【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及细胞外囊泡提取相关，具体为一种细胞外囊泡提取装置。
技术介绍
1、细胞外囊泡是一类在生理和病理条件下所有细胞均可分泌的双层膜囊泡。evs的组成具有高度的异质性，主要由直径在30-200nm的外泌体和直径在100-1000nm的微囊泡组成，evs可以包裹很多供体细胞来源的分子物质，并将所携带的分子物质释放到受体细胞内，从而调节受体细胞的生物学功能。动植物细胞外囊泡在各种疾病的诊断、治疗以及药物研发等方面表现出较大的潜在价值，故此，我们需要一种细胞外囊泡提取装置。
2、而目前使用的细胞外囊泡提取装置，evs提取技术主要包括超速离心技术、超滤技术、免疫磁珠捕获技术、尺寸排阻色谱技术和聚合物共沉淀技术等，然而这些技术在高效提取液体活检样品中的细胞外囊泡时都存在各自的问题和不足：超速离心技术目前被认为是evs分离的“金标准”，适用于大容量样本、操作简单、技术成熟、提取量高，但是其转速较大、时间长，特异性差，evs结构容易被破坏，超速离心还可能导致evs与可溶性蛋白发生共沉淀，影响后续的分析；超滤技术操作简单，无需昂贵设备，不添加化学试剂，耗时短，富集效率高，但是滤膜易堵塞、剪切力易造成evs损伤，并且受膜孔径的限制，影响evs的提取率和纯度；免疫磁珠捕获技术特异性高，但耗时较长，费用昂贵，洗脱过程中ph值的变化和缓冲盐试剂的使用会破坏evs的功能，对后续研究可能造成影响，并且该方法不适用于大规模样品的分析及应用；尺寸排阻色谱技术操作简单，节约时间，可以保护evs的生物学结构和完整性不受破坏，但是其分离的evs中含
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种细胞外囊泡提取装置，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
2、为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
3、一种细胞外囊泡提取装置，包括上盖，所述上盖的两侧均安装有连接杆，所述连接杆的两端均固定连接有固定套，所述连接杆的外壁安装有出口外壳，所述出口外壳的一侧安装有定位杆，所述定位杆的两端均固定连接有定位套，所述定位杆的外壁安装有卡扣，所述卡扣的一侧焊接有弹簧，所述出口外壳的内壁安装有30纳米孔膜，所述30纳米孔膜的上端抵触有第一硅胶密封圈，所述第一硅胶密封圈的上端抵触有中心孔有机玻璃垫片，所述中心孔有机玻璃垫片的上端抵触有第二硅胶密封圈，所述第二硅胶密封圈的上端抵触有偏心孔有机玻璃垫片，所述偏心孔有机玻璃垫片的上端抵触有第三硅胶密封圈，所述第三硅胶密封圈的上端抵触有200纳米孔膜。
4、优选的，所述上盖通过连接杆与出口外壳构成旋转结构，且出口外壳的内壁为开孔式设计。
5、优选的，所述上盖与连接杆卡合连接，且连接杆以上盖的中轴线对称设置。
6、优选的，所述连接杆与固定套螺纹连接，且固定套的内壁为螺纹状设置。
7、优选的，所述出口外壳与定位杆卡合连接，且出口外壳的内壁为开孔式设计。
8、优选的，所述卡扣通过定位杆与出口外壳构成旋转结构，且定位杆的外壁为螺纹状设置。
9、优选的，所述30纳米孔膜的外壁与出口外壳的内壁紧密贴合，且出口外壳的内壁直径大于30纳米孔膜的外壁直径。
10、优选的，所述第一硅胶密封圈的外壁与中心孔有机玻璃垫片的外壁紧密贴合，且中心孔有机玻璃垫片为圆形结构设置。
11、一种细胞外囊泡提取方法，包括以下步骤：
12、s1、待测血浆依次在4500rpm、12000rpm转速下离心10min移除细胞碎片等杂质取上清液；
13、s2、将5ml，1×pbs以200μl/min从上盖进样口通入，依次润洗上盖、偏心孔有机玻璃垫片、第二硅胶密封圈、中心孔有机玻璃垫片、出口外壳等；
14、s3、将所得的血浆上清液通过200纳米孔膜过滤，将过滤后所得的血浆以100μl/min的流速依次通过上盖、偏心孔有机玻璃垫片、第二硅胶密封圈、中心孔有机玻璃垫片、出口外壳；
15、s4、待样本过滤完毕，继续通入10ml，1×pbs润洗滞留在偏心孔有机玻璃垫片、第二硅胶密封圈和中心孔有机玻璃垫片的细胞外囊泡样本；
16、s5、最后将打开上盖，取出偏心孔有机玻璃垫片、第二硅胶密封圈和中心孔有机玻璃垫片内的样本即为细胞外囊泡混悬液。
17、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
