【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开提供了具有改善的药代动力学特性的松弛素-2融合蛋白类似物、用于制备这些融合蛋白的方法以及使用这些融合蛋白来增强受试者中的松弛素-2相关活性并治疗或预防松弛素-2相关疾病的方法。
技术介绍
1、松弛素-2具有很强的抗纤维化活性。在受伤的组织中，成纤维细胞活化和增殖引起增加的胶原蛋白产生和间质纤维化。心脏纤维化因生物力学超负荷而加剧，并影响心室功能障碍、重构和心律失常形成。然而，由于松弛素体内半衰期有限，患者的治疗必须每14至21天重复一次，其中化合物施用必须以连续输注进行至少48小时。此外，松弛素-2的合成也很困难。由于b链的溶解度低，并且需要在a链与b链之间费力地、特异性地引入半胱氨酸桥，因此通过这些方法获得的活性肽的产率极低。
2、需要一种具有更长半衰期和更容易生产的工程化松弛素-2类似物。
技术实现思路
1、本公开提供了具有改善的药代动力学特性的工程化松弛素-2类似物的融合蛋白。本公开还提供了使用这些融合蛋白来增强受试者中松弛素-2相关活性并治疗或预防松弛素-2相关疾病的方法。
2、本文提供了一种融合蛋白，其从n-端到c-端包含第一肽；连接肽；以及第二肽，其中第一肽包含与seq id no:7的氨基酸序列相比时在0、1、2、3、4或5个氨基酸处不同的氨基酸序列，并且第二肽包含与seq id no:9的氨基酸序列相比时在0、1、2、3、4或5个氨基酸处不同的氨基酸序列；或者，第一肽包含与seq id no:9的氨基酸序列相比时在0、1、2、3、4或5
3、在一些实施例中，连接肽包含选自由以下项组成的组的氨基酸序列：
4、r1r1r1r2r1r1r1r2r1r1r1r2r1(seq id no:195)；
5、r1r1r1r2r1r1r1r2r1r1r1r2r1r1r1(seq id no:196)；
6、r1r1r2r1r1r1r2r2r1r1r1r2r1r1(seq id no:197)；
7、r1r1r1r2r2r1r1r1r2r2r1r1r1(seq id no:198)；以及
8、r1r1r2r1r2r1r1r2r1r2r1r1r1(seq id no:199)，
9、其中r1为非酸性氨基酸并且r2为酸性氨基酸。
10、在一些实施例中，酸性氨基酸为天门冬氨酸或谷氨酸。在一些实施例中，酸性氨基酸为谷氨酸。在一些实施例中，非酸性氨基酸为甘氨酸、脯氨酸或丝氨酸。在一些实施例中，非酸性氨基酸为甘氨酸。
11、在一些实施例中，连接肽包含以下项中的一者或多者的氨基酸序列：seq id no:14、15、16、17或18。在一些实施例中，连接肽包含选自由以下项组成的组的氨基酸序列：seqid no:19至23。
12、在一些实施例中，第一肽包含dswx3eeviklcgrelvraqiaicgx4st(seq id no:3)的氨基酸序列，其中x3为甲硫氨酸、赖氨酸或谷氨酰胺，并且其中x4为甲硫氨酸或赖氨酸。在一些实施例中，第一肽包含x5qx6ysalankcchvgctkrslax7fc(seq id no:4)的氨基酸序列，其中x5为精氨酸或不存在，x6为亮氨酸或天冬氨酸，并且其中x7为精氨酸、谷氨酰胺或谷氨酸。
13、在一些实施例中，第二肽包含dswx3eeviklcgrelvraqiaicgx4st(seq id no:3)的氨基酸序列，其中x3为甲硫氨酸、赖氨酸或谷氨酰胺，并且其中x4为甲硫氨酸或赖氨酸。在一些实施例中，第二肽包含x5qx6ysalankcchvgctkrslax7fc(seq id no:4)的氨基酸序列，其中x5为精氨酸或不存在，x6为亮氨酸或天门冬氨酸，并且其中x7为精氨酸、谷氨酰胺或谷氨酸。
14、在一些实施例中，第一肽包括选自由以下项组成的组的氨基酸序列：seq id no:5至7。在一些实施例中，第二肽包括选自由以下项组成的组的氨基酸序列：seq id no:5至7。在一些实施例中，第一肽包括选自由以下项组成的组的氨基酸序列：seq id no:8至13。在一些实施例中，第二肽包括选自由以下项组成的组的氨基酸序列：seq id no:8至13。
