剂的体积比为1:1～1:3。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述含氨基衍生剂包括：4-甲基-1,2-苯二胺、邻苯二胺和4,5-二甲氧基-1,2-苯二胺中的至少一种。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述衍生反应的温度为110℃～130℃，所述衍生反应的时间为15min～25min。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待测样本和所述内标工作液的体积比为1:6～1:12。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待测样本的取样量为10μL～100μL。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述离心的转速≥12000rpm，所述离心的时间为5min～15min。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述上清液所用稀释溶剂为含有机溶剂的水溶液，所述水溶液的中有机溶剂的百分含量为1％～30％。
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