【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及与蛋白质半乳凝素-10特别是人半乳凝素-10结合的抗体及其抗原结合片段。本专利技术的半乳凝素-10抗体和抗原结合片段破坏半乳凝素-10的结晶，并因此可用于预防和治疗其中病理学与夏科-莱登结晶(charcot-leyden crystal，clc)的形成/存在相关的疾病和病症的方法。
技术介绍
1、夏科-莱登结晶(clc)于1853年首次被描述，并且是在患有某些病症(包括变应性哮喘和寄生虫感染)的患者中发现的微观无色晶体。经常在与嗜酸性炎性应答相关的人组织和分泌物中观察到clc。除了哮喘和寄生虫感染之外，在患有癌症(例如髓性白血病)的患者中也发现了这些晶体。在结构上，clc以长度为20至40μm并且宽度为2至4μm的胞外六方双锥体晶体累积。形成这些晶体的蛋白质已被鉴定为半乳凝素-10。
2、半乳凝素-10(也称为夏科莱登结晶蛋白)是小的(16.5kda)自结晶的疏水性聚糖结合蛋白，其主要通过嗜酸性粒细胞在骨髓中大量表达(chua et al.(2012)plos one.7(8):e42549)。半乳凝素-10也在较小程度上由嗜碱性粒细胞和foxp3阳性treg产生(kubachet al.(2007)blood110(5):1550-8)。该蛋白质是嗜酸性粒细胞成分中最丰富的，占总细胞蛋白质的7％至10％。半乳凝素-10仅在人和非人灵长类中发现，其缺乏分泌肽信号和跨膜结构域，并且在特定条件下通过非经典的和新型顶浆分泌机制分泌。
3、尽管大量报道显示clc在来自患有嗜酸性粒细胞病症的患者的组织
技术实现思路
1、最近的发现表明在疾病中形成半乳凝素-10和clc，这表明其是治疗的靶标。本文中报道了可通过施用半乳凝素-10抗体来溶解半乳凝素-10晶体。重要的是，本文中报道的半乳凝素-10抗体即使在升高的温度(例如37℃)下储存4周之后仍保留活性并保持稳定。总之，这表明本文中报道的半乳凝素-10抗体可用于治疗其中病理状况与clc的存在相关的病症和障碍。
2、在第一方面中，本专利技术提供了与半乳凝素-10结合的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含重链可变(variable heavy chain，vh)结构域和轻链可变(variable light chain，vl)结构域，其中：
3、(i)vh结构域包含以下的cdr序列：包含seq id no:2或由其组成的hcdr3；包含seqid no:3或由其组成的hcdr2；包含seq id no:1或由其组成的hcdr1；并且
4、(ii)vl结构域包含以下的cdr序列：包含seq id no:8或由其组成的lcdr3；包含seq id no:9或由其组成的lcdr2；包含seq id no:7或由其组成的lcdr1。
5、在某些实施方案中，vh结构域包含seq id no:4的氨基酸序列或者与其具有至少90％、95％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；并且vl结构域包含seq id no:10的氨基酸序列或者与其具有至少90％、95％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。
6、在某些实施方案中，vh结构域包含seq id no:4的氨基酸序列；并且vl结构域包含seq id no:10的氨基酸序列。
7、在某些实施方案中，抗原结合片段选自：单链抗体(scfv)；f(ab’)2片段；fab片段；fd片段；fv片段；单臂(单价)抗体；双抗体、三抗体、四抗体或通过这样的抗原结合片段的组合、组装或缀合形成的任何抗原结合分子。在一个优选实施方案中，抗原结合片段是fab片段。
8、在另一个方面中，本专利技术提供了编码如本文中所述的抗体或抗原结合片段的分离多核苷酸，包括编码本文中所述抗体和抗原结合片段的vh和/或vl结构域的多核苷酸。
9、在另一个方面中，本文中提供了包含如本文中所述的一个或更多个多核苷酸的表达载体，所述多核苷酸与调节序列可操作地连接，所述调节序列允许抗体、抗原结合片段、重链可变结构域或轻链可变结构域在宿主细胞或无细胞表达系统中的表达。
