本发明专利技术涉及一种ABO亚型检定试剂盒的制备方法,所述试剂盒由四张微柱凝胶检测卡组成:一张ABO亚型定型卡、一张ABO亚型定型卡I型、一张ABO亚型定型卡II型和一张ABO亚型定型卡III型,所述每张卡均具有6个微柱凝胶管。所述方法包括以下工艺过程:凝胶悬浮介质的配制、凝胶的制备、抗体的选择、凝胶的悬浮和分装。采用本发明专利技术方法制备的ABO亚型检定试剂盒灵敏度高,特异性好,质量稳定且能系统的检测ABO血型系统的亚型。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种用于ABO亚型检定试剂盒及其应用。更具体的说,本专利技术涉及一 种ABO亚型检定试剂盒的组成、制备方法及其应用,涉及输血医学领域。(二)
技术介绍
正确鉴定血型是安全输血的首要步骤,输血是临床抢救病人生命的重要医疗手段 之一,而准确的ABO亚型检定则是安全输血的保障。ABO血型系统是最重的血型系统,也是 比较复杂的血型系统之一,这正是由于ABO血型系统存在着多种亚型。ABO血型的鉴定,是 由正反定型两者决定的,正定型检测红细胞的抗原,反定型检测人血清中的抗体。正反方 向ABO血型抗原和抗体同时检测,才能正确地、完整地进行ABO血型的定型检测。因为有许 多肿瘤及感染性疾病病情严重的患者、老年人等诸多情况下,正反定型结果不一致,因此对 临床患者正确判断血型,必须ABO血型正反定型,其意义更为重要,往往直接关系到输血安 全。 ABO血型系统具有多种亚型,其亚型是表型,很多亚型具有特异性的抗原,主要是 经血型血清学试验仪抗原性弱为主要特征的多种表型。而经血型血清学确定的红细胞同一 ABO亚型,经过抗原分子水平、糖基转移酶和基因水平研究等,亦证实其存在着异质性。对一些ABO亚型的基因基础进行了研究,如A2和A3,发现同一 ABO血型亚型,具有不同的基因背旦 豕。 近期杜若莆研究员在其专著中总结了我国汉族人超过100万人的调查结果。其中A型、B型、AB型和O型的频率分别为20% -30%、20% _38%、6% _12%、和30% -40%。世界各地区人种间的ABO型频率见下表。 ABO血型抗原在各人种间的分布频率表<table>table see original document page 4</column></row><table> Ai和4是血型血清学方法确定的最重要的A型红细胞亚型。 一般认为,有两种A 型抗原A和4。 ^型红细胞上有这两种抗原,4型红细胞只要A抗原。B型人血清中含有 两种抗体抗-A和抗-A15 型人红细胞与这两种抗体反应,A2型人红细胞这只与抗-A反 应。B型人血清经A2红细胞吸收后,只与型红细胞反应,但过量地用A2型红细胞吸收,则失去所有抗体。占1% _22%的^型人和22%-26%的^8型人的血清中可能产生抗41。 在室温下,该抗-A只凝集&红细胞,不凝集A2红细胞。 A3型红细胞的最大特征是混合视野凝集,即A3细胞与抗-A和大多数抗-A, B孵育 后出现一些油数个红细胞形成的小凝集块,并被绝大部分游离的非凝集红细胞包围。大部 分A3人血清中无抗-A偶见A3人有抗分泌型人唾液中有A型物质。A3红细胞表明有 较强H抗原,但是A3型人血清中H转移酶水平却在很大程度上低于&或A2血清。A3红细 胞是血清学试验鉴定的,但在分析A3型人血清中转移酶及其基因时发现,虽然都是A3的人 血清,其有关酶和基因都不近一致,存在着异质性。 Ax表型主要血清学特征是与大多数B型人血清中的抗-A不发生凝集,而与大多 数0型抗-^B发生凝集。不出现混合视野凝集。血清中经常含有抗-A,偶尔含有既凝集 A也凝聚A2的抗体。Ax分泌型唾液中含有正常的H抗原,但H抗原极少。Ax红细胞能吸收 抗-A,但放散抗-A的能力要比&红细胞强。 Ael红细胞一般情况不被抗-A或抗-A, B凝集,但经吸收放散试验可证实结合抗-A、抗-B。唾液中含有H物质,不含A物质。血清中含抗-Ap也可能含抗-4。血清中及红细胞膜上均查不到A转移酶,血清中H转移酶要弱于&和A2型人血清中的酶。 西方人的B亚型要少于A亚型。