System.ArgumentOutOfRangeException: 索引和长度必须引用该字符串内的位置。 参数名: length 在 System.String.Substring(Int32 startIndex, Int32 length) 在 zhuanliShow.Bind() 一种鼠抗克柔念珠菌甘露聚糖杂交瘤细胞株及单克隆抗体制造技术_技高网

一种鼠抗克柔念珠菌甘露聚糖杂交瘤细胞株及单克隆抗体制造技术

技术编号:42499534 阅读:15 留言:0更新日期:2024-08-22 14:11
本发明专利技术提供一种抗克柔念珠菌甘露聚糖杂交瘤细胞株及单克隆抗体,通过小鼠杂交瘤单克隆抗体筛选及RT‑PCR法克隆Ig可变区基因,获得稳定分泌抗克柔念珠菌甘露聚糖单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其可变区序列,并用ELISA方法对抗体包容性、特异性、抗体效价进行了鉴定,为抗克柔念珠菌甘露聚糖基因工程抗体的研发奠定了基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于抗体制备,尤其是涉及鼠抗克柔念珠菌甘露聚糖杂交瘤细胞株,单克隆抗体及应用。


技术介绍

1、假丝酵母菌属( candida)隶属子囊菌门,又称为念珠菌,是一类常见的条件致病菌。通过侵犯宿主的粘膜和组织致病,引发局部及全身的炎症反应。念珠菌属的真菌种类繁多,但能对人致病的仅有几种,以白假丝酵母菌即白色念珠菌最常见,致病力最强,其次为热带假丝酵母菌、克柔假丝酵母菌、近平滑假丝酵母菌、光滑假丝酵母菌。甘露聚糖常以糖蛋白的形式存在于多种微生物中,是念珠菌属表面除葡聚糖外的另一重要抗原决定簇。甘露聚糖是机体固有免疫和适应性免疫的重要抗原,能引起很强的抗体反应。

2、研究显示,克柔念珠菌在结构、致病性及在对宿主的防御中表现出的行为模式等方面均与其他医学上重要的念珠菌(如白色念珠菌)有显著的不同。克柔念珠菌在沙保氏葡萄糖琼脂上生长的菌落表面呈浅黄色、不光滑的扁平状,而其他念珠菌菌种则均表现为凸起的菌落。克柔念珠菌的孢子与其他大多数念珠菌的卵圆形不同,它是细长的“长谷米”形。克柔念珠菌的超微结构及其细胞壁α-d-甘露聚糖的结构也与其他致病性念珠菌有差别。克柔氏念珠菌的染色体数目为8,而白念珠菌的为16。

3、近年来,真菌感染,尤其是侵袭性真菌感染的发病率呈逐年上升趋势,由于广谱抗生素、化疗药物、糖皮质激素及免疫抑制剂的广泛使用,器官移植手术的大量开展以及免疫缺陷类疾病患病率的上升,免疫抑制和免疫受损的患者不断增多,念珠菌血症的发病率逐年上升。有报道超过72%的院内真菌感染为念珠菌所致,而念珠菌在引起院内血行播散感染的病原体中排第4位。念珠菌血症在所有的院内血液播散感染中引起的死亡率最高,可达40%。在念珠菌属中感染率最高为白色念珠菌,其次为热带念珠菌,尽管白念珠菌和热带念珠菌感染仍占优势,但毒力较弱的克柔氏念珠菌感染也在免疫功能低下的患者中频频发生。许多研究发现克柔念珠菌比白念珠菌毒力弱,但它对非生物表面的粘附力却非常强大,它能凭借细胞表面疏水性附着于无生命物质的表面并繁殖。在宿主防御因子方面,多项研究证实克柔念珠菌与白念珠菌相比更易受到宿主免疫效应细胞的攻击。目前临床上可用的抗真菌药物种类有限,抗菌谱窄、耐药性高,并且毒副作用明显,使得念珠菌血症难以控制。目前检测念珠菌主要以常规培养为主,此过程耗时费力,且检出率相对较低。因此,快速、准确地从临床标本中检测念珠菌对疾病的早期诊断及治疗极为重要。


技术实现思路

1、为解决上述技术问题,本专利技术提供鼠抗克柔念珠菌甘露聚糖杂交瘤细胞株及单克隆抗体

2、本专利技术采用的技术方案是:鼠抗克柔念珠菌甘露聚糖杂交瘤细胞株,命名为bb10,分类为杂交瘤细胞,保藏日期为2023年11月8日,保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(cgmcc),保藏编号为cgmcc no.45741。

3、鼠抗克柔念珠菌甘露聚糖单克隆抗体,抗体bb10包括重链可变区和轻链可变区,重链可变区包括如seq id no:1所示的cdrh1、seq id no:2所示的cdrh2和seq id no:3所示的cdrh3,轻链可变区包括如seq id no:4所示的cdrl1、seq id no:5所示的cdrl2和seqid no:6所示的cdrl3;

4、seq id no:1  gytfteytih

5、seq id no:2  yihpknggtsnnqkfrg

6、seq id no:3  gmgafyfdy

7、seq id no:4  rssqglvhdngntylh

8、seq id no:5  kvsnrfs

9、seq id no:6  sqsthippt

10、优选地,抗体bb10重链可变区氨基酸序列为seq id no:7所示,轻链可变区氨基酸序列为seq id no:9所示;

