【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术大致涉及癌症抗原。
技术介绍
1、人内源逆转录病毒(hervs)是众所周知的基因组重复序列，在基因组中有许多拷贝，大约8％的人基因组具有逆转录病毒来源。参考lander et al.nature.409,860-921(2001).逆转录病毒通常会由于累计的基因突变而失去感染性。除了在如癌症的特定病理情况下，这些基因在正常成人组织中在多数情况下是沉默的或不表达的。
2、最具生物活性的herv是herv-k家族成员。herv-k具有能表达具有复制能力的逆转录病毒所需的所有元件的完整序列，但能在正常细胞中保持沉默。参考larsson,kato,&cohen,当前主题的微生物学和免疫学杂志,148,115-132(1989)及ono,yasunaga,miyata,&ushikubo,病毒学杂志,60,589-598(1986).专利技术人和其他人已经报导了，有些时候，例如在肿瘤中，herv-k的表达被激活，并且其膜蛋白可以在几种不同类型的肿瘤中以比正常组织中高得多的水平检测到。参见国际专利公开wo 2010/138803(得克萨斯大学体系董事会)、wang-johanning et al.,癌症研究杂志,77,abstract nr lb-221(2017)、johanning etal.,人内源性逆转录病毒-k的表达与基底样乳腺癌症表型密切相关.科学报告杂志,7,41960(2017)及li et al.,临床癌症研究杂志(2017)。这种关联说明了herv-k可以是很好的肿瘤相关抗原和癌症免
3、开发癌症治疗剂的一个重要考虑因素是肿瘤相关抗原的表达谱。herv-k在癌症组织和细胞系中是具有转录活性的。专利技术人鉴定了肿瘤细胞系和患者肿瘤中的herv蛋白与序列。专利技术人观察到在乳腺癌、肺癌、前列腺癌、卵巢癌、结肠癌、胰腺癌中和其他实体瘤中herv特别是herv-k序列的表达。他们也发现了herv-k env转录本在乳腺癌中的表达与基底乳腺癌，一种侵袭性高的亚型，高度相关(johanning et al.,人内源性逆转录病毒-k的表达与基底样乳腺癌症表型密切相关.科学报告杂志,7,41960(2017))。
4、多种诊断产品可作为伴随诊断供患者选择。一种策略靶向仅存在于癌细胞而非正常组织上的内源病毒抗原。专利技术人团队发现herv-k rna(env或gag)和抗herv-k抗体出现在癌症患者的循环中。
5、加深对乳腺癌肿瘤微环境的了解对于设计合理有效的治疗方法非常重要。限制针对实体瘤的成功治疗的一个问题是缺少在肿瘤细胞中高表达而在正常细胞中不表达的肿瘤抗原。
6、在专利技术人之前的工作中，他们表明herv-k env蛋白通常在乳腺癌细胞表面表达。参考wang-johanning et al.,国家癌症研究所杂志,104,189-210(2012).上皮间质转化(emt)在一些肿瘤中降低cd4或cd8 t细胞的浸润(chae et al.,科学报道杂志,8,2918(2018).)。herv-k表达被证明可诱导emt，导致细胞运动性增加，这两者都有利于肿瘤散播。参考see lemaitre et al.,plos病原体杂志,13,e1006451(2017)。herv-k的过度表达会导致癌症产生并促进癌症进展提供了强力证据。
技术实现思路
1、专利技术人发现血浆和肿瘤浸润淋巴细胞(til)中检查点分子水平与herv-k抗体滴度高度相关，特别是侵袭性乳腺癌患者(患有浸润性导管癌(idc)和浸润性乳腺癌(imc)的患者)中。乳腺癌中til的表型和功能特征与herv-k状态相关，而且检查点抑制和herv-k抗体治疗相结合可以产生更好的杀伤功效。
2、herv-k可以是一种优秀的肿瘤相关抗原。herv-k也可以是癌症免疫疗法的理想靶点，其在肿瘤中表达而不存在于正常组织中，从而最大限度地减少脱靶效应。