15、在一些实施例中，第一肽包含seq id no:5的氨基酸序列并且第二肽包含seq idno:8的氨基酸序列；第一肽包含seq id no:5的氨基酸序列并且第二肽包含seq id no:9的氨基酸序列；第一肽包含seq id no:5的氨基酸序列并且第二肽包含seq id no:10的氨基酸序列；第一肽包含seq id no:5的氨基酸序列并且第二肽包含seq id no:11的氨基酸序列；第一肽包含seq id no:5的氨基酸序列并且第二肽包含seq id no:12的氨基酸序列；第一肽包含seq id no:5的氨基酸序列并且第二肽包含seq id no:13的氨基酸序列；第一肽包含seq id no:6的氨基酸序列并且第二肽包含seq id no:8的氨基酸序列；第一肽包含seq id no:6的氨基酸序列并且第二肽包含seq id no:9的氨基酸序列；第一肽包含seq idno:6的氨基酸序列并且第二肽包含seq id no:10的氨基酸序列；第一肽包含seq id no:6的氨基酸序列并且第二肽包含seq id no:11的氨基酸序列；第一肽包含seq id no:6的氨基酸序列并且第二肽包含seq id no:12的氨基酸序列；第一肽包含seq id no:6的氨基酸序列并且第二肽包含seq id no:13的氨基酸序列；第一肽包含seq id no:7的氨基酸序列并且第二肽包含seq id no:8的氨基酸序列；第一肽包含seq id no:7的氨基酸序列并且第二肽包含seq id no:9的氨基酸序列；第一肽包含seq id no:7的氨基酸序列并且第二肽包含seq id no:10的氨基酸序列；第一肽包含seq id no:7的氨基酸序列并且第二肽包含seqid no:11的氨基酸序列；第一肽包含seq id no:7的氨基酸序列并且第二肽包含seq idno:12的氨基酸序列；或者，第一肽包含seq id no:7的氨基酸序列并且第二肽包含seq idno:13的氨基酸序列。
16、在一些实施例中，第二肽包含seq id no:5的氨基酸序列并且第一肽包含seq idno:8的氨基酸序列；第二肽包含seq id no:5的氨基酸序列并且第一肽包含seq id no:9的氨基酸序列；第二肽包含seq id no:5的氨基酸序列并且第一肽包含seq i本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种融合蛋白，其从N-端到C-端包含，
2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其中所述连接肽包含选自由以下项组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO:195至199，
3.根据权利要求1或2所述的融合蛋白，其中所述酸性氨基酸为天门冬氨酸或谷氨酸。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的融合蛋白，其中所述酸性氨基酸为谷氨酸。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的融合蛋白，其中所述非酸性氨基酸为甘氨酸、脯氨酸或丝氨酸。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的融合蛋白，其中所述非酸性氨基酸为甘氨酸。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的融合蛋白，其中所述连接肽包含以下项中的一者或多者的氨基酸序列：SEQ ID NO:14、15、16、17或18。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的融合蛋白，其中所述连接肽包含选自由以下项组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO:19至23。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的融合蛋白，其中所述第一肽包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列，其中X3为甲硫氨酸、
10.根据权利要求1至8中任一项所述的融合蛋白，其中所述第一肽包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列，其中X5为精氨酸或不存在，X6为亮氨酸或天冬氨酸，并且其中X7为精氨酸、谷氨酰胺或谷氨酸。
11.根据权利要求1至8或10中任一项所述的融合蛋白，其中所述第二肽包含SEQ IDNO:3的氨基酸序列，其中X3为甲硫氨酸、赖氨酸或谷氨酰胺，并且其中X4为甲硫氨酸或赖氨酸。
12.根据权利要求1至9中任一项所述的融合蛋白，其中所述第二肽包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列，其中X5为精氨酸或不存在，X6为亮氨酸或天门冬氨酸，并且其中X7为精氨酸、谷氨酰胺或谷氨酸。