在日本,Yamaguchi等研究了 700000名献血员,发现有B型抗原人频率是A型的一半,但Bx和Bm频率要比Ax和Am高很多。在我国,胡荣花灯发现82亚型人的红细胞、血清、唾液标本检测等特征都与A2相同,我国B亚型频率高于A亚型。确定对B亚型的判定标准比较困难,对B亚型的判定应与A亚型的标准大致相同。如B3细胞最主要的特征与A3相同,即与相应抗体出现混合视野外观。此外绝大多数B3血清中无抗-B,唾液中正常的B抗原。同A3 —样,B3在基因水平上也具有异质性。 Bx细胞也存在异质性。典型的Bx特征是与抗-A, B和抗_B发生弱凝集;血清中含很弱的抗-B ;分泌型Bx人唾液中含有B物质,Bx细胞可以作为指示细胞,经凝集抑制试验证实唾液中有B物质。Bx个体的血清和红细胞膜上未检出B-转移酶。 1959年Cameron报道,在4年时间里,发现了 7例患者红细胞上有B抗原,而血清中有抗-B,但该抗-B并不与自身红细胞B抗原反应。这些人分泌中有A和H抗原,却无B抗原。Cameron认为这类B抗原不是红细胞本身的,而是获得性B抗原,与疾病有关。20时间70年代,发现获得性B患者不含有B转移酶,90年代应用分子生物学技术进行限制性片段长度多态性研究表明,获得性B抗原患者并不含有B基因。这样在基因水平更明确了获得性B的性质。 1952年Bhende等在印度发现了 3个人的红细胞为0型,缺失H抗原,分泌液中无H抗原,但在血清中有抗-H抗体,称该类血型为孟买型或Oh型,也称之非分泌孟买型。 —些非分泌型人的红细胞缺失H,但是也抗-A和(或)抗-B反应都出现弱凝集,此类人称Ah、 Bh、或ABh, H部分缺失的非分泌型人被称之为副孟买型,在欧洲人种该类型比较多。但是目前福孟买型也包括了 H抗原完全缺失和H部分缺失的分泌型人。 从上述可知,为常人所熟知的ABO血型系统其实是非常复杂的,而且其是最重的血型系统,存在的亚型也较多,所以准确、快速、简便的进行ABO亚型检定就显得极其重要。而正确鉴定血型则是安全输血的首要步骤,输血是临床抢救病人生命的重要医疗手段之一,准确的ABO血型鉴定则是安全输血的保障。 目前国内,还没有系统的成套产品用于ABO亚型检定的试剂,试剂难以获得;其二是需要多种抗体和多种反定红细胞才能最终确定ABO亚型;其三是采用传统的试管方法很繁琐,使得很多医疗机构不进行ABO亚型检定,从而导致了严重的输血事故。 在国外,已经有少部分厂家生产用于亚型检定的产品,但其采用的凝胶为葡聚糖凝胶,此凝胶的颗粒大小为70纳米以上,颗粒较大,凝胶之间的缝隙较大,从而使得进行ABO亚型检定的灵敏度降低。此外,已有的卡不成系列,只能检测单个的亚型,不能系统的检测ABO血型系统的亚型。此外,国外ABO亚型检定抗体不全,其针对的人群也有所不同。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服上述不足,提供一种灵敏度高、特异性好、质量稳定且能系 统的检测ABO血型系统的亚型的ABO亚型检定试剂盒。 本专利技术的目的是这样实现的一种ABO亚型检定试剂盒,所述试剂盒由四张微柱凝胶检测卡组成,所述四张微柱凝胶检测卡分别为一张ABO亚型定型卡、一张ABO亚型定型卡I型、一张ABO亚型定型卡II型和一张ABO亚型定型卡III型,所述每张卡均具有6个微柱凝胶管,其中所述ABO亚型定型卡的6个微柱凝胶管分别是一管含有IgM性质的单克隆抗A抗体的凝胶管、一管含有IgM性质的单克隆抗A抗体的凝胶管、一管含有IgM性质的单克隆抗B抗体的凝胶管和三管用于反定型的含有凝胶悬浮介质的凝胶管;所述AB本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种ABO亚型检定试剂盒的制备方法,其特征在于:所述试剂盒由四张微柱凝胶检测卡组成,所述四张微柱凝胶检测卡分别为一张ABO亚型定型卡、一张ABO亚型定型卡Ⅰ型、一张ABO亚型定型卡Ⅱ型和一张ABO亚型定型卡Ⅲ型,所述每张卡均具有6个微柱凝胶管,其中所述ABO亚型定型卡的6个微柱凝胶管分别是一管含有IgM性质的单克隆抗A抗体的凝胶管、一管含有IgM性质的单克隆抗A↓[1]抗体的凝胶管、一管含有IgM性质的单克隆抗B抗体的凝胶管和三管用于反定型的含有凝胶悬浮介质的凝胶管;ABO亚4, 