【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，尤其涉及一种混合型脂肪肝小鼠模型及其构建方法。
技术介绍
1、乙醇在肝脏中被代谢为乙醛和乙酸。乙酸可以通过乙酰辅酶a合成酶2(acss2)转化生成乙酰辅酶a，后者是脂质从头合成的关键底物；同时，大量饮酒造成肝脏氧化还原平衡被打破，肝细胞处于严重的氧化应激状态。因此，长期、大量饮酒，容易造成肝脏脂质合成异常增多，肝细胞氧化应激显著增强，由此引发肝细胞脂毒性及炎症浸润，最后造成酒精性脂肪肝(alcoholic fatty liver disease,afld)的发生。非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver disease,nafld)指除酒精和长期药物治疗、单基因遗传疾病及其他明确的肝脏损伤因素(如肝炎病毒等)以外所致的肝细胞内脂肪过度沉积为主要特征的临床病理综合征。nafld多伴随肥胖、糖尿病(胰岛素抵抗)、高脂血症等多种代谢性疾病的发生，是目前最为流行/增长最快的一种慢性肝病。非酒精性脂肪肝炎(nash)是指在脂肪变性的基础上具有更严重的肝小叶炎症和肝细胞损伤的病理状态。典型的nash伴有不同程度的纤维化，能够进一步进展至不可逆的肝硬化甚至肝癌。nash的发病呈现全球范围内的大规模高发态势，约占人口总数的25％；我国nash患者人数预计于2030年高达8000万。这种不断上升的疾病流行率势必带来巨大的社会和经济负担。然而，目前并无明确的靶向药物上市用于afld和nash治疗。因此，基于深入的afld和nafld病理机制研究和药物开发势必可以为酒精性和非酒精性脂肪肝病的治疗提供潜在
2、然而，目前的基础研究和药物开发均将afld和nafld作为单独的研究个体进行机制探究与药物的靶标论证。但是，随着人们的生活节奏的加快和生活方式的改变，在摄入大量高卡路里饮食加上大量饮酒，使得临床脂肪肝患者有较大比例为afld和nafld的混合型患者。目前两种因素诱导多重机制打击造成的脂肪肝的致病机制还不清楚，这更限制了相关机制的研究和靶向药物开发。因此，结合临床病理进程，构建混合型小鼠脂肪肝模型(命名为：cfld，co-fat liver disease)可以为基础研究和药物开发提供重要支持。
技术实现思路
1、针对现有技术存在的问题，本专利技术提供了一种混合型脂肪肝小鼠模型及其构建方法。
2、本专利技术是这样实现的，一种混合型脂肪肝小鼠模型构建方法，该方法包括：
3、s1：选择年龄为6-8周的健康c57bl/6j小鼠，体重相近(±2g)，确保所有动物在实验前经过至少一周的适应期，以减少环境变化的影响；
4、s2：使用随机数表或软件随机分配小鼠到四个组别：对照组、afld模型组、nafld模型组、cfld模型组；
5、s3：饮食和乙醇给予，确定实验周期，监测和评估；
6、s4：进行数据分析。
7、进一步，所述对照组给予标准小鼠饲料和清水，保持常规光照周期(12小时光照/12小时黑暗)；
8、所述afld模型组给予含5-15％乙醇的液体饮食或以水摄入形式给予乙醇，持续6-8周，根据先前文献来定乙醇的具体浓度和给予方式；
9、所述nafld模型组提供高脂饮食(含60％卡路里来自脂肪)或高果糖或高脂高糖高胆固醇饮食，持续20-24周，以诱导nafld；
10、所述cfld模型组结合高脂饮食和乙醇摄入，在给予20周高脂饮食(含60％卡路里来自脂肪)或高果糖或高脂高糖高胆固醇饮食后，同时给予高脂饮食(含60％卡路里来自脂肪)或高果糖或高脂高糖高胆固醇饮食，和5-15％乙醇液体饮食或者饮水，持续6-8周。
11、进一步，所述s2中，每组至少8-10只小鼠，以确保统计学的有效性。
12、进一步，所述饮食和乙醇给予具体包括：
13、确保所有饮食和乙醇给予均在特定时间内开始，以保持实验的一致性；定期更换饮食和乙醇水，以保持新鲜度和准确的浓度。
14、进一步，所述饮食和乙醇给予还包括：对于cfld组，设计一种高脂/高脂+高糖/高脂+高糖+高胆固醇，再叠加乙醇的饮食，其中高脂/高脂+高糖/高脂+高糖+高胆固醇饮食可通过商业获得或自行配制，乙醇浓度应根据先前研究确定，以确保既模拟高脂饮食也模拟长期饮酒的影响。
15、进一步，所述确定实验周期为6-8周，以允许足够的时间观察到显著的肝脏病理变化。
16、进一步，所述监测和评估具体包括：
17、s31：每周记录小鼠的体重和摄入量(食物和水)，以监控其健康状态和实验饮食的影响；
18、s32：实验结束时，采用无痛方法对小鼠进行麻醉并采集血液样本，测量血清alt和ast水平以评估肝损伤程度；
19、s33：对肝脏进行称重并固定一部分肝组织用于组织学分析，包括he染色和天狼星红染色，以评估脂肪沉积和纤维化情况。