11、重链可变区序列

12、seq id no:7

13、qvklhesgpelvkpgasekiscktsgytfteytihwvkqshgksldwigyihpknggtsnnqkfrgkatltvdessstafmelrsltsedsavyycargmgafyfdywgqgttlivssakttppsvyplapgsaaqtnsmvtlgclvkgyfpepvtvtwnsgslssgvhtfpavlqsdlytlsssvtvpsstwpsetvtcnvahpasstkvdkkivprdc

14、轻链可变区序列

15、seq id no:9

16、divmtqtplslpvslgdqaslscrssqglvhdngntylhwylqkpgqspklliykvsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedlgvyfcsqsthipptfgggtkleikradaaptv

17、优选地,抗体bb10由保藏编号为cgmcc no.45741的鼠抗克柔念珠菌甘露聚糖杂交瘤细胞株产生;

18、核酸分子,包含编码鼠抗克柔念珠菌甘露聚糖单克隆抗体的核苷酸。

19、优选地,所述核酸分子编码抗体bb10的重链可变区的核苷酸序列如seq id no:8所示,所述核酸分子编码抗体bb10的轻链可变区的核苷酸序列如seq id no:10所示;

20、重链可变区核苷酸序列

21、seq id no:8

22、caggtgaagcttcacgagtcaggacctgagctggtgaagcctggggcttcagagaagatatcctgcaagacttctggatacacattcactgaatacaccattcactgggtgaagcagagccatggaaagagccttgactggattggatatattcatcctaaaaatggtggtacttccaataaccagaaattcaggggcaaggccacattgactgtagacgagtcctccagcacagccttcatggaactccgcagcctgacatctgaggattctgcagtctattactgcgcaagagggatgggggccttctactttgactactggggccaaggcaccactctcatagtctcctcagccaaaacgacacccccatctgtctatccactggcccctggatctgctgcccaaactaactccatggtgaccctgggatgcctggtcaagggctatttccctgagccagtgacagtgacctggaactctggatccctgtccagcggtgtgcacaccttcccagctgtcctgcagtctgacctctacactctgagcagctcagtgactgtcccctccagcacctggcccagcgagaccgtcacctgca本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.鼠抗克柔念珠菌甘露聚糖杂交瘤细胞株,其特征在于:命名为BB10,保藏编号为CGMCC No.45741。

2.鼠抗克柔念珠菌甘露聚糖单克隆抗体,其特征在于:抗体 BB10包括重链可变区和轻链可变区,重链可变区包括如SEQ ID NO:1所示的CDRH1、SEQ ID NO:2所示的CDRH2和SEQID NO:3所示的CDRH3,轻链可变区包括如SEQ ID NO:4所示的CDRL1、SEQ ID NO:5所示的CDRL2和SEQ ID NO:6所示的CDRL3。

3.根据权利要求2所述的鼠抗克柔念珠菌甘露聚糖单克隆抗体,其特征在于:抗体BB10重链可变区氨基酸序列为SEQ ID NO:7所示,轻链可变区氨基酸序列为SEQ ID NO:9所示。

4.根据权利要求2或3所述的鼠抗克柔念珠菌甘露聚糖单克隆抗体,其特征在于:抗体BB10由保藏编号为CGMCC No.45741的鼠抗克柔念珠菌甘露聚糖杂交瘤细胞株产生。

5.核酸分子,其特征在于:包含编码权利要求2或3所述的鼠抗克柔念珠菌甘露聚糖单克隆抗体的核苷酸。

6.根据权利要求5所述的核酸分子,其特征在于:所述核酸分子编码抗体BB10的重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示,所述核酸分子编码抗体BB10的轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:10所示。

7.检测克柔念珠菌甘露聚糖的试剂盒,其特征在于:包括权利要求2-4中任一所述的鼠抗克柔念珠菌甘露聚糖单克隆抗体。

...

【技术特征摘要】

1.鼠抗克柔念珠菌甘露聚糖杂交瘤细胞株,其特征在于:命名为bb10,保藏编号为cgmcc no.45741。

2.鼠抗克柔念珠菌甘露聚糖单克隆抗体,其特征在于:抗体 bb10包括重链可变区和轻链可变区,重链可变区包括如seq id no:1所示的cdrh1、seq id no:2所示的cdrh2和seqid no:3所示的cdrh3,轻链可变区包括如seq id no:4所示的cdrl1、seq id no:5所示的cdrl2和seq id no:6所示的cdrl3。

3.根据权利要求2所述的鼠抗克柔念珠菌甘露聚糖单克隆抗体,其特征在于:抗体bb10重链可变区氨基酸序列为seq id no:7所示,轻链可变区氨基酸序列为seq i...

【专利技术属性】
技术研发人员:王玉芳陈特长周跃辉张燕刘骞马秀楠刘梦刘宇曹文斌苑庆华何永胜
申请(专利权)人:天津一瑞生物科技股份有限公司
类型:发明
国别省市:

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