【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于抗体药物领域，具体涉及一种抗siglec-15抗体及其应用。
技术介绍
1、唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素(sialic acid-binding immunoglobulin-like lectin，siglec)家族是一类经典的免疫球蛋白样凝集素，可通过识别含有唾液酸的糖链结构，介导细胞与细胞或病原体间的相互作用，在固有免疫和适应性免疫中发挥重要的调控作用。siglec特异性表达于髓系细胞和免疫细胞表面，目前已发现15种人源和9种鼠源的siglec分子。
2、siglec-15为在进化中高度保守的siglec家族成员，siglec-15表达于肿瘤相关巨噬细胞上，由m-csf(一种诱导巨噬细胞选择性活化/极化的细胞因子)诱导。其胞外区有两个免疫球蛋白样结构域：“c2-set”结构域和“v-set”结构域，跨膜区包含一个与12kda的信号衔接分子dnax活化蛋白(dap12)相互作用起到关键作用的赖氨酸残基(lys274，人siglec-15)，siglec-15和dap12的相互作用是通过跨膜区的离子键作用。dap12具有非常短的胞外结构域(＜20个氨基酸)，跨膜区包含一个天冬氨酸残基(asp50，人dap12)，胞内区有一个itam(immunoreceptor tyrosine-based activating motif)，通过itam招募syk使其磷酸化，以传递信号，从而发挥免疫抑制功能，提示siglec-15是一种在肿瘤微环境中参与免疫逃逸的分子，可以作为癌症的治疗靶标。
3、基
技术实现思路
1、本专利技术采用噬菌体展示技术和酵母展示技术，针对人siglec-15，获得抗siglec-15单克隆，再通过对单克隆进行构建、表达、纯化和检测，获得亲和力高且在人混合淋巴细胞反应中能够逆转siglec-15蛋白对人pbmc的t细胞增殖抑制作用及逆转siglec-15蛋白抑制pbmc释放inf-γ的特异性抗siglec-15抗体，并通过生物学方法获得抗siglec-15抗体的重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列。
2、一方面，本专利技术提供一种分离的抗siglec-15抗体或其抗原结合片段。在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段结合人siglec-15。在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段结合食蟹猴siglec-15。在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段能够逆转siglec-15蛋白对人pbmc的t细胞增殖抑制作用。在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段能够逆转siglec-15蛋白抑制pbmc释放inf-γ。
3、在某些实施方式中，所述抗siglec-15抗体或其抗原结合片段，其包含：hcdr1，其与seq id no:4或seq id no:7的氨基酸序列具有至少80％的同源性、至少85％的同源性、至少90％的同源性、至少91％的同源性、至少92％的同源性、至少93％的同源性、至少94％的同源性、至少95％的同源性、至少96％的同源性、至少97％的同源性、至少98％的同源性或至少99％的同源性。在某些实施方式中，所述hcdr1序列为seq id no:4或seq id no:7。
4、在某些实施方式中，所述抗siglec-15抗体或其抗原结合片段，其包含：hcdr2，其与seq id no:5或seq id no:8的氨基酸序列具有至少80％的同源性、至少85％的同源性、至少90％的同源性、至少91％的同源性、至少92％的同源性、至少93％的同源性、至少94％的同源性、至少95％的同源性、至少96％的同源性、至少97％的同源性、至少98％的同源性或至少99％的同源性。在某些实施方式中，所述hcdr2序列为seq id no:5或seq id no:8。
5、在某些实施方式中，所述抗siglec-15抗体或其抗原结合片段，其包含：hcdr3，其与seq id no:6或seq id no:9的氨基酸序列具有至少80％的同源性、至少85％的同源性、至少90％的同源性、至少91％的同源性、至少92％的同源性、至少93％的同源性、至少94％的同源性、至少95％的同源性、至少96％的同源性、至少97％的同源性、至少98％的同源性或至少99％的同源性。在某些实施方式中，所述hcdr3序列为seq id no:6或seq id no:9。
6、在某些实施方式中，所述抗siglec-15抗体或其抗原结合片段，其包含：lcdr1，其与seq id no:10的氨基酸序列具有至少80％的同源性、至少85％的同源性、至少90％的同源性、至少91％的同源性、至少92％的同源性、至少93％的同源性、至少94％的同源性、至少95％的同源性、至少96％的同源性、至少97％的同源性、至少98％的同源性或至少99％的同源性。在某些实施方式中，所述lcdr1序列为seq id no:10。
7、在某些实施方式中，所述抗siglec-15抗体或其抗原结合片段，其包含：lcdr2，其与seq id no:11的氨基酸序列具有至少80％的同源性、至少85％的同源性、至少90％的同源性、至少91％的同源性、至少92％的同源性、至少93％的同源性、至少94％的同源性、至少95％的同源性、至少96％的同源性、至少97％的同源性、至少98％的同源性或至少99％的同源性。在某些实施方式中，所述lcdr2序列为seq id no:11。
8、在某些实施方式中，所述抗siglec-15抗体或其抗原结合片段，其包含：lcdr3，其与seq id no:12的氨基酸序列具有至少80％的同源性、至少85％的同源性、至少90％的同源性、至少91％的同源性、至少92％的同源性、至少93％的同源性、至少94％的同源性、至少95％的同源性、至少96％的同源性、至少97％的同源性、至少98％的同源性或至少99％的同源性。在某些实施方式中，所述lcdr3序列为seq id no:12。
