【技术实现步骤摘要】
本申请涉及生物，尤其涉及一种特异性识别酸土脂环酸芽孢杆菌的核酸适配体及其应用。
技术介绍
1、酸土脂环酸芽孢杆菌(alicyclobacillus acidoterrestris，a.acidoterrestris)具有非致病性、嗜热嗜酸性，能在不适条件下形成芽孢的细菌。它可以在巴氏杀菌的酸性果汁中存活下来，是引起果汁、酸性饮料(尤其是巴氏灭菌的浓缩果汁)腐败变质的主要元凶。酸土脂环酸芽孢杆菌在果汁中会参与微生物代谢过程，生成愈创木酚、2,6-二溴苯酚和2,6-二氯苯酚等代谢产物，这些代谢产物会给消费者带来不愉快的“药味”、“消毒剂”和“烟熏味”，且在极低浓度下(0.01％)就会导致果汁口感和风味变劣，使澄清果汁出现浊度乃至形成白色沉淀等质量问题。目前，国际贸易严格规定每10ml浓缩果汁中酸土脂环酸芽孢杆菌数量不得超过1个。
2、目前，果汁工业中检测酸土脂环酸芽孢杆菌的方法存在无法兼顾检测准确与快速简便检测的问题。因此，亟需开发一种灵敏且快速简便的酸土脂环酸芽孢杆菌的检测技术。
技术实现思路
1、有鉴于此，本申请的目的在于提出一种特异性识别酸土脂环酸芽孢杆菌的核酸适配体及其应用。
2、基于上述目的，本申请提供了一种特异性识别酸土脂环酸芽孢杆菌的核酸适配体，所述核酸适配体的序列如seq id no.1所示或如seq id no.2所示。
3、在其中一些实施例中，所述核酸适配体的序列如seq id no.2所示。
4、在其中一些实施例中，
5、或，
6、所述核酸适配体的序列为seq id no.1或seq id no.2所示的序列的杂交序列；
7、或，
8、所述核酸适配体的序列为seq id no.1或seq id no.2所示的序列转录的rna序列。
9、在其中一些实施例中，所述核酸适配体的核苷酸序列上结合有标记物：
10、所述标记物包括荧光标记物、放射性物质、治疗性物质、生物素、地高辛、纳米发光材料、小肽、sirna和酶中的一种或多种。
11、在其中一些实施例中，所述核酸适配体的5'末端结合有荧光标记物。
12、在其中一些实施例中，所述核酸适配体的核苷酸序列被修饰：
13、所述修饰包括磷酸化、甲基化、氨基化、巯基化、用硫取代氧、用硒取代氧或同位素化中的一种或多种。
14、在其中一些实施例中，所述核酸适配体的核苷酸序列被衍生化：
15、所述衍生化包括将核苷酸序列的骨架衍生为硫代磷酸酯骨架序列，或将核苷酸序列衍生为肽核酸。
16、本申请实施例还提供一种如前所述的特异性识别酸土脂环酸芽孢杆菌的核酸适配体在制备酸土脂环酸芽孢杆菌检测试剂盒或酸土脂环酸芽孢杆菌分子探针中的应用。
17、本申请实施例还提供一种酸土脂环酸芽孢杆菌的检测方法，应用如前所述的特异性识别酸土脂环酸芽孢杆菌的核酸适配体，所述检测方法包括如下步骤：
18、s1.对核酸适配体的末端进行fam荧光基团标记；
19、s2.将标记后的核酸适配体与酸土脂环酸芽孢杆菌靶标菌混合，避光反应1～1.5h后，离心测定上清液的荧光值。
20、在其中一些实施例中，步骤s2中的标记后的核酸适配体的浓度为98～102nm。
21、本申请实施例还提供一种用于检测酸土脂环酸芽孢杆菌的试剂盒，所述试剂盒包括如前任一项所述的特异性识别酸土脂环酸芽孢杆菌的核酸适配体。
22、从上面所述可以看出，本申请提供的可特异性识别酸土脂环酸芽孢杆菌的核酸适配体及其应用，可以通过测量荧光信号的强度来检测果汁中的腐败菌酸土脂环酸芽孢杆菌，具有检测灵敏度高，且成本低以及检测快速等优点，因此，能够在一定程度上解决目前对于果汁工业中酸土脂环酸芽孢杆菌的检测方法存在无法兼顾检测准确与快速简便检测的问题。
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1.一种特异性识别酸土脂环酸芽孢杆菌的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的序列包括：
2.根据权利要求1所述的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的序列如SEQ IDNO.1所示或如SEQ ID NO.2所示。
3.根据权利要求1所述的核酸适配体，其特征在于，所述与SEQ ID NO.1的序列具有60％以上同源性的序列包括如SEQ ID NO.3所示的序列或如SEQ ID NO.4所示的序列；或
4.根据权利要求1所述的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的核苷酸序列上结合有标记物：
5.根据权利要求4所述的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的5'末端结合有荧光标记物。
6.根据权利要求1所述的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的核苷酸序列被修饰：
7.如权利要求1所述的特异性识别酸土脂环酸芽孢杆菌的核酸适配体在制备酸土脂环酸芽孢杆菌检测试剂盒或酸土脂环酸芽孢杆菌分子探针中的应用。
8.一种酸土脂环酸芽孢杆菌的检测方法，其特征在于，应用权利要求1中所述的特异性识别酸土脂环酸芽孢杆菌
9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，步骤S2中的标记后的核酸适配体的浓度为98～102nM。
10.一种用于检测酸土脂环酸芽孢杆菌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1-6任一项所述的特异性识别酸土脂环酸芽孢杆菌的核酸适配体。
...【技术特征摘要】
1.一种特异性识别酸土脂环酸芽孢杆菌的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的序列包括：
2.根据权利要求1所述的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的序列如seq idno.1所示或如seq id no.2所示。
3.根据权利要求1所述的核酸适配体，其特征在于，所述与seq id no.1的序列具有60％以上同源性的序列包括如seq id no.3所示的序列或如seq id no.4所示的序列；或
4.根据权利要求1所述的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的核苷酸序列上结合有标记物：
5.根据权利要求4所述的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的5'末端结合有荧光标记物。
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【专利技术属性】
技术研发人员：王向红，崔琦琦，桑亚新，张富源，刘若冰，于文龙，
申请(专利权)人：河北农业大学，
类型：发明
国别省市：
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