【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及抗体工程领域，具体涉及一种tnfsf13b抗体及其应用。
技术介绍
1、人肿瘤坏死因子超家族成员13b（tnfsf13b），全长为285个氨基酸，其中47-73氨基酸为跨膜区，74-285氨基酸为胞外区，通常在某些特定的蛋白酶(如弗林蛋白酶)的作用下发生水解，形成可溶性功能片段 (c端a134-l285)。它能与b淋巴细胞特异结合并诱导其增殖、分化并分泌igg、iga和igm等免疫球蛋白，在体液免疫反应中发挥着重要作用。现已确定，tnfsf13b与多种身免疫性疾病的发病机理有关。文献广泛报道，自身免疫性疾病如系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、干燥症等病人体内tnfsf13b含量升高；最新的研究发现，淋巴瘤、自身免疫性肝炎等病人体内tnfsf13b含量也升高。因此研制高灵敏度的tnfsf13b检测试剂盒，对于多种自身免疫性疾病的治疗和愈后指标检测等是极为必要的，但目前缺少相关的检测试剂盒。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种快速灵敏检测人肿瘤坏死因子超家族成员13b（tnfsf13b）的酶联免疫试剂盒及其应用。
2、技术方案
3、一种tnfsf13b的人源化单克隆抗体，其特征在于，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含如下hcdr1、hcdr2和hcdr3序列具有至少80%同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区包含如下lcdr1、lcdr2和lcdr3序列至少80%同一性的氨基酸序列：
4、其中：
5、hcd
6、hcdr2的氨基酸序列为dinldnsgthynqkfkg，见seq id no.2；
7、hcdr3的氨基酸序列为egvyhdyddyamdy，见seq id no.3；
8、lcdr1的氨基酸序列为rtsqslvhinaitylh,见seq id no.4；
9、lcdr2的氨基酸序列为rvsnrf,见seq id no.5；
10、lcdr3的氨基酸序列为gqsthvpltf,见seq id no.6。
11、所述的人源化单克隆抗体， 其特征在于，所述的hcdr1、hcdr2和hcdr3序列中替换、插入或缺失1个、2个或3个氨基酸残基；所述的lcdr1、lcdr2和lcdr3序列中替换、插入或缺失1个、2个或3个氨基酸残基。
12、所述的人源化单克隆抗体，其特征在于所述人源化单克隆抗体的氨基酸序列为evqlvssgkgwvqpgeslrlscassgytfidyymnwvlqapmhglewvglinldnsgthydqkfkgfftisrdkskntsylrmnslaatdtavyycaregvyhdyddyamdywqqgtlvlvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgkviqmtmspsalsssvgdrdtitcrtsqslvninaitylhwkqiktskapklhiyrvshrfsgfpsrfslsgsgtestltissmqpeafatdycgqsthvpltfgyktkeeikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec,见seq idno.7。
13、一种tnfsf13b的鼠源单克隆抗体，其氨基酸序列为：
14、evqlvssgggwvqpggslrlscaasgytfidyymnwvrqapmhglewvgdinldnsgthynqkfkgrftisrdkskntsylqmnslratdtavyycaregvyhdyddyamdywqqgtlvtvssakttapsvyplapvcgdttgssvtlgclvkgyfpepvtltwnsgslssgvhtfpavlqsdlytlsssvtvtsstwpsqsitcnvahpasstkvdkkieprgptikpcppckcpapnllggpsvfifppkikdvlmislspivtcvvvdvseddpdvqiswfvnnvevhtaqtqthredynstlrvvsalpiqhqdwmsgkefkckvnnkdlpapiertiskpkgsvrapqvyvlpppeeemtkkqvtltcmvtdfmpediyvewtnngktelnykntepvldsdgsyfmysklrvekknwvernsyscsvvheglhnhhttksfsrtpgkdiqmtmspsalsasvgdrvtitcrtsqslvhinaitylhwyqiktskapklliyrvsnrfsgvpsrfsgsgsgtdstltisslqpeafatyycgqsthvpltfgyktkveikadaaptvsifppsseqltsggasvvcflnnfypkdinvkwkidgserqngvlnswtdqdskdstysmsstltltkdeyerhnsytceathktstspivksfnrnec，见seqid no.8。
