【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医学，具体涉及抗痤疮的重组蛋白疫苗及制备方法和应用。
技术介绍
1、痤疮是世界上第八大流行病，影响全球超过6.4亿人。根据《2019版中国痤疮治疗指南》显示，我国人群截面统计痤疮发病率为81％，但有超过95％的人会不同程度发生痤疮。痤疮的发作通常与青春期荷尔蒙变化同时发生，并且该病症影响大约85％的12至25岁的青少年和年轻人。痤疮也可以持续到成年期或在成年期发展。痤疮病变和/或疤痕可能在成人中持续存在。尽管痤疮不是一种危及生命的疾病，但痤疮的心理负担可能很高且被低估了。最近的一项研究表明，痤疮会对90％的患者的生活质量产生负面影响。值得注意的是，超过一半的痤疮患者表现出严重的情绪障碍，包括焦虑，这是最普遍的症状。抑郁和明显的情绪困扰，。痤疮患者，尤其是最严重的痤疮患者，需要有效和安全的治疗。
2、目前对痤疮发病机制的理解在不断发展中，研究发现痤疮的发病也可能受到家族遗传、饮食、压力以及环境等其它因素影响。作为一种影响皮肤毛囊皮脂腺单位的慢性炎症性疾病，发挥重要作用的关键致病因素包括毛囊皮脂腺导管异常角化、皮脂腺活动紊乱、微生物异常定植、激素微环境失调以及先天性免疫与适应性免疫功能障碍等多种因素之间错综复杂的相互作用，而痤疮丙酸杆菌(cutibacterium acne，c.acnes)作为世界公认的寻常痤疮机会性病原体受到科学家的广泛关注，其和皮肤微生物群之间的紧密平衡在痤疮发展过程中起关键作用。但目前临床上用于痤疮治疗的抗生素无法特异地针对该靶标微生物，如果我们针对c.acnes这一导致痤疮发生
3、痤疮丙酸杆菌是一种生长相对缓慢的厌氧嗜脂性革兰氏阳性细菌。健康成人皮肤中，c.acnes定植于面部和上半身的毛囊皮脂腺，它们主要生活在毛囊和毛孔深处，利用周围皮肤组织的皮脂、细胞碎片和代谢副产物作为其能量和营养的主要来源。在正常情况下，c.acnes和皮肤细胞“和谐共处”，但是当毛囊中的皮脂腺过度活跃(皮脂腺增生)或毛囊堵塞导致皮脂分泌增多时，可导致痤疮丙酸杆菌过度生长和繁殖。痤疮丙酸杆菌能够产生可与宿主相互作用的分泌型或表面附着因子，例如具有溶血活性的christie-atkins-munchpetersen(camp)因子，具有纤维蛋白原结合活性的硫酸皮肤素结合粘附素(dsa)，具有促炎潜力的卟啉，短链脂肪酸和宿主组织成分降解酶(如脂肪酶、唾液酸酶和透明质酸酶)。总之，痤疮丙酸杆菌在皮肤的过度繁殖产生痤疮丙酸杆菌毒力因子、蛋白酶以及粘附分子等导致宿主免疫炎症反应是导致痤疮发生的重要原因。
4、根据寻常型痤疮基层治疗指南(2023年)，目前痤疮治疗方式主要为外用药物治疗、系统性药物治疗以及物理化学治疗等。外用药物治疗主要为维a酸类药物及抗氧化剂，可以杀灭痤疮丙酸杆菌、改善毛囊皮脂腺导管角化，溶解微粉刺和粉刺等，但外用药局部使用，难以全面覆盖痤疮发病部位。口服药物治疗主要为抗菌药物以及激素类药物，针对痤疮丙酸杆菌及炎症反应选择具有抗菌和抗炎作用的抗菌药物进行治疗，可能产生耐药问题。维a酸也可以口服使用，应仅限于严重痤疮的病例。有报告称，异维a酸治疗完成后六个月自杀风险增加。激素类药物口服不能长期大剂量使用，会诱导药物性痤疮及其他不良反应。物理与化学治疗主要采用光动力与红蓝光、激光与强脉冲光、射频、化学剥脱治疗，也可能会对其他正常皮肤有物理或化学损伤。因此，痤疮治疗仍需要更好的治疗手段。
5、camp因子与痤疮丙酸杆菌相关的痤疮发病机制具有密切的相关性。当痤疮丙酸杆菌camp 2基因敲除后，可显著地降低痤疮丙酸杆菌的定植，减少痤疮小鼠模型局部免疫细胞浸润以及皮损组织中炎症细胞因子的表达水平，以此确定了camp2是痤疮治疗重要的候选靶点。如果能针对痤疮丙酸杆这一重要组分设计疫苗，可以突破现有临床治疗手段的局限性，降低痤疮发病的严重程度，降低炎症因子产生，减少瘢痕发生的概率，