18、1、采用偏心孔进样，中心孔排液，顺利构建了适用于细胞外囊泡提取的30纳米孔膜与200纳米孔膜压力驱动分离芯片装置，可以有效防止进口液体压力大损伤纳米膜，从而最大程度地减少提取过程中外泌体的损伤、损失以及非特异性阻塞，实现了较高效、快速地提取和富集外泌体，并且避免了因长时间的堆积造成外泌体的降解，通过比较本装置比现有的细胞外囊泡提取方法得到的细胞外囊泡浓度更高，本装置专利技术可以长期重复利用，所需耗材纳米孔膜由实验室自主制作，相对传统装置价格便宜，成本较低；eq法和qev法提取细胞外囊泡价格比本专利技术装置昂贵；uc法作为提取细胞外囊泡的分离的“金标准”需要大型仪器-超高速冷冻离心机，价格昂贵且高达数十万的转速不仅损伤细胞外囊泡且需要经培训过的专业人员操作，所需时间是本专利技术装置分离细胞外囊泡的数倍。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种细胞外囊泡提取装置，其特征在于：包括上盖(1)，所述上盖(1)的两侧均安装有连接杆(2)，所述连接杆(2)的两端均固定连接有固定套(3)，所述连接杆(2)的外壁安装有出口外壳(4)，所述出口外壳(4)的一侧安装有定位杆(5)，所述定位杆(5)的两端均固定连接有定位套(6)，所述定位杆(5)的外壁安装有卡扣(7)，所述卡扣(7)的一侧焊接有弹簧(8)，所述出口外壳(4)的内壁安装有30纳米孔膜(9)，所述30纳米孔膜(9)的上端抵触有第一硅胶密封圈(10)，所述第一硅胶密封圈(10)的上端抵触有中心孔有机玻璃垫片(11)，所述中心孔有机玻璃垫片(11)的上端抵触有第二硅胶密封圈(12)，所述第二硅胶密封圈(12)的上端抵触有偏心孔有机玻璃垫片(13)，所述偏心孔有机玻璃垫片(13)的上端抵触有第三硅胶密封圈(14)，所述第三硅胶密封圈(14)的上端抵触有200纳米孔膜(15)。
2.根据权利要求1所述的一种细胞外囊泡提取装置，其特征在于：所述上盖(1)通过连接杆(2)与出口外壳(4)构成旋转结构，且出口外壳(4)的内壁为开孔式设计。
3.根据权利要求
4.根据权利要求1所述的一种细胞外囊泡提取装置，其特征在于：所述连接杆(2)与固定套(3)螺纹连接，且固定套(3)的内壁为螺纹状设置。
5.根据权利要求1所述的一种细胞外囊泡提取装置，其特征在于：所述出口外壳(4)与定位杆(5)卡合连接，且出口外壳(4)的内壁为开孔式设计。
6.根据权利要求1所述的一种细胞外囊泡提取装置，其特征在于：所述卡扣(7)通过定位杆(5)与出口外壳(4)构成旋转结构，且定位杆(5)的外壁为螺纹状设置。
7.根据权利要求1所述的一种细胞外囊泡提取装置，其特征在于：所述30纳米孔膜(9)的外壁与出口外壳(4)的内壁紧密贴合，且出口外壳(4)的内壁直径大于30纳米孔膜(9)的外壁直径。
8.根据权利要求1所述的一种细胞外囊泡提取装置，其特征在于：所述第一硅胶密封圈(10)的外壁与中心孔有机玻璃垫片(11)的外壁紧密贴合，且中心孔有机玻璃垫片(11)为圆形结构设置。
9.一种细胞外囊泡提取方法，其特征在于：包括以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种细胞外囊泡提取装置，其特征在于：包括上盖(1)，所述上盖(1)的两侧均安装有连接杆(2)，所述连接杆(2)的两端均固定连接有固定套(3)，所述连接杆(2)的外壁安装有出口外壳(4)，所述出口外壳(4)的一侧安装有定位杆(5)，所述定位杆(5)的两端均固定连接有定位套(6)，所述定位杆(5)的外壁安装有卡扣(7)，所述卡扣(7)的一侧焊接有弹簧(8)，所述出口外壳(4)的内壁安装有30纳米孔膜(9)，所述30纳米孔膜(9)的上端抵触有第一硅胶密封圈(10)，所述第一硅胶密封圈(10)的上端抵触有中心孔有机玻璃垫片(11)，所述中心孔有机玻璃垫片(11)的上端抵触有第二硅胶密封圈(12)，所述第二硅胶密封圈(12)的上端抵触有偏心孔有机玻璃垫片(13)，所述偏心孔有机玻璃垫片(13)的上端抵触有第三硅胶密封圈(14)，所述第三硅胶密封圈(14)的上端抵触有200纳米孔膜(15)。
2.根据权利要求1所述的一种细胞外囊泡提取装置，其特征在于：所述上盖(1)通过连接杆(2)与出口外壳(4)构成旋转结构，且出口外壳(4)的内壁为开孔式设计。
3.根据权利要求1所述的一种细胞外囊泡提取装...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈琴华，杨洋，刘经健，冯宝栋，
申请(专利权)人：深圳市宝安纯中医治疗医院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。