步骤四、凝胶的配制 将步骤二制备的凝胶与步骤三选择的各抗体均按照体积比2∶1~3∶1的比例混合,分别配制成含有IgM性质的单克隆抗A抗体的凝胶、含有IgM性质的单克隆抗B抗体的凝胶、含有IgM性质的单克隆抗AB抗体的凝胶、含有IgM性质的单克隆抗A↓[1]抗体的凝胶和含有IgM性质的单克隆抗H抗体的凝胶;将步骤二制备的凝胶与步骤一配制的凝胶悬浮介质按照体积比2∶1~3∶1的比例混合,配制成含有凝胶悬浮介质的凝胶, 步骤五、分装 按照每管22~28微升的量,将步骤四配制的各凝胶分别按不同的用途加入到四张空白卡片(6管/卡)的微柱管中,分别形成具有6个微柱凝胶管的ABO亚型定型卡、ABO亚型定型卡Ⅰ型、ABO亚型定型卡Ⅱ型和ABO亚型定型卡Ⅲ型,从而组成了一套ABO亚型检定试剂盒。型定型卡Ⅰ型的6个微柱凝胶管分别是一管含有IgM性质的单克隆抗A抗体的凝胶管、一管含有IgM性质的单克隆抗A↓[1]抗体的凝胶管、一管含有IgM性质的单克隆抗B抗体的凝胶管、一管含有IgM性质的单克隆抗AB抗体的凝胶管和两管用于反定型的含有凝胶悬浮介质的凝胶管;ABO亚型定型卡Ⅱ型的6个微柱凝胶管分别是一管含有IgM性质的单克隆抗A抗体的凝胶管、一管含有IgM性质的单克隆抗A↓[1]抗体的凝胶管、一管含有IgM性质的单克隆抗B抗体的凝胶管、一管含有IgM性质的单克隆抗AB抗体的凝胶管、一管含有IgM性质的单克隆抗H抗体的凝胶管和一管用作自身对照的含有凝胶悬浮介质的凝胶管;ABO亚型定型卡Ⅲ型的6个微柱凝胶管分别是一管含有IgM性质的单克隆抗A抗体的凝胶管、一管含有IgM性质的单克隆抗A↓[1]抗体的凝胶管、一管含有IgM性质的单克隆抗B抗体的凝胶管、两管用于反定型的含有凝胶悬浮介质的凝胶管和一管用作自身对照的含有凝胶悬浮介质的凝胶管,所述...
【技术特征摘要】
一种ABO亚型检定试剂盒的制备方法,其特征在于所述试剂盒由四张微柱凝胶检测卡组成,所述四张微柱凝胶检测卡分别为一张ABO亚型定型卡、一张ABO亚型定型卡I型、一张ABO亚型定型卡II型和一张ABO亚型定型卡III型,所述每张卡均具有6个微柱凝胶管,其中所述ABO亚型定型卡的6个微柱凝胶管分别是一管含有IgM性质的单克隆抗A抗体的凝胶管、一管含有IgM性质的单克隆抗A1抗体的凝胶管、一管含有IgM性质的单克隆抗B抗体的凝胶管和三管用于反定型的含有凝胶悬浮介质的凝胶管;ABO亚型定型卡I型的6个微柱凝胶管分别是一管含有IgM性质的单克隆抗A抗体的凝胶管、一管含有IgM性质的单克隆抗A1抗体的凝胶管、一管含有IgM性质的单克隆抗B抗体的凝胶管、一管含有IgM性质的单克隆抗AB抗体的凝胶管和两管用于反定型的含有凝胶悬浮介质的凝胶管;ABO亚型定型卡II型的6个微柱凝胶管分别是一管含有IgM性质的单克隆抗A抗体的凝胶管、一管含有IgM性质的单克隆抗A1抗体的凝胶管、一管含有IgM性质的单克隆抗B抗体的凝胶管、一管含有IgM性质的单克隆抗AB抗体的凝胶管、一管含有IgM性质的单克隆抗H抗体的凝胶管和一管用作自身对照的含有凝胶悬浮介质的凝胶管;ABO亚型定型卡III型的6个微柱凝胶管分别是一管含有IgM性质的单克隆抗A抗体的凝胶管、一管含有IgM性质的单克隆抗A1抗体的凝胶管、一管含有IgM性质的单克隆抗B抗体的凝胶管、两管用于反定型的含有凝胶悬浮介质的凝胶管和一管用作自身对照的含有凝胶悬浮介质的凝胶管,所述方法包括以下工艺过程步骤一、凝胶悬浮介质的配制所述凝胶悬浮介质配方如下对羟基苯甲酸甲酯(5.5-6.5)×10-4g/ml...
【专利技术属性】
技术研发人员:陈玉平,钱国强,朱庆平,
申请(专利权)人:江阴力博医药生物技术有限公司,
类型:发明
国别省市:32[中国|江苏]
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