技术实现思路
1、痤疮丙酸杆菌是一种厌氧菌，原本和皮肤细胞“和谐共处”。但是由于面部油脂分泌过多，堵塞毛囊，造成了一个厌氧环境，痤疮丙酸杆菌大量繁殖，进而分泌的一种毒力因子christie-atkins-munch-peterson因子(camp因子)。
2、为了解决痤疮疾病缺乏有效预防和治疗药物的问题，本专利技术提供了针对痤疮丙酸杆菌camp毒力因子为靶点的重组蛋白疫苗，其主要是通过诱导体内产生抗体等免疫反应，中和camp毒力因子，抑制皮肤炎症反应，对痤疮能够起到预防和治疗效果。
3、为此，本专利技术的目的在于提供预防和/或治疗痤疮的蛋白：其为痤疮丙酸杆菌camp野生型蛋白或其突变体。本专利技术的另一目的在于提供含有所述的蛋白用于预防和/或治疗痤疮杆菌感染的疫苗。
4、为了实现上述目的，本专利技术首先提供预防和/或治疗痤疮的蛋白，其是氨基酸序列如seq id no：1所示痤疮丙酸杆菌camp野生型蛋白(camp factor 2)；
5、或与seq id no.1具有同源性且相同或相似的生物学活性的蛋白变体。
6、优选地，所述蛋白变体是与seq id no.1具有至少70％、80％、90％、95％、97％、98％、99％或99％以上同源性且相同或相似的生物学活性。
7、更优选地，所述蛋白变体是在seq id no.1上包含至少一个如下的突变：
8、(a)第82位为甘氨酸(g)、苏氨酸(t)、丝氨酸(s)、酪氨酸(y)；
9、(b)第153位为甘氨酸(g)、丝氨酸(s)、苏氨酸(t)、酪氨酸(y)；
10、(c)第154位为甘氨酸(g)、谷氨酰胺(q)、苏氨酸(t)、丝氨酸(s)、酪氨酸(y)；
11、(d)第158位为甘氨酸(g)、谷氨酰胺(q)、苏氨酸(t)、丝氨酸(s)、酪氨酸(y)；
12、(e)第160位为甘氨酸(g)、谷氨酰胺(q)、苏氨酸(t)、丝氨酸(s)、酪氨酸(y)；
13、(f)第161位为甘氨酸(g)、谷氨酰胺(q)、苏氨酸(t)、丝氨酸(s)、酪氨酸(y)。
14、最优选地，所述蛋白变体的氨基酸序列是将痤疮丙酸杆菌的camp factor 2蛋白的第82位的甲硫氨酸(m)突变为甘氨酸(g)，所述蛋白变体的氨基酸序列如seq id no.3所示。
15、其中，编码所述痤疮丙酸杆菌camp蛋白变体的核苷酸序列如seq id no：4所示。
16、本专利技术还提供了上述预防和/或治疗痤疮的蛋白前体，其是在所述预防和/或治疗痤疮的蛋白上连接了信号肽和/或蛋白标签；优选地，所述的蛋白标签选自如下至少一种：组氨酸标签、硫氧还蛋白标签、谷胱甘肽转移酶标签、泛素样修饰蛋白标签、麦芽糖结合蛋白标签、c-myc蛋白标签、avi tag蛋白标签、氮源利用物质a蛋白标签。
17、其中，在所述预防和/或治疗痤疮的蛋白上还本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.预防和/或治疗痤疮的蛋白，其特征在于：其是氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示的痤疮丙酸杆菌CAMP野生型蛋白；
2.根据权利要求1所述的预防和/或治疗痤疮的蛋白，其特征在于：蛋白变体是与SEQIDNo.1具有至少70％、80％、90％、95％、97％、98％、99％或99％以上同源性且相同或相似的生物学活性。
3.根据权利要求1所述的预防和/或治疗痤疮的蛋白，其特征在于：所述蛋白变体是在SEQ ID No.1上包含至少一个如下的突变：
4.根据权利要求3所述的预防和/或治疗痤疮的蛋白，其特征在于：所述蛋白变体的氨基酸序列是将痤疮丙酸杆菌CAMP factor 2野生型蛋白的第82位的甲硫氨酸突变为甘氨酸，氨基酸序列如SEQ ID No.3所示。