15、一种tnfsf13b抗体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
16、(1) 抗原的制备：在大肠杆菌bl21/pet 30a- tnfsf13b中诱导表达tnfsf13b基因，得到的融合蛋白，经纯化后作为抗原；
17、(2) 抗体的制备：步骤（1）获得抗原分别免疫小鼠和兔子，分别制备鼠源单克隆抗体和多克隆抗体；提取产生鼠源单克隆抗体的杂交瘤细胞rna，反转录成cdna, 通过分子克隆法及人源化抗体软件设计，得到人源化抗体序列，用293细胞表达获得人源化单克隆抗体；
18、 (3) 抗体的纯化：步骤(2)中所得的鼠源单克隆抗体、多克隆抗体及人源化单克隆抗体分别经离心、沉淀、亲和层析，得到纯化相应的抗体；
19、(4) 抗体的标记：用生物素标记步骤(3)中所得到多克隆抗体。
20、所述的人源化单克隆抗体、鼠源单克隆抗体或多克隆抗体在诊断自身免疫性疾病试剂及或治疗自身免疫性疾病药物中的应用所述的自身免疫性疾病为系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、或干本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种TNFSF13b的人源化单克隆抗体，其特征在于，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含如下HCDR1、HCDR2和HCDR3的氨基酸序列，所述轻链可变区包含如下LCDR1、LCDR2和LCDR3的氨基酸序列：
2.根据权利要求1所述的一种TNFSF13b的人源化单克隆抗体，其特征在于，所述人源化单克隆抗体的氨基酸序列为EVQLVSSGKGWVQPGESLRLSCASSGYTFIDYYMNWVLQAPMHGLEWVGLINLDNSGTHYDQKFKGFFTISRDKSKNTSYLRMNSLAATDTAVYYCAREGVYHDYDDYAMDYWQQGTLVLVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNG
3.一种TNFSF13b的鼠源单克隆抗体，其特征在于，其氨基酸序列为：
4.一种TNFSF13b抗体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
5.根据权利要求1或2所述的人源化单克隆抗体、权利要求3所述的鼠源单克隆抗体或由权利要求4所述的方法制备获得多克隆抗体在制备检测自身免疫性疾病试剂中的应用或制备治疗自身免疫性疾病药物中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的自身免疫性疾病为系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎或干燥症。
7.一种检测TNFSF13b的酶联免疫试剂盒，其特征在于，包括包被权利要求1或2所述的人源化单克隆抗体或权利要求3所述的鼠源单克隆抗体的固相载体，生物素标记的权利要求4所述的方法获得多克隆抗体、HRP标记的链酶亲和素。
8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，还包括TNFSF13b标准品蛋白、显色剂、终止液、浓缩洗涤液、样品稀释液。
...【技术特征摘要】
1.一种tnfsf13b的人源化单克隆抗体，其特征在于，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含如下hcdr1、hcdr2和hcdr3的氨基酸序列，所述轻链可变区包含如下lcdr1、lcdr2和lcdr3的氨基酸序列：
2.根据权利要求1所述的一种tnfsf13b的人源化单克隆抗体，其特征在于，所述人源化单克隆抗体的氨基酸序列为evqlvssgkgwvqpgeslrlscassgytfidyymnwvlqapmhglewvglinldnsgthydqkfkgfftisrdkskntsylrmnslaatdtavyycaregvyhdyddyamdywqqgtlvlvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgkviqmtmspsalsssvg...
【专利技术属性】
技术研发人员：张嘉鑫，张双全，
申请(专利权)人：江苏双全生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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