13.根据权利要求1至9或12中任一项所述的融合蛋白，其中所述第一肽包含选自由以下项组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO:5至7。
14.根据权利要求1至8、10或11中任一项所述的融合蛋白，其中所述第二肽包含选自由以下项组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO:5至7。
15.根据权利要求1至8、10、11或14中任一项所述的融合蛋白，其中所述第一肽包含选自由以下项组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO:8至13。
16.根据权利要求1至9、12或13中任一项所述的融合蛋白，其中所述第二肽包含选自由以下项组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO:8至13。
17.根据权利要求1至9、12、13或16中任一项所述的融合蛋白，其中
18.根据权利要求1至8、10、11、14或15中任一项所述的融合蛋白，其中
19.根据权利要求1至9、12、13、16或17中任一项所述的融合蛋白，其中所述融合蛋白包含选自由以下项组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO:25至48。
20.根据权利要求1至19中任一项所述的融合蛋白，所述融合蛋白进一步包含IgG Fc。
21.根据权利要求20所述的融合蛋白，其中所述IgG Fc在EU位置234和235处包含氨基酸丙氨酸。
22.根据权利要求20或21所述的融合蛋白，其中所述IgG Fc在EU位置329处包含氨基酸丙氨酸。
23.根据权利要求20至22中任一项所述的融合蛋白，其中所述IgG Fc在EU位置234、235和329处包含氨基酸丙氨酸。
24.根据权利要求20至23中任一项所述的融合蛋白，其中所述IgG Fc在EU位置234、235、329、428和434处分别包含氨基酸丙氨酸、丙氨酸、丙氨酸、亮氨酸和丝氨酸。
25.根据权利要求20至23中任一项所述的融合蛋白，其中所述IgG Fc在EU位置433、434和436处分别包含氨基酸赖氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸。
26.根据权利要求20至25中任一项所述的融合蛋白，其中所述IgG Fc在EU位置252、254和256处分别包含氨基酸酪氨酸、苏氨酸和谷氨酸。
27.根据权利要求20至26中任一项所述的融合蛋白，其中所述IgG Fc在EU位置428和434处分别包含氨基酸亮氨酸和丝氨酸。
28.根据权利要求20所述的融合蛋白，其中所述IgG Fc包含与人IgG1 Fc的氨基酸序列至少85％相同的氨基酸序列。
29.根据权利要求28所述的融合蛋白，其中所述IgG Fc包含人IgG1 Fc的氨基酸序列。
30.根...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种融合蛋白，其从n-端到c-端包含，
2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其中所述连接肽包含选自由以下项组成的组的氨基酸序列：seq id no:195至199，
3.根据权利要求1或2所述的融合蛋白，其中所述酸性氨基酸为天门冬氨酸或谷氨酸。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的融合蛋白，其中所述酸性氨基酸为谷氨酸。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的融合蛋白，其中所述非酸性氨基酸为甘氨酸、脯氨酸或丝氨酸。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的融合蛋白，其中所述非酸性氨基酸为甘氨酸。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的融合蛋白，其中所述连接肽包含以下项中的一者或多者的氨基酸序列：seq id no:14、15、16、17或18。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的融合蛋白，其中所述连接肽包含选自由以下项组成的组的氨基酸序列：seq id no:19至23。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的融合蛋白，其中所述第一肽包含seq id no:3的氨基酸序列，其中x3为甲硫氨酸、赖氨酸或谷氨酰胺，并且其中x4为甲硫氨酸或赖氨酸。