5.根据权利要求4所述的预防和/或治疗痤疮的蛋白，其特征在于：编码所述痤疮丙酸杆菌CAMP蛋白变体的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。
6.蛋白前体，其特征在于：其是在所述权利要求1～5任一项所述预防和/或治疗痤疮的蛋白上连接了信号肽和/或蛋白标签；优选地，所述的蛋
7.根据权利要求6所述的蛋白前体，其特征在于：在所述预防和/或治疗痤疮的蛋白上还连接了切除蛋白标签的蛋白酶识别区；优选地，所述的蛋白酶选自如下至少一种：肠激酶、TEV蛋白酶、凝血酶、凝血因子Xa、羧肽酶A、鼻病毒3c蛋白酶。
8.权利要求1～5任一项所述的蛋白或权利要求6～7任一项所述的蛋白前体在制备预防和/或治疗痤疮或痤疮丙酸杆菌引起或引发的药物中的用途。
9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于：所述痤疮是由痤疮丙酸杆菌感染引起。
10.预防和/或治疗痤疮的重组蛋白疫苗，其特征在于：其含有权利要求1～5任一项所述的蛋白或权利要求6～7任一项所述的蛋白前体，以及药学上可接受的辅料或者辅助性成分。
11.根据权利要求10所述的重组蛋白疫苗，其特征在于：所述的辅助性成分为免疫佐剂；优选地，所述的免疫佐剂选自如下至少一种：铝盐、钙盐、植物皂苷、植物多糖、单磷酸脂质A、胞壁酰二肽、胞壁酰三肽、含角鲨烯水包油乳剂、重组霍乱毒素、GM-CSF细胞因子、脂质、阳离子脂质体材料、CpG ODN、TLR3。
12.根据权利要求11所述的重组蛋白疫苗，其特征在于：满足以下至少一项：所述的铝盐选自氢氧化铝、明矾中至少一种；所述的钙盐为磷酸三钙；所述的植物皂苷为QS-21或ISCOM；所述的植物多糖为黄芪多糖；所述的脂质选自如下至少一种：磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱、胆固醇、二油酰基磷脂酰乙醇胺；所述的阳离子脂质体材料选自如下至少一种：(2,3-二油氧基丙基)三甲基氯化铵、N-[1-(2,3-二油酰氯)丙基]-N,N,N-氯化三甲胺、阳离子胆固醇、三氟乙酸二甲基-2,3-二油烯氧基丙基-2-(2-精胺甲酰氨基)乙基铵、溴化三甲基十二烷基铵、溴化三甲基十四烷基铵、溴化三甲基十六烷基铵、溴化二甲基双十八烷基铵；优选地，所述免疫佐剂选自氢氧化铝佐剂或WGa01佐剂中至少一种。
13.根据权利要求10～12任一项所述的重组蛋白疫苗，其特征在于：所述的疫苗的剂型为皮内或皮下注射制剂、肌肉注射制剂、静脉注射制剂、口服或鼻腔吸入制剂；优选地，所述的疫苗剂型为肌肉注射制剂。
14.权利要求10～13任一项所述的疫苗在制备预防和/或治疗痤疮丙酸杆菌感染引起的感染性疾病的药物中的用途。
15.多核苷酸，其特征在于：其编码权利要求1～5任一项所述的蛋白或权利要求6～7任一项所述的蛋白前体；优选地，所述多核苷酸的核苷酸序列选自SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4中至少一种。
16.重组载体，其特征在于：其含有权利要求15所述的多核苷酸。
17.如权利要求16所述重组载体，其特征在于：采用大肠杆菌表达载体、昆虫杆状病毒表达载体、哺乳动物细胞表达载体、酵母表达载体中至少一种；优选地，所述大肠杆菌表达载体为pET-30a；优选地，所述的昆虫杆状病毒表达载体为pFastBac1；优选地，所述的哺乳动物细胞表达载体为CHO细胞表达载体；进一步优选地，所述的CHO细胞表达载体为pTT5或FTP-002。
18.宿主细胞，其特征在于：含有权利要求16或17任一项所述的重组载体；进一步地，所述的宿主细胞采用大肠杆菌。
19.预防和/或治疗痤疮的蛋白的制备方法，其特征在于...
