【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药的，尤其涉及一种由敲减tagln2基因表达的胃癌组织细胞分泌的外泌体和制备方法及应用、核酸分子和药物。
技术介绍
1、肿瘤血管正常化是近年来在临床兴起的一种肿瘤治疗新策略，其合理运用抗血管生成药物使肿瘤血管结构和功能在特定时间窗内趋于正常，与化疗、免疫治疗等抗肿瘤治疗联合使用，具备协同增效机制。但是，肿瘤血管正常化的时间窗是短暂、可逆的，且受到药物、肿瘤部位和类型等方面的影响，临床上难以对肿瘤血管正常化的时间窗进行界定。因此，寻找有效延长肿瘤血管正常化的新药物、新靶标及新途径是目前临床联合抗血管治疗实体瘤的难点和热点之一。
2、近些年研究报道，富含mtdna、mtrna、蛋白、脂质、线粒体片段等线粒体组分的外泌体(mitoexo)转移可建立供体细胞对靶细胞生物能量和/或氧化还原调节的一种新通讯机制。但是，目前关于富含线粒体组分的外泌体介导的细胞-细胞间通讯应用于肿瘤血管正常化领域中，以实现延长肿瘤血管正常化时间窗的研究鲜有报道。
技术实现思路
1、本申请专利技术人经过广泛且深入的研究发现，含有高丰度tagln2蛋白的胃癌组织bgc-823细胞能够通过外泌体向细胞外运送tagln2蛋白，并被血管内皮细胞ealy926吸收，引起后者细胞内tagln2蛋白表达水平显著升高，显著促进血管内皮细胞迁移和体外小管形成，同时上调vegfr2和cd31等血管标志分子和nrp1和sema4d等tagln2下游分子的表达，降低occludin、zo-1、claudin
2、基于以上创造性的发现，专利技术人经过进一步的研究——稳定敲减tagln2表达的胃癌组织bgc-823细胞所分泌的外泌体能够抑制内皮细胞增殖、迁移和体外小管形成，降低血管标志分子和tagln2下游分子表达，以及促进细胞间连接作用。该外泌体具有延缓血管内皮细胞生长和调控血管内皮细胞功能正常化以实现胃癌组织血管系统正常化的潜力，且外泌体具有生物相容性高和免疫原性低的特点，将其与肿瘤治疗手段(放疗、化疗、免疫治疗等)联合使用产生协同效应，以实现更好的治疗效果。基于此，得到了本申请的技术方案：
3、本专利技术的第一目的在于提供由敲减tagln2基因表达的胃癌组织细胞分泌的外泌体在促血管正常化药物和肿瘤治疗用药物制备中的应用。
4、本专利技术的第二目的在于提供一种核苷酸分子。
5、本专利技术的第三目的在于提供一种外泌体。
6、本专利技术的第四目的在于提供一种外泌体的制备方法。
7、本专利技术的第五目的在于提供通过以上方法制备得到的外泌体。
8、本专利技术的第六目的在于提供一种药物。
9、具体的，本专利技术提供了由敲减tagln2基因表达的胃癌组织细胞分泌的外泌体在血管正常化药物制备中的应用。
10、本专利技术提供的核苷酸分子包括序列如seq id no:1～6所示的核苷酸片段中的一段或多段。
11、在本专利技术中，所述核酸分子具体实例可以是但不限制于sirna和/或shrna。其中，所述sirna为化学合成的线性双链rna，其通过转染的方式进入胃癌组织细胞中，参与rnai途径，使得tagln2基因沉默。所述shrna为依赖茎环序列产生的短双链rna结构，通过将sirna与载体进行重组，通过转染或感染的方式进入细胞，并利用细胞内的dicer酶切割生成相应的sirna，参与rnai途径，使得tagln2基因沉默。
12、在一些具体的实施方式中，所述核苷酸分子优选为shrna，且所述核苷酸分子包括序列如seq id no:13～16任一所示的核苷酸片段或其互补片段。此时，采用核苷酸分子对胃癌组织细胞处理，能够实现更好的敲减tagln2表达的效果。
13、本专利技术提供的外泌体由敲减tagln2基因表达的胃癌组织细胞分泌获得。
14、在本专利技术中，所述胃癌组织细胞的具体实例包括但不限制于：bgc-823细胞、mgc-803细胞、sgc-7901细胞、ags细胞、hs-746t细胞、nci-n87细胞、snu-16细胞和katoiii细胞中的一种或多种。
