【技术实现步骤摘要】
本申请涉及生物医药领域，具体涉及肿瘤浸润淋巴细胞的制备方法及其用途。
技术介绍
1、使用过继性自体转移肿瘤浸润淋巴细胞治疗肿瘤是一种治疗预后不良患者的有效方法。但是过继性自体转移肿瘤浸润淋巴细胞治疗肿瘤需要大量的肿瘤浸润淋巴细胞。因此如何提供一种稳健可靠的肿瘤浸润淋巴细胞的培养方法是亟待解决的问题。
技术实现思路
1、本申请提供了一种肿瘤浸润淋巴细胞的培养方法，本申请的培养方法获得的肿瘤浸润淋巴细胞具有选自以下组的一种或多种的效果：增加的til细胞数量，提高的细胞因子分泌能力，提高的肿瘤细胞杀伤能力，改善的t细胞亚群比例，增加的中心记忆t细胞比例，降低的调节性t细胞的比例，增加的活化t细胞比例，增加的肿瘤特异性t细胞比例，增加的干细胞样t细胞比例，和改善的基因编辑效果。
2、一方面，本申请提供一种培养肿瘤浸润淋巴细胞(til)的方法，其包含：使源自肿瘤组织且未经体外扩增的til经过至少一个阶段的体外扩增，其中，在至少一个阶段的所述体外扩增中，使所述til与cd28激动剂接触。
3、在一种实施方式中，使所述源自肿瘤组织且未经体外扩增的til经过第一阶段体外扩增和第二阶段体外扩增，且在所述第二阶段体外扩增中，使经所述第一阶段体外扩增的til与所述cd28激动剂接触。
4、在一种实施方式中，所述cd28激动剂包含抗cd28的抗体和/或其抗原结合片段。
5、在一种实施方式中，所述第二阶段体外扩增进行至多约13天。
6、在一种实施方
7、在一种实施方式中，本申请的培养方法还包含：在至少一个阶段的所述体外扩增中，使所述til与饲养细胞共培养。
8、在一种实施方式中，其中，在单个阶段的所述体外扩增中，使所述til与所述cd28激动剂接触且与所述饲养细胞共培养。
9、在一种实施方式中，其中，在单个阶段的所述体外扩增中，使所述til与所述cd28激动剂接触一定时间之后，再与所述饲养细胞共培养。
10、在一种实施方式中，所述一定时间为至少约2小时。
11、在一种实施方式中，所述一定时间为约6小时至约72小时。
12、在一种实施方式中，所述一定时间为约12小时至约48小时。
13、在一种实施方式中，所述一定时间为约6小时、约12小时、约24小时、约48小时、或约72小时。
14、在一种实施方式中，所述饲养细胞包含抗原呈递细胞。
15、在一种实施方式中，所述饲养细胞包含选自以下组的一种或多种：外周单个核细胞，树突状细胞，和人工抗原呈递细胞。
16、在一种实施方式中，所述饲养细胞为外周单个核细胞。
17、在一种实施方式中，所述饲养细胞为经过辐照的饲养细胞。
18、在一种实施方式中，所述til与所述饲养细胞共培养包含使所述饲养细胞的表面与所述til的表面相接触。
19、在一种实施方式中，所述til与所述饲养细胞共培养包含将所述饲养细胞添加至所述til的细胞培养基中。
20、在一种实施方式中，以约40:1-约400:1的所述饲养细胞与所述til的比例，将所述饲养细胞添加至所述til的细胞培养基中。
21、在一种实施方式中，本申请的培养方法还包含：在至少一个阶段的所述体外扩增中，使所述til与一种或多种t细胞生长因子接触。
22、在一种实施方式中，其中，在单个阶段的所述体外扩增中，使所述til与所述cd28激动剂接触且与所述一种或多种t细胞生长因子接触。
23、在一种实施方式中，其中，在单个阶段的所述体外扩增中，使所述til基本上同时与所述cd28激动剂以及所述一种或多种t细胞生长因子接触。
24、在一种实施方式中，所述t细胞生长因子选自以下组的一种或多种：il-2、il-7、il-12、il-15、il-21、γ干扰素、以及它们的功能活性片段。
25、在一种实施方式中，所述t细胞生长因子包含il-2和/或其功能活性片段。
26、在一种实施方式中，所述til与所述一种或多种t细胞生长因子接触包含将所述t细胞生长因子添加至所述til的细胞培养基中。
27、在一种实施方式中，所述t细胞生长因子在所述til的细胞培养基中的初始浓度为至少约300iu/ml。
28、在一种实施方式中，与在体外扩增阶段未曾与所述cd28激动剂接触的相应til相比，在至少一个体外扩增阶段中与所述cd28激动剂接触过的所述til显示出改善的扩增效果。
29、在一种实施方式中，所述改善的扩增效果包含选自以下组的一种或多种：增加的til细胞数量，改善的t细胞亚群比例，提高的细胞因子分泌能力，和提高的肿瘤细胞杀伤能力。
30、在一种实施方式中，所述改善的t细胞亚群比例包含选自以下组的一种或多种：增加的中心记忆t细胞比例，降低的调节性t细胞的比例，增加的活化t细胞比例，增加的肿瘤特异性t细胞比例，和增加的干细胞样t细胞比例。