10.根据权利要求1至8中任一项所述的融合蛋白，其中所述第一肽包含seq id no:4的氨基酸序列，其中x5为精氨酸或不存在，x6为亮氨酸或天冬氨酸，并且其中x7为精氨酸、谷氨酰胺或谷氨酸。
11.根据权利要求1至8或10中任一项所述的融合蛋白，其中所述第二肽包含seq idno:3的氨基酸序列，其中x3为甲硫氨酸、赖氨酸或谷氨酰胺，并且其中x4为甲硫氨酸或赖氨酸。
12.根据权利要求1至9中任一项所述的融合蛋白，其中所述第二肽包含seq id no:4的氨基酸序列，其中x5为精氨酸或不存在，x6为亮氨酸或天门冬氨酸，并且其中x7为精氨酸、谷氨酰胺或谷氨酸。
13.根据权利要求1至9或12中任一项所述的融合蛋白，其中所述第一肽包含选自由以下项组成的组的氨基酸序列：seq id no:5至7。
14.根据权利要求1至8、10或11中任一项所述的融合蛋白，其中所述第二肽包含选自由以下项组成的组的氨基酸序列：seq id no:5至7。
15.根据权利要求1至8、10、11或14中任一项所述的融合蛋白，其中所述第一肽包含选自由以下项组成的组的氨基酸序列：seq id no:8至13。
16.根据权利要求1至9、12或13中任一项所述的融合蛋白，其中所述第二肽包含选自由以下项组成的组的氨基酸序列：seq id no:8至13。
17.根据权利要求1至9、12、13或16中任一项所述的融合蛋白，其中
18.根据权利要求1至8、10、11、14或15中任一项所述的融合蛋白，其中
19.根据权利要求1至9、12、13、16或17中任一项所述的融合蛋白，其中所述融合蛋白包含选自由以下项组成的组的氨基酸序列：seq id no:25至48。
20.根据权利要求1至19中任一项所述的融合蛋白，所述融合蛋白进一步包含igg fc。
21.根据权利要求20所述的融合蛋白，其中所述igg fc在eu位置234和235处包含氨基酸丙氨酸。
22.根据权利要求20或21所述的融合蛋白，其中所述igg fc在eu位置329处包含氨基酸丙氨酸。
23.根据权利要求20至22中任一项所述的融合蛋白，其中所述igg fc在eu位置234、235和329处包含氨基酸丙氨酸。
24.根据权利要求20至23中任一项所述的融合蛋白，其中所述igg fc在eu位置234、235、329、428和434处分别包含氨基酸丙氨酸、丙氨酸、丙氨酸、亮氨酸和丝氨酸。
25.根据权利要求20至23中任一项所述的融合蛋白，其中所述igg fc在eu位置433、434和436处分别包含氨基酸赖氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸。
26.根据权利要求20至25中任一项所述的融合蛋白，其中所述igg fc在eu位置252、254和256处分别包含氨基酸酪氨酸、苏氨酸和谷氨酸。
27.根据权利要求20至26中任一项所述的融合蛋白，其中所述igg fc在eu位置428和434处分别包含氨基酸亮氨酸和丝氨酸。
28.根据权利要求20所述的融合蛋白，其中所述igg fc包含与人igg1 fc的氨基酸序列至少85％相同的氨基酸序列。
29.根据权利要求28所述的融合蛋白，其中所述igg fc包含人igg1 fc的氨基酸序列。
30.根据权利要求29所述的融合蛋白，其中所述igg fc包含与选自由以下项组成的组的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列：seq id no:50至52和201至203。
31.根据权利要求29所述的融合蛋白，其中所述igg fc包含选自由以下项组成的组的氨基酸序列：seq id no:50至52和201至203。
32.根据权利要求20至31中任一项所述的融合蛋白，其中所述igg fc连接至所述第一肽的n-端。
33.根据权利要求20至31中任一项所述的融合蛋白，其中所述igg fc连接至所述第二肽的c-端。
34.根据权利要求1至9、12、13、16、17或19中任一...
【专利技术属性】
技术研发人员：J·迪纳，A·克鲁斯，F·格鲁斯维茨，
申请(专利权)人：泰克托尼治疗股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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