【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分子生物学，尤其是涉及一种用于马氏珠母贝免疫基因c1qdc沉默的sirna和试剂盒及其应用。
技术介绍
1、马氏珠母贝(pinctada fucata)属于马氏珠母贝属的无脊椎动物，体内不存在脊椎动物体内的抗体等物质，主要是通过一些独特的免疫机制来抵抗外界病原体的侵入。然而，在无脊椎动物中，细胞免疫和体液免疫这两种免疫效应系统并存，并在防御外来侵袭方面互为补充。深入探究无脊椎动物的免疫机制，不仅有助于提升其本身的疾病防御能力，而且对于理解高等动物的免疫机制也具有重要的理论价值和实践意义。
2、c1q是补体系统的重要识别分子，具有启动经典途径的作用，在固有免疫和特异性免疫之间发挥主要的连接作用。
3、c1qdc蛋白在许多动物中均有研究，包括哺乳动物、脊椎动物以及无脊椎动物，在地中海紫贻贝、文昌鱼、七鳃鳗、斑马鱼等水生生物中发现的基因序列均包含了c1q结构域。由此可见，c1q蛋白家族分布广泛，且成员众多。同时，许多证据都表明，无脊椎动物的c1qdc蛋白可参与多种免疫反应，包括微生物识别、细菌凝集以及促进吞噬和刺激细胞迁移。然而，关于马氏珠母贝与细菌致病机制和细菌宿主的相互作用相关的分子机制还不甚清楚。
4、目前，可利用rnai技术，通过dsrna的方法对基因进行干扰和抑制基因的表达。但是由于其注射量较高、合成试剂盒较贵并需要基因的序列较长，导致此方法的成本过高，所以在生产实践中不建议应用。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种用
2、为实现上述目的，本专利技术提供马氏珠母贝免疫基因c1qdc的sirna，包括si-397和si-419，si-397的序列如seq id no.13所示，si-419的序列如seq id no.14所示。
3、优选的，所述c1qdc基因的核苷酸序列如seq id no.1所示，编码的氨基酸序列如seq id no.2所示。
4、一种用于马氏珠母贝免疫基因c1qdc沉默的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的马氏珠母贝免疫基因的sirna-c1qdc序列。
5、优选的，所述sirna-c1qdc序列包括sirna-c1qdc正义链和反义链，sirna-c1qdc正义链序列如seq id no.16所示，sirna-c1qdc反义链序列如seq id no.17所示。
6、优选的，所述试剂盒的使用方法为：通过闭壳肌处进行注射，完成注射后进行常规养殖，正义链和反义链以1:1混合，注射总量为30μg/只，注射浓度为150μg/ml，分为两次注射，第二次为第一次注射12h后以补偿rna的降解。
7、一种如上所述的c1qdc基因的sirna在马氏珠母贝溶藻弧菌侵染过程中的应用。
8、一种如上所述的试剂盒在马氏珠母贝溶藻弧菌侵染过程中的应用。
9、本专利技术从马氏珠母贝转录组中筛选并进行基因克隆验证获得马氏珠母贝的c1qdc基因片段。根据马氏珠母贝c1qdc基因序列设计并合成sirna，命名为sirna-c1qdc。
10、rna干扰(rnai)，即用20多个核苷酸组成的短的双链rna(sirna)代替传统反义核酸进行转录后基因沉默，合成后的sirna可通过注射或转染导入生物体内，实现暂时沉默或干扰特定的基因表达，而不会对目标生物体进行基因修饰。目前rnai技术已经迅速而广泛地应用到基因功能，基因表达调控机制研究等热门领域，并为基因治疗开辟了新的途径。rnai技术在水产养殖研究中也得到了广泛的应用，如长牡蛎(crassostrea gigas)、中华绒螯蟹(eriocheir sinenses)、马氏珠母贝(pinctadafucata)、香港牡蛎(crassostreahongkongensis)等，可通过该技术研究基因的功能、信号传导以及免疫机制等。
11、因此，本专利技术提供的一种用于马氏珠母贝免疫基因c1qdc沉默的sirna和试剂盒及其应用，其具体技术效果如下：
12、(1)本专利技术根据获得的香港牡蛎的c1qdc基因序列设计并合成的sirna——sirna-c1qdc，可以使c1qdc基因在溶藻弧菌侵染下的表达受到抑制；
13、(2)本专利技术通过注射的方法将sirna-c1qdc导入到马氏珠母贝体内，干扰并抑制马氏珠母贝体内的c1qdc基因的表达，促使马氏珠母贝通过c1qdc基因的表达量的变化进而影响其对降低马氏珠母贝血细胞的吞噬率，从而探究c1qdc基因在马氏珠母贝中的免疫应答过程；
14、(3)本专利技术提供的sirna干扰技术与dsrna干扰技术相比较，sirna技术的注射剂量较小，能够降低成本，可以有效抑制溶藻弧菌侵染下的马氏珠母贝c1qdc基因的表达，表明c1qdc基因可能参与溶藻弧菌的吞噬过程，并可能在溶藻弧菌的免疫应答中发挥作用。
15、下面通过附图和实施例，对本专利技术的技术方案做进一步的详细描述。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.马氏珠母贝免疫基因C1qDC的siRNA，其特征在于：包括si-397和si-419，si-397的序列如SEQ ID NO.13所示，si-419的序列如SEQ ID NO.14所示。
2.根据权利要求1所述的马氏珠母贝免疫基因C1qDC的siRNA，其特征在于：所述马氏珠母贝免疫C1qDC基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
3.一种用于马氏珠母贝免疫基因C1qDC沉默的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的马氏珠母贝免疫基因的siRNA-C1qDC序列。
4.根据权利要求3所述的一种用于马氏珠母贝免疫基因C1qDC沉默的试剂盒，其特征在于：所述siRNA-C1qDC序列包括siRNA-C1qDC正义链和反义链，siRNA-C1qDC正义链序列如SEQ ID NO.16所示，siRNA-C1qDC反义链序列如SEQ ID NO.17所示。
5.根据权利要求3所述的一种用于马氏珠母贝免疫基因C1qDC沉默的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的使用方法为：通过闭壳肌
6.一种如权利要求1所述的C1qDC基因的siRNA在马氏珠母贝溶藻弧菌侵染过程中的应用。
7.一种如权利要求3-5任一项所述的试剂盒在马氏珠母贝溶藻弧菌侵染过程中的应用。
...【技术特征摘要】
1.马氏珠母贝免疫基因c1qdc的sirna，其特征在于：包括si-397和si-419，si-397的序列如seq id no.13所示，si-419的序列如seq id no.14所示。
2.根据权利要求1所述的马氏珠母贝免疫基因c1qdc的sirna，其特征在于：所述马氏珠母贝免疫c1qdc基因的核苷酸序列如seq id no.1所示，编码的氨基酸序列如seq id no.2所示。
3.一种用于马氏珠母贝免疫基因c1qdc沉默的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的马氏珠母贝免疫基因的sirna-c1qdc序列。
4.根据权利要求3所述的一种用于马氏珠母贝免疫基因c1qdc沉默的试剂盒，其特征在于：所述sirna-c1qd...
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