3、在第一个实施方案中，本专利技术提供了治疗性人源化抗herv-k抗体。本专利技术也提供了融合的治疗性人源化herv-k抗体，针对cd3和cd8双特异性t细胞衔接器(bite)，一个dna编码的bite(dbite)，或者一个抗体-药物缀合物(adc)。过表达herv-k的癌细胞可以是本专利技术的抗herv-k人源化抗体和抗体-药物缀合物的良好靶标和良好模型，因为每个细胞可以结合更多抗体。
4、在第二个实施方案中，本专利技术提供由细菌产生的人源化抗体克隆(hum1)和由哺乳动物细胞产生的人源化抗体(hu6h5)。这两个克隆都能结合从来自重组herv-k env表面融合蛋白(ksu)和mda-mb-231乳腺癌细胞的裂解物产生的抗原。将哺乳动物细胞产生的hu6h5与我们的其他形式的抗herv-k抗体进行比较。hu6h5与herv-k抗原的结合亲和力类似于鼠抗体(m6h5)、嵌合抗体(cab)或人源化抗体(hum1)。hu6h5抗体诱导癌症细胞发生凋亡，抑制癌细胞增殖，并杀伤表达herv-k抗原的癌细胞。重要的是，在小鼠mda-mb-231异种移植物中证明hu6h5抗体减少肿瘤存活力，并能显著减少癌细胞向肺和淋巴结的转移。与未接受抗体治疗的对照小鼠相比，用这些人源化抗体治疗的携带人类乳腺癌肿瘤的小鼠的存活时间更长。
5、在第三个实施方案中，本专利技术提供从乳腺癌患者生成的herv-k env基因，其作为能诱导癌细胞增殖、肿瘤生长和向肺和淋巴结转移的原癌基因。表达herv-k的细胞显示出包括半胱天冬酶3和9、prb、sirt-1和cidea在内的与肿瘤抑制相关的基因的表达减少，和在包括ras、p-erk、p-p-38和β连环蛋白在内的与肿瘤形成相关的基因的表达增加。
6、在第四个实施方案中，本专利技术提供针对t细胞cd3或cd8和肿瘤相关抗原herv-k的bites。专利技术人生产此类bite，其包含靶向cd3或cd8的抗体和靶向herv-k的抗体(vl-vh6h5scfv---vh-vlhucd3或cd8+c-myc+flag)或(vl-vh hu6h5scfv---vh-vlhucd3或hucd8+c-myc+flag)。flag标签是被抗体识别的肽(dykddddk)(seq id no:33)，和myc标签是被抗体识别的短肽(eqkliseedl)(seq id no:34)。
7、在第五个实施方案中，本专利技术提供表达慢病毒car表达载体的t细胞，该表达载体携带人源化或全人herv-k scfv。如附图1所示，这些t细胞可有效裂解并杀死多种癌症的肿瘤细胞。慢病毒载体表达的人源化k-cars是泛癌种car-ts。
8、在第六个实施方案中，本专利技术提供人源化单链可变片段(scfv)抗体。该抗体能结合从重组herv-k env表面融合蛋白(ksu)和来自mda-mb-231乳腺癌细胞的裂解物产生的抗原。可将由该人源化scfv产生的本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种HERV-K env基因，其中所述基因是从病毒颗粒中分离出来的，并且在体外和体内促进肿瘤发展和转移。
2.一种测量癌症早期阶段癌症转移风险增加的方法，包括以下步骤：
3.一种人肿瘤小鼠(HTM)模型,选自MDA-MB-231(HTM1)或MDA-MB-468(HTM2)。
4.一种由肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)生成的TCR 序列，将HERV-K抗原识别为与主要组织相容性复合物(MHC)结合的肽，从而导致 HLA肽复合物与CD8 TCR或CD3 TCR 之间的相互作用。
5.一种用于实现功能性匹配T细胞受体(TCR)序列的平台，其中所述平台包含少量同质HERV-K特异性T细胞(K-T细胞)群体，每个群体均从单个克隆扩增的K-T细胞获得。