15、在一些具体的实施方式中，所述外泌体含有高丰度的线粒体相关蛋白，所述线粒体相关蛋白包括mcu、phb2、samm50、ndufb10、tomm40、ndufa13、atp5mf、hax1、slc25a13、fam162a以及nnt中的一种或多种。进一步地，以上所述的线粒体相关蛋白主要参与线粒体配置转动、呼吸链复合体组装等生物过程，涉及jak-stat信号途径、代谢途径和氧化磷酸化等信号通路，该外泌体中的线粒体相关蛋白作用于血管内皮细胞，可提高血管内皮细胞的线粒体中三羧酸循环水平提高产生更多的ros产物，线粒体受损去极化，进而引起细胞内的氧化应激反应，以最终实现延缓血管内皮细胞生长和调控血管内皮细胞功能正常化的效果。
16、本专利技术提供的外泌体的制备方法包括：取以上所述的核酸分子对胃癌组织细胞进行转染，得到敲减tagln2基因表达的胃癌组织细胞；取所述敲减tagln2基因表达的胃癌组织细胞进行培养，纯化得到所述外泌体。
17、在一些具体的实施方式中，所述转染的方法选自电穿孔法、脂质体转染法、基因枪法和病毒介导法中的一种或多种。进一步地，以上所述的转染方法为现有技术中常规使用的一类方法，以能够实现核酸分子进入胃癌组织细胞并沉默tagln2基因为限，本专利技术并不对其具体的工艺及条件加以特别的限定。
18、在一些具体的实施方式中，所述纯化的方法包选自超速离心/差速离心法、密度梯度超速离心法、尺寸排阻色谱法、多聚物沉淀法、免疫亲和法和微流控法中的一种或多种。进一步地，以上所述的纯化方法为外泌体制备中常规使用的一类方法，以能够实现从细胞培养物中分离获得外泌体为限，本专利技术并不对其具体的工艺及条件加以特别的限定。
19、本专利技术还提供了通过以上外泌体的制备方法制备获得的外泌体。
20、本专利技术提供的药物包括以上所述的核苷酸分子和/或外泌体。此时，该药物可被应用于胃癌治疗中，可通过核酸分子实现对于胃癌组织细胞中tagln2表达的抑制，进而使得胃癌组织细胞分泌以上所述的外泌体；亦或是直接通过以上所述的外泌体作用、影响血管内皮细胞。
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1.由敲减TAGLN2基因表达的胃癌组织细胞分泌的外泌体在促血管正常化药物和肿瘤治疗用药物制备中的应用。
2.一种核苷酸分子，其特征在于，所述核苷酸分子包括序列如SEQ ID NO:1～6所示的核苷酸片段中的一段或多段。
3.根据权利要求2所述的核苷酸分子，其特征在于，所述核苷酸分子为shRNA，且所述核苷酸分子包括序列如SEQ ID NO:13～16任一所示的核苷酸片段或其互补片段。
4.一种外泌体，其特征在于，所述外泌体由敲减TAGLN2基因表达的胃癌组织细胞分泌获得。
5.根据权利要求4所述的外泌体，其特征在于，所述外泌体含有高丰度的线粒体相关蛋白，所述线粒体相关蛋白包括MCU、PHB2、SAMM50、NDUFB10、TOMM40、NDUFA13、ATP5MF、HAX1、SLC25A13、FAM162A以及NNT中的一种或多种。
6.一种外泌体的制备方法，其特征在于，该制备方法包括：
7.根据权利要求6所述的外泌体的制备方法，其特征在于，所述转染的方法选自电穿孔法、脂质体转染法、基因枪法和病毒介导法中的
8.根据权利要求6所述的外泌体的制备方法，其特征在于，所述纯化的方法包选自超速离心/差速离心法、密度梯度超速离心法、尺寸排阻色谱法、多聚物沉淀法、免疫亲和法和微流控法中的一种或多种。
9.通过权利要求6～8任一所述的外泌体的制备方法制备获得的外泌体。
10.一种药物，其特征在于，包括权利要求2或3所述的核苷酸分子和/或权利要求4、5或8所述的外泌体。
...【技术特征摘要】
1.由敲减tagln2基因表达的胃癌组织细胞分泌的外泌体在促血管正常化药物和肿瘤治疗用药物制备中的应用。
2.一种核苷酸分子，其特征在于，所述核苷酸分子包括序列如seq id no:1～6所示的核苷酸片段中的一段或多段。
3.根据权利要求2所述的核苷酸分子，其特征在于，所述核苷酸分子为shrna，且所述核苷酸分子包括序列如seq id no:13～16任一所示的核苷酸片段或其互补片段。
4.一种外泌体，其特征在于，所述外泌体由敲减tagln2基因表达的胃癌组织细胞分泌获得。
5.根据权利要求4所述的外泌体，其特征在于，所述外泌体含有高丰度的线粒体相关蛋白，所述线粒体相关蛋白包括mcu、phb2、samm50、ndufb10、tomm40、nd...
【专利技术属性】
技术研发人员：卓慧钦，
申请(专利权)人：厦门大学附属中山医院，
类型：发明
国别省市：
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