【技术特征摘要】
1.预防和/或治疗痤疮的蛋白，其特征在于：其是氨基酸序列如seq id no：1所示的痤疮丙酸杆菌camp野生型蛋白；
2.根据权利要求1所述的预防和/或治疗痤疮的蛋白，其特征在于：蛋白变体是与seqidno.1具有至少70％、80％、90％、95％、97％、98％、99％或99％以上同源性且相同或相似的生物学活性。
3.根据权利要求1所述的预防和/或治疗痤疮的蛋白，其特征在于：所述蛋白变体是在seq id no.1上包含至少一个如下的突变：
4.根据权利要求3所述的预防和/或治疗痤疮的蛋白，其特征在于：所述蛋白变体的氨基酸序列是将痤疮丙酸杆菌camp factor 2野生型蛋白的第82位的甲硫氨酸突变为甘氨酸，氨基酸序列如seq id no.3所示。
5.根据权利要求4所述的预防和/或治疗痤疮的蛋白，其特征在于：编码所述痤疮丙酸杆菌camp蛋白变体的核苷酸序列如seq id no：4所示。
6.蛋白前体，其特征在于：其是在所述权利要求1～5任一项所述预防和/或治疗痤疮的蛋白上连接了信号肽和/或蛋白标签；优选地，所述的蛋白标签选自如下至少一种：组氨酸标签、硫氧还蛋白标签、谷胱甘肽转移酶标签、泛素样修饰蛋白标签、麦芽糖结合蛋白标签、c-myc蛋白标签、avi tag蛋白标签、氮源利用物质a蛋白标签。
7.根据权利要求6所述的蛋白前体，其特征在于：在所述预防和/或治疗痤疮的蛋白上还连接了切除蛋白标签的蛋白酶识别区；优选地，所述的蛋白酶选自如下至少一种：肠激酶、tev蛋白酶、凝血酶、凝血因子xa、羧肽酶a、鼻病毒3c蛋白酶。
8.权利要求1～5任一项所述的蛋白或权利要求6～7任一项所述的蛋白前体在制备预防和/或治疗痤疮或痤疮丙酸杆菌引起或引发的药物中的用途。
9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于：所述痤疮是由痤疮丙酸杆菌感染引起。
10.预防和/或治疗痤疮的重组蛋白疫苗，其特征在于：其含有权利要求1～5任一项所述的蛋白或权利要求6～7任一项所述的蛋白前体，以及药学上可接受的辅料或者辅助性成分。
11.根据权利要求10所述的重组蛋白疫苗，其特征在于：所述的辅助性成分为免疫佐剂；优选地，所述的免疫佐剂选自如下至少一种：铝盐、钙盐、植物皂苷、植物多糖、单磷酸脂质a、胞壁酰二肽、胞壁酰三肽、含角鲨烯水包油乳剂、重组霍乱毒素、g...
【专利技术属性】
技术研发人员：李炯，黄浓郁，魏于全，
申请(专利权)人：成都威斯克生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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