6.一种获得分泌IFNγ的细胞的方法，包括从肿瘤浸润淋巴细胞或外周血单核细胞获得HERV-K特异性T细胞(K-T细胞)的步骤。
7.一种用HERV-K表面(SU)包膜(Env)蛋白转染的树突状细胞，其用作癌症疫苗。
8.一种外周血单核细胞，其中所述细胞用KSU
9.一种治疗癌症的联合治疗方法，包括向有需要的受试者施用治疗有效量的：
10.一种从用5种多重抗原肽(MAP)免疫的小鼠中生产抗体的方法，其中所述肽是由癌症患者HERV-K SU蛋白产生的。
11.一种如权利要求9所述的方法，其中癌症选自黑色素瘤、慢性淋巴细胞白血病、乳腺癌、胰腺癌、头颈癌、卵巢癌、宫颈癌、结直肠癌、睾丸癌、胃癌、肾癌、子宫内膜癌、子宫癌、膀胱癌、前列腺癌、食管癌、肝癌和非小细胞肺癌。
12.HERV-K作为干细胞标记物的用途。
13.一种HERV-K过表达的方法，包括以下步骤：
14.一种用于确定微孔板中每个细胞的结合动力学和细胞间相互作用的平台，包括：
15.使用 HERV-K 的免疫抑制结构域(ISD)作为癌细胞的免疫检查点的方法。
16.根据权利要求15所述的方法，其中所述HERV-K的免疫检查点抑制剂选自单克隆抗体和靶向HERV-K的ISD的药物。
17.一种调节化疗药物敏感性的方法，包括调节HERV-K活性的步骤。
18.一种阻断活性氧信号传导的方法，包括抑制HERV-K表达的步骤。
19.一种减少活性氧介导的上皮-间质转化(EMT)诱导的方法，包括抑制HERV-K表达的步骤。
20.使用 HERV-K env 基因以：
21.使用 HERV-K 作为 Ras/ERK 信号通路的上游调节剂的用途。
22.一种在人类中激活Ras的方法，其不涉及Ras基因的突变激活，所述方法包括增加HERV-K活性的步骤。
23.一种降低人Ras活性的方法，包括降低HERV-K表达的步骤。
24.一种从乳腺癌患者体内分离的病毒颗粒中提取的 HERV-K 包膜 (Env)、Gag 和Pol 基因以及 RNA 的序列。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种herv-k env基因，其中所述基因是从病毒颗粒中分离出来的，并且在体外和体内促进肿瘤发展和转移。
2.一种测量癌症早期阶段癌症转移风险增加的方法，包括以下步骤：
3.一种人肿瘤小鼠(htm)模型,选自mda-mb-231(htm1)或mda-mb-468(htm2)。
4.一种由肿瘤浸润淋巴细胞(til)生成的tcr 序列，将herv-k抗原识别为与主要组织相容性复合物(mhc)结合的肽，从而导致 hla肽复合物与cd8 tcr或cd3 tcr 之间的相互作用。
5.一种用于实现功能性匹配t细胞受体(tcr)序列的平台，其中所述平台包含少量同质herv-k特异性t细胞(k-t细胞)群体，每个群体均从单个克隆扩增的k-t细胞获得。
6.一种获得分泌ifnγ的细胞的方法，包括从肿瘤浸润淋巴细胞或外周血单核细胞获得herv-k特异性t细胞(k-t细胞)的步骤。
7.一种用herv-k表面(su)包膜(env)蛋白转染的树突状细胞，其用作癌症疫苗。
8.一种外周血单核细胞，其中所述细胞用ksu蛋白脉冲的自体树突细胞(k-t 细胞)进行体外刺激。
9.一种治疗癌症的联合治疗方法，包括向有需要的受试者施用治疗有效量的：
10.一种从用5种多重抗原肽(map)免疫的小鼠中生产抗体的方法，其中所述肽是由癌症患者herv-k su蛋白产生的。
11.一种如权利要求9所述的方法，其中癌症选自黑色素瘤、慢性淋巴细胞...
【专利技术属性】
技术研发人员：F·王约翰宁，G·约翰宁，
申请(专利权)人：阳光海岸生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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