10、在另一个方面中，本专利技术提供了包含如本文中所述的表达载体的宿主细胞或无细胞表达系统。
11、本文中还提供了产生如本文中所述的重组抗体或抗原结合片段的方法，所述方法包括在允许表达抗体或抗原结合片段的条件下培养如本文中所述的宿主细胞或无细胞表达系统，并回收所表达抗体或抗原结合片段。
12、在本专利技术的另一方面中，本文中提供了药物组合物，其包含如本文中所述的抗体或抗原结合片段和至少一种可药用载体或赋形剂。
13、在另一方面中，本文中所述的抗体或抗原结合片段或者本文中所述的药物组合物用作药物。在另一方面中，提供了治疗有此需要的对象的方法，其中所述方法包括向对象施用治疗有效量的本文中所述的抗体或抗原结合片段或者本文中所述的药物组合物。
14、可施用抗体、抗原结合片段或药物组合物以预防或治疗与半乳凝素-10晶体的存在或形成相关的疾病或病症。适当地，所述疾病或病症可选自：哮喘；慢性鼻窦炎；乳糜泻；蠕虫感染；胃肠嗜酸性粒细胞炎症；囊性纤维化(cystic fibrosis，cf)；变应性支气管肺曲霉病(allergic bronchopulmonary aspergillosis，abpa)；查尔格-施特劳斯血管炎(churg-straus vasculitis)；慢性嗜酸性肺炎；以及急性髓系白血病(acute myeloidleukemia，aml)。在一个优选实施方案中，所述疾病或病症是哮喘。在另一个优选实施方案中，所述疾病或病症是囊性纤维化。
15、本专利技术还提供了如本文中所述的抗体或抗原结合片段用于检测从患者中获得的样品中的半乳凝素-10的用途。适当地，患者样品可以是黏液样品或痰样品。
16、本专利技术还提供了包含如本文中所述的抗体或抗原结合片段的试剂盒。所述试剂盒还可包含使用说明。
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1.与半乳凝素-10结合的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含重链可变(VH)结构域和轻链可变(VL)结构域，其中：
2.权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其中：
3.权利要求1或权利要求2所述的抗体或抗原结合片段，其中；
4.权利要求1至3中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗原结合片段选自：单链抗体(scFv)；F(ab’)2片段；Fab片段；Fd片段；Fv片段；单臂(单价)抗体；双抗体、三抗体、四抗体或通过这样的抗原结合片段的组合、组装或缀合形成的任意抗原结合分子。
5.权利要求4所述的抗原结合片段，其中所述抗原结合片段是Fab片段。
6.分离多核苷酸，其编码权利要求1至5中任一项所述的抗体或抗原结合片段、或者其VH或VL结构域。
7.表达载体，其包含权利要求6所述的多核苷酸，所述多核苷酸与调节序列可操作地连接，所述调节序列允许所述抗体、抗原结合片段、重链可变结构域或轻链可变结构域在宿主细胞或无细胞表达系统中的表达。
8.宿主细胞或无细胞表达系统，其包含权利要求7所述的
9.产生权利要求1至5的重组抗体或抗原结合片段的方法，所述方法包括在允许所述抗体或抗原结合片段表达的条件下培养权利要求8所述的宿主细胞或无细胞表达系统，并回收所表达抗体或抗原结合片段。
10.药物组合物，其包含根据权利要求1至5中任一项所述的抗体或抗原结合片段，和至少一种可药用载体或赋形剂。
11.根据权利要求1至5中任一项所述的抗体或抗原结合片段，或根据权利要求10所述的药物组合物，其用作药物。
12.根据权利要求11所述应用的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体、抗原结合片段或药物组合物被施用以预防或治疗与半乳凝素-10晶体的存在或形成相关的疾病或病症。
