【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药。更具体地，涉及附子汤提取物在抑制破骨细胞的生成与改善骨破坏作用中的应用。
技术介绍
1、骨稳态的维持是通过骨形成和骨吸收之间的动态平衡来实现的，是成骨细胞与破骨细胞共同作用的结果。破骨细胞(osteoclast，oc)是主要负责骨吸收的功能性细胞，来源于血液和骨髓中的单核/巨噬细胞系，并经历破骨细胞前体(preosteoclasts)、融合的多核破骨细胞(non-functional polykaryons)、成熟破骨细胞(mature osteoclasts)等不同阶段，作为唯一在体内拥有骨吸收功能的细胞，在促进骨发育、生长、修复和重建方面扮演着至关重要的角色。
2、成骨细胞(osteoblast，ob)是骨形成的主要功能细胞，能特异性分泌多种生物活性物质，调节并影响骨的形成和重建过程。rankl(receptor activator of nuclearfactor-κb ligand)为破骨细胞分化因子，与破骨细胞前体细胞表面高表达的rank结合后，在m-csf的诱导下，分化为成熟的破骨细胞。而ob能够产生大量的内源性糖蛋白骨保护素(osteoprotegerin，opg)，opg通过与rankl竞争结合，从而抑制rankl介导的破骨细胞成熟和活化，以避免骨吸收的过度进行，维持骨代谢平衡。c-fos是骨细胞生长和分化的关键调节因子，对ob/oc动态平衡有重要影响，c-fos蛋白的缺失将导致oc前体细胞无法分化为成熟的oc。
3、而骨稳态的失衡，会影响成骨细胞的产生并增加破骨细
技术实现思路
1、本专利技术要解决的技术问题是克服现有抑制破骨细胞、造成骨破坏疾病的治疗药物的缺陷和不足，提供附子汤提取物在抑制破骨细胞的生成与改善骨破坏作用中的应用。
2、本专利技术的目的是提供附子汤提取物在抑制破骨细胞的生成与改善骨破坏作用中的应用。
3、本专利技术另一目的是提供附子汤提取物在制备抑制破骨细胞生成和/或分化的药物中的应用。
4、本专利技术的又一目的是提供附子汤提取物在制备治疗骨破坏疾病的药物中的应用。
5、本专利技术的再一目的是提供附子汤提取物在制备调节rank/rankl轴的制剂中的应用。
6、本专利技术上述目的通过以下技术方案实现：
7、本专利技术以rankl诱导小鼠骨髓单核-巨噬细胞(bmms)的破骨细胞为体外模型，研究发现附子汤提取物对bmms细胞无毒性，能明显降低使破骨细胞大小和数量，并能降低抗酒石酸酸性磷酸酶含量，抑制破骨细胞的形成与分化；还能有效降低细胞中炎症因子il-6、il-1β及tnf-α的水平，升高炎症抑制因子il-10水平，并下调破骨细胞的rank蛋白、rankl蛋白的表达水平，降低c-fos蛋白，对opg蛋白有促进表达作用；明确了附子汤提取物对破骨细胞分化的作用及机制。
8、本专利技术采用的附子汤指以附子为主药的中药汤剂，由附子、茯苓、人参、白术、芍药等中药组成，可以温经散寒，具有助阳强心、抗血栓、养肝明目、镇静镇痛等功效；还可增加心肌营养，有效的对抗心肌缺血，降低红细胞膜微黏度，抑制血小板凝集及血栓形成，起到养肝明目的作用；而附子汤中的人参、茯苓、白芍有镇静作用，可以辅助治疗疼痛类疾病。
9、因此，本专利技术提供附子汤提取物在制备抑制破骨细胞生成和/或分化的药物中的应用。
10、本专利技术提供的附子汤提取物由炮附子、茯苓、人参、白术和白芍提取得到；其炮附子、茯苓、人参、白术和白芍的质量比为：(15-40)：(9-30)：(6-20)：(12-25)：(9-30)。
11、本专利技术采用的炮附子是毛茛科植物乌头的旁生块根(子根)附子的加工品，具体是将附子切片晒至半干，再用砂子炒至焦黄的一种炮制方法。
12、优选地，所述炮附子、茯苓、人参、白术和白芍的质量比为：15:9:6:12:9。
13、本专利技术提供的附子汤提取物为水提取物。
14、本专利技术采用的附子汤提取物的制备方法为：按炮附子15g，茯苓9g，人参6g，白术12g，白芍9g比例称取饮片，加水1600ml，浸泡30min，先武火(1800w，25min)煮沸后转文火(800w，85min)加盖煎煮，400目筛网趁热过滤，减压浓缩得附子汤浓缩液(浓度为0.78g/g，即1g浓缩液相当于0.78g原处方)，再经冷冻干燥，得附子汤冻干粉，得到附子汤提取物。