9、在某些实施方式中，所述抗siglec-15抗体或其抗原结合片段，其包含：hcdr1、hcdr2和hcdr3，所述hcdr1与seq id no:4或seq id no:7的氨基酸序列具有至少80％的同源性、至少85％的同源性、至少90％的同源性、至少91％的同源性、至少92％的同源性、至少93％的同源性、至少94％的同源性、至少95％的同源性、至少96％的同源性、至少97％的同源性、至少98％的同源性或至少99％的同源性；所述hcdr2与seq id no:5或seq id no:8的氨基酸序列具有至少80％的同源性、至少85％的同源性、至少90％的同源性、至少91％的同源性、至少92％的同源性、至少93％的同源性、至少94％的同源性、至少95％的同源性、至少96％的同源性、至少97％的同源性、至少98％的同源性或至少99％的同源性；所述hcdr3与seq id本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种分离的抗Siglec-15抗体或其抗原结合片段，其包含：HCDR1，其与SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少80％的同源性；HCDR2，其与SEQ ID NO:5或SEQ IDNO:8的氨基酸序列具有至少80％的同源性；HCDR3，其与SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:9的氨基酸序列具有至少80％的同源性；LCDR1，其与SEQ ID NO:10的氨基酸序列具有至少80％的同源性；LCDR2，其与SEQ ID NO:11的氨基酸序列具有至少80％的同源性；以及LCDR3，其与SEQID NO:12的氨基酸序列具有至少80％的同源性。
2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1、HCDR2和HCDR3分别与SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6的氨基酸序列具有至少80％的同源性；以及LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1、LCDR2和LCDR3分别与SEQ IDNO:10、SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:1
3.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1、HCDR2和HCDR3分别与SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9的氨基酸序列具有至少80％的同源性；以及LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1、LCDR2和LCDR3分别与SEQ IDNO:10、SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12的氨基酸序列具有至少80％的同源性。
4.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区VH，所述VH与SEQID NO:1或SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有至少80％的同源性。
5.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其包含轻链可变区VL，所述VL与SEQID NO:3的氨基酸序列具有至少80％的同源性。
6.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗体包含轻链恒定区CL，所述CL由SEQ ID NO:14所示的氨基酸组成。
7.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗体包含重链恒定区CH，所述CH由SEQ ID NO:13所示的氨基酸组成。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗体是单克隆抗体。
9.根据权利要求1-7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗原结合片段选自scFv、Fab片段、Fab’片段和F(ab)2片段。
10.一种分离的核酸分子，其编码权利要求1-9中任一项所述的抗体或其抗原结合片段。
11.一种表达载体，其包含权利要求10所述的分离的核酸分子。
12.一种宿主细胞，其包含权利要求11所述的表达载体。
13.一种药物组合物，其包含治疗有效量的权利要求1-9中任一项所述的抗体或其抗原结合片段以及药学上可接受的赋形剂。
14.一种试剂盒，其包含权利要求1-9中任一项所述的抗体或其抗原结合片段。
15.一种生产分离的抗体的方法，所述方法包括：在允许所述抗体或其抗原结合片段表达的条件下培养包含权利要求12所述的细胞，以及回收这样产生抗体或其抗原结合片段。
16.权利要求1-9所述的抗体或其抗原结合片段、权利要求10所述的核酸分子、权利要求11所述的表达载体、权利要求12所述的宿主细胞和/或权利要求13所述的药物组合物在制备与Siglec-15相关的疾病治疗药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种分离的抗siglec-15抗体或其抗原结合片段，其包含：hcdr1，其与seq id no:4或seq id no:7的氨基酸序列具有至少80％的同源性；hcdr2，其与seq id no:5或seq idno:8的氨基酸序列具有至少80％的同源性；hcdr3，其与seq id no:6或seq id no:9的氨基酸序列具有至少80％的同源性；lcdr1，其与seq id no:10的氨基酸序列具有至少80％的同源性；lcdr2，其与seq id no:11的氨基酸序列具有至少80％的同源性；以及lcdr3，其与seqid no:12的氨基酸序列具有至少80％的同源性。
2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其包含hcdr1、hcdr2和hcdr3，所述hcdr1、hcdr2和hcdr3分别与seq id no:4、seq id no:5和seq id no:6的氨基酸序列具有至少80％的同源性；以及lcdr1、lcdr2和lcdr3，所述lcdr1、lcdr2和lcdr3分别与seq idno:10、seq id no:11和seq id no:12的氨基酸序列具有至少80％的同源性。
3.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其包含hcdr1、hcdr2和hcdr3，所述hcdr1、hcdr2和hcdr3分别与seq id no:7、seq id no:8和seq id no:9的氨基酸序列具有至少80％的同源性；以及lcdr1、lcdr2和lcdr3，所述lcdr1、lcdr2和lcdr3分别与seq idno:10、seq id no:11和seq id no:12的氨基酸序列具有至少80％的同源性。
4.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区vh，所述vh与seqid no:...
【专利技术属性】
技术研发人员：王宗达，顾春银，邓俗俊，
申请(专利权)人：上海济煜医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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