31、在一种实施方式中，与在体外扩增阶段未曾与所述cd28激动剂接触的相应til相比，在至少一个体外扩增阶段中与所述cd28激动剂接触过的所述til显示出改善的基因编辑效果。
32、在一种实施方式中，所述改善的基因编辑效果包含提高的基因敲除效率。
33、在一种实施方式中，本申请的培养方法还包含：在至少一个阶段的所述体外扩增中，使所述til与所述cd28激动剂之外的一种或多种其他t细胞激活剂接触。
34、在一种实施方式中，其中，在单个阶段的所述体外扩增中，使所述til与所述cd28激动剂接触且与所述一种或多种其它t细胞激活剂接触。
35、在一种实施方式中，其中，在单个阶段的所述体外扩增中，使所述til基本上同时与所述cd28激动剂以及所述一种或多种其它t细胞激活剂接触。
36、在一种实施方式中，所述其它t细胞激活剂包含选自以下组的一种或多种：cd80、cd86、b7-h3、4-1bbl、cd27、cd30、cd134、b7h、cd40、light、以及它们的功能活性片段。
37、在一种实施方式中，所述其它t细胞激活剂包含选自以下组的一种或多种靶点的激动剂：cd3、hvem、cd40l、ox40和4-1bb。
38、在一种实施方式中，所述其它t细胞激活剂包含cd3激动剂。
39、在一种实施方式中，所述其它t细胞激活剂包含抗cd3的抗体和/或其抗原结合片段。
40、在一种实施方式中，所述使til与所述cd28激动剂接触且与所述一种或多种其它t细胞激活剂接触包含选自以下组的一种或多种方式：(1)将所述cd28激动剂与所述其它t细胞激活剂添加至所述til的细胞培养基中；(2)将表达所述cd28激动剂与所述其它t细胞激活剂的工程化细胞添加至所述til的细胞培养基中本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种培养肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的方法，其包含：使源自肿瘤组织且未经体外扩增的TIL经过至少一个阶段的体外扩增，其中，在至少一个阶段的所述体外扩增中，使所述TIL与CD28激动剂接触。
2.一种培养肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的方法，其包含：
3.根据权利要求2所述的方法，所述CD28激动剂包含抗CD28的抗体和/或其抗原结合片段。
4.根据权利要求2所述的方法，所述步骤(B)进行至多约13天。
5.根据权利要求2所述的方法，其中，在所述步骤(B)中，使所述第二TIL群与所述CD28激动剂接触一定时间之后，再与饲养细胞共培养。
6.根据权利要求2所述的方法，使所述第二TIL群与直径为1纳米至500纳米的聚合物接触。
7.根据权利要求6所述的方法，每mg所述聚合物包含至少约25μg的所述CD28激动剂和其它T细胞激活剂，其中所述聚合物选自多糖、葡聚糖、水凝胶、聚乙二醇或泊洛沙姆。
8.根据权利要求6所述的方法，以约1:100-约1:2000的所述聚合物与所述TIL的比例，将包含所述CD28抗体和
9.一种肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)，所述TIL经过权利要求1-8中任一项所述的方法获得。
10.经过权利要求1-8中任一项所述的方法获得的TIL在制备药物中的应用，所述药物用于预防和/或治疗肿瘤。
...【技术特征摘要】
1.一种培养肿瘤浸润淋巴细胞(til)的方法，其包含：使源自肿瘤组织且未经体外扩增的til经过至少一个阶段的体外扩增，其中，在至少一个阶段的所述体外扩增中，使所述til与cd28激动剂接触。
2.一种培养肿瘤浸润淋巴细胞(til)的方法，其包含：
3.根据权利要求2所述的方法，所述cd28激动剂包含抗cd28的抗体和/或其抗原结合片段。
4.根据权利要求2所述的方法，所述步骤(b)进行至多约13天。
5.根据权利要求2所述的方法，其中，在所述步骤(b)中，使所述第二til群与所述cd28激动剂接触一定时间之后，再与饲养细胞共培养。
6.根据权利要求2所述的方法，使所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘雅容，赵佩佩，史子啸，
申请(专利权)人：苏州沙砾生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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