15、本专利技术进一步通过由破骨细胞过量而引发的骨破坏疾病动物模型的体内研究，显示采用附子汤提取物进行干预治疗，不影响体内正常器官组织，具有生物安全性，能降低cia大鼠关节炎评分，降低大鼠足容积和足垫厚度，降低足趾肿胀度，减少关节病变程度；并能缓解关节骨损伤程度，有效抑制骨侵蚀现象，且其治疗效果优于阳性药物，并对膝关节、踝关节有一定的保护作用，不会出现明显的软骨病理改变，在附子汤提取物给药干预后能有效地抑制关节软骨损伤；并能有效抑制促炎症因子的分泌，促进抑炎因子的生成，减轻炎症反应，从而发挥保护关节滑膜的效应。另外，附子汤提取物能通过调节rank/rankl轴，降低rankl/opg比值，减少破骨细胞的生成和分化，进而减轻cia大鼠骨关节骨侵蚀和骨损伤。
16、本专利技术提供附子汤提取物在制备治疗骨破坏疾病的药物中的应用。
17、进一步地，所述药物能改善关节骨损伤、或关节畸形。
18、进一步地，所述药物能降低抗酒石酸酸性磷酸酶含量。
19、进一步地，所述药物能减轻骨关节炎症并保护关节滑膜。
20、优选地，所述药物能保护膝关节和踝关节、减少关节的病变程度、解关节骨损伤程度。
21、本专利技术提供附子汤提取物在制备调节rank/rankl轴的制剂中的应用。
22、进一步地，所述表明附子汤提取物通过调节rank/rankl轴，来减少破骨细胞的生成和分化，减轻骨侵蚀和骨损伤，维持骨稳态。
23、优选地，所述制剂能降低rank蛋白、rankl蛋白和c-fos蛋白的表达。
24、优选地，所述制剂能促进opg蛋白的表达，降低rankl/opg的比值。
25、进一步地，所述骨破坏疾病为骨髓炎、骨结核、多发性骨髓瘤本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.附子汤提取物在制备抑制破骨细胞生成和/或分化的药物中的应用，其特征在于，所述附子汤提取物由质量比为(15-40)：(9-30)：(6-20)：(12-25)：(9-30)的炮附子、茯苓、人参、白术和白芍提取得到。
2.附子汤提取物在制备治疗骨破坏疾病的药物中的应用，其特征在于，所述附子汤提取物由质量比为(15-40)：(9-30)：(6-20)：(12-25)：(9-30)的炮附子、茯苓、人参、白术和白芍提取得到。
3.根据权利要求2所述应用，其特征在于，所述药物能改善关节骨损伤、或关节畸形。
4.根据权利要求2或3所述应用，其特征在于，所述药物能降低抗酒石酸酸性磷酸酶含量。
5.根据权利要求4所述应用，其特征在于，所述药物能减轻骨关节炎症并保护关节滑膜。
6.附子汤提取物在制备调节RANK/RANKL轴的制剂中的应用，其特征在于，所述附子汤提取物由质量比为(15-40)：(9-30)：(6-20)：(12-25)：(9-30)的炮附子、茯苓、人参、白术和白芍提取得到。
7.根据权利要求6所述应用，其特征
8.根据权利要求6所述应用，其特征在于，所述制剂能降低RANK蛋白、RANKL蛋白和c-Fos蛋白的表达。
9.根据权利要求8所述应用，其特征在于，所述制剂能促进OPG蛋白的表达，降低RANKL/OPG的比值。
10.根据权利要求2所述应用，其特征在于，所述骨破坏疾病为骨髓炎、骨结核、多发性骨髓瘤、转移性骨癌、类风湿关节炎或骨质疏松。
...【技术特征摘要】
1.附子汤提取物在制备抑制破骨细胞生成和/或分化的药物中的应用，其特征在于，所述附子汤提取物由质量比为(15-40)：(9-30)：(6-20)：(12-25)：(9-30)的炮附子、茯苓、人参、白术和白芍提取得到。
2.附子汤提取物在制备治疗骨破坏疾病的药物中的应用，其特征在于，所述附子汤提取物由质量比为(15-40)：(9-30)：(6-20)：(12-25)：(9-30)的炮附子、茯苓、人参、白术和白芍提取得到。
3.根据权利要求2所述应用，其特征在于，所述药物能改善关节骨损伤、或关节畸形。
4.根据权利要求2或3所述应用，其特征在于，所述药物能降低抗酒石酸酸性磷酸酶含量。
5.根据权利要求4所述应用，其特征在于，所述药物能减轻骨关节炎症并保护关节滑膜。
6.附子...
【专利技术属性】
技术研发人员：潘真真，李常青，
申请(专利权)人：广州中医药大学广州中医药研究院，
类型：发明
国别省市：
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