20、进一步，所述s4具体包括：使用适当的统计方法(如anova或t-test)比较各组之间的体重变化、肝功能指标和组织学评分；确保数据分析过程中的盲法操作，以减少偏倚。
21、本专利技术另一目的在于提供一种混合型脂肪肝小鼠模型，采用权利要求1-8中任一所述混合型脂肪肝小鼠模型构建方法建立。
22、进一步，所述模型用于预防或治疗混合型脂肪肝药物的筛选；或用于不以疾病的诊断或治疗方法为目的的混合型脂肪肝发病机理的研究、药效学评价。
23、本专利技术还提供了一种用于构建混合型脂肪肝小鼠模型的自动化系统，该系统包括：
24、动物选择模块，用于自动选择年龄为6-8周的健康c57bl/6小鼠，并确保所有动物在实验前经过至少一周的适应期；
25、分组模块，使用随机数表或软件自动分配小鼠到对照组、afld模型组、nafld模型组和cfld模型组；
26、饮食和乙醇管理模块，用于自动控制和监测小鼠的饮食和乙醇摄入，包括标准饲料、高脂饮食、乙醇水和高脂加乙醇饮食的自动分配；
27、数据采集模块，用于自动记录小鼠的体重、摄入量、血液样本和组织样本；
28、数据分析模块，用于自动处理和分析采集到的数据，包括体重变化、肝功能指标和组织学评分，并生成实验报告。
29、本专利技术还提供了一种混合型脂肪肝小鼠模型构建的实验管理系统，该系统包括：
30、实验设计模块，用于制定实验方案，包括选择小鼠品种、分组方式、饮食和乙醇给予方案、实验周期和监测评估方法；
31、实验执行模块，用于按照实验设计模块制定的方案进行实验，包括小鼠的饲养、饮食和乙醇的给予、数据采集等；
32、数据存储模块，用于存储实验过程中采集到的所有数据，包括小鼠的体重、摄入量、血液样本和组织样本等数据；
33、数据分析模块，用于对存储的数据进行分析和处理，生成实验报告，包括各组之间的体重变化、肝功能指标和组织学评分的比较和分析。
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1.一种混合型脂肪肝小鼠模型构建方法，其特征在于，该方法包括：
2.如权利要求1所述混合型脂肪肝小鼠模型构建方法，其特征在于，所述对照组给予标准小鼠饲料和清水，保持常规光照周期；
3.如权利要求1所述混合型脂肪肝小鼠模型构建方法，其特征在于，所述S2中，每组至少8-10只小鼠，以确保统计学的有效性；所述饮食和乙醇给予具体包括：
4.如权利要求1所述混合型脂肪肝小鼠模型构建方法，其特征在于，所述饮食和乙醇给予还包括：对于CFLD组，设计一种高脂加乙醇的饮食，其中高脂饮食可通过商业获得或自行配制，乙醇浓度应根据先前研究确定，以确保既模拟高脂饮食也模拟长期饮酒的影响；所述确定实验周期为6周，以允许足够的时间观察到显著的肝脏病理变化。
5.如权利要求1所述混合型脂肪肝小鼠模型构建方法，其特征在于，所述监测和评估具体包括：
6.如权利要求1所述混合型脂肪肝小鼠模型构建方法，其特征在于，所述S4具体包括：使用适当的统计方法比较各组之间的体重变化、肝功能指标和组织学评分；确保数据分析过程中的盲法操作，以减少偏倚。
7.一种
8.一种混合型脂肪肝小鼠模型构建的实验管理系统，其特征在于，该系统包括：
9.一种混合型脂肪肝小鼠模型构建的监测与评估系统，其特征在于，该系统包括：
10.一种混合型脂肪肝小鼠模型，其特征在于，采用权利要求1-8中任一所述混合型脂肪肝小鼠模型构建方法建立；所述模型用于预防或治疗混合型脂肪肝药物的筛选；或用于不以疾病的诊断或治疗方法为目的的混合型脂肪肝发病机理的研究、药效学评价。
...【技术特征摘要】
1.一种混合型脂肪肝小鼠模型构建方法，其特征在于，该方法包括：
2.如权利要求1所述混合型脂肪肝小鼠模型构建方法，其特征在于，所述对照组给予标准小鼠饲料和清水，保持常规光照周期；
3.如权利要求1所述混合型脂肪肝小鼠模型构建方法，其特征在于，所述s2中，每组至少8-10只小鼠，以确保统计学的有效性；所述饮食和乙醇给予具体包括：
4.如权利要求1所述混合型脂肪肝小鼠模型构建方法，其特征在于，所述饮食和乙醇给予还包括：对于cfld组，设计一种高脂加乙醇的饮食，其中高脂饮食可通过商业获得或自行配制，乙醇浓度应根据先前研究确定，以确保既模拟高脂饮食也模拟长期饮酒的影响；所述确定实验周期为6周，以允许足够的时间观察到显著的肝脏病理变化。
5.如权利要求1所述混合型脂肪肝小鼠模型构建方法，其特征...
【专利技术属性】
技术研发人员：张明亮，薛超，房波，龚琦，余倩倩，张薇，
申请(专利权)人：海口市骨科与糖尿病医院上海市第六人民医院海口骨科与糖尿病医院，
类型：发明
国别省市：
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