13.根据权利要求11或权利要求12所述应用的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体、抗原结合片段或药物组合物被施用以预防或治疗选自以下的疾病或病症：哮喘；慢性鼻窦炎；乳糜泻；蠕虫感染；胃肠嗜酸性粒细胞炎症；囊性纤维化(CF)；变应性支气管肺曲霉病(ABPA)；查尔格-施特劳斯血管炎；慢性嗜酸性肺炎；和急性髓系白血病(AML)。
14.根据权利要求13所述应用的抗体或抗原结合片段，其中所述疾病或病症是哮喘。
15.根据权利要求13所述应用的抗体或抗原结合片段，其中所述疾病或病症是囊性纤维化。
16.治疗有此需要的对象的方法，其中所述方法包括向所述对象施用治疗有效量的根据权利要求1至5中任一项所述的抗体或抗原结合片段，或根据权利要求10所述的药物组合物。
17.权利要求16所述的方法，其中施用所述抗体、抗原结合片段或药物组合物以预防或治疗与半乳凝素-10晶体的存在或形成相关的疾病或病症。
18.权利要求16或权利要求17所述的方法，其中施用所述抗体、抗原结合片段或药物组合物以预防或治疗选自以下的疾病或病症：哮喘；慢性鼻窦炎；乳糜泻；蠕虫感染；胃肠嗜酸性粒细胞炎症；囊性纤维化(CF)；变应性支气管肺曲霉病(ABPA)；查尔格-施特劳斯血管炎；慢性嗜酸性肺炎；和急性髓系白血病(AML)。
19.权利要求18所述的方法，其中所述疾病或病症是哮喘。
20.权利要求18所述的方法，其中所述疾病或病症是囊性纤维化。
21.根据权利要求1至5中任一项所述的抗体或抗原结合片段用于检测从患者中获得的样品中的半乳凝素-10的用途。
22.根据权利要求21所述的用途，其中所述患者样品是黏液样品或痰样品。
23.试剂盒，其包含根据权利要求1至5中任一项所述的抗体或抗原结合片段。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.与半乳凝素-10结合的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含重链可变(vh)结构域和轻链可变(vl)结构域，其中：
2.权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其中：
3.权利要求1或权利要求2所述的抗体或抗原结合片段，其中；
4.权利要求1至3中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗原结合片段选自：单链抗体(scfv)；f(ab’)2片段；fab片段；fd片段；fv片段；单臂(单价)抗体；双抗体、三抗体、四抗体或通过这样的抗原结合片段的组合、组装或缀合形成的任意抗原结合分子。
5.权利要求4所述的抗原结合片段，其中所述抗原结合片段是fab片段。
6.分离多核苷酸，其编码权利要求1至5中任一项所述的抗体或抗原结合片段、或者其vh或vl结构域。
7.表达载体，其包含权利要求6所述的多核苷酸，所述多核苷酸与调节序列可操作地连接，所述调节序列允许所述抗体、抗原结合片段、重链可变结构域或轻链可变结构域在宿主细胞或无细胞表达系统中的表达。
8.宿主细胞或无细胞表达系统，其包含权利要求7所述的表达载体。
9.产生权利要求1至5的重组抗体或抗原结合片段的方法，所述方法包括在允许所述抗体或抗原结合片段表达的条件下培养权利要求8所述的宿主细胞或无细胞表达系统，并回收所表达抗体或抗原结合片段。
10.药物组合物，其包含根据权利要求1至5中任一项所述的抗体或抗原结合片段，和至少一种可药用载体或赋形剂。
11.根据权利要求1至5中任一项所述的抗体或抗原结合片段，或根据权利要求10所述的药物组合物，其用作药物。
12.根据权利要求11所述应用的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体、抗原结合片段或药物组合物被施用以预防或治疗与半乳凝素-10晶体的存在或形成相关的疾病或病...
【专利技术属性】
技术研发人员：保罗·塞巴斯蒂安·范德沃宁，让米歇尔·佩尔西耶，
申请(专利权)人：阿根思有限公司，
类型：发明
国别省市：
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