【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及结合ox40的抗体和抗体衍生物及其使用方法。在某些实施方案中，抗体衍生物是结合ox40和另外的抗原(例如ctla4)的多特异性抗体。
技术介绍
1、ox40，也称为肿瘤坏死因子受体超家族成员4(tnfrsf4)和cd134，是一种主要由t细胞等免疫细胞表达的1型跨膜糖蛋白。ox40可以诱导抗凋亡蛋白和细胞周期进展蛋白的表达，从而它可以抑制活化诱导的细胞死亡(activation induced cell death)，并促进抗原特异性记忆t细胞的存活。ox40共刺激信号还可以激活nf-kb通路，以直接刺激效应t细胞。此外，ox40在各种不同癌症的肿瘤浸润淋巴细胞(til)上被发现，包括头颈鳞状细胞癌、卵巢癌、胃癌、皮肤鳞状细胞癌、乳腺癌和结直肠癌。先前的研究已表明，活化ox40和/或其配体(ox40l)可以诱导抗肿瘤作用。因此，本领域需要开发用于癌症治疗的ox40-靶向分子和方法。
2、细胞毒性t淋巴细胞相关蛋白4(ctla4)，也称为cd152、grd4和alps5，是免疫球蛋白超家族的成员，可向t细胞传递抑制信号。通过活化效应t细胞并减少treg介导的t细胞抑制，ctla4通路阻断可以诱导抗肿瘤作用。例如，使用伊匹单抗(ipilimumab)进行抗ctla4阻断可以延长晚期黑色素瘤患者的总生存期。因此，本领域需要开发用于癌症治疗的ctla4-靶向分子和方法。
技术实现思路
1、本专利技术提供了以高亲和力与ox40特异性结合的分离的单克隆抗体和抗体衍生物
2、在某些实施方案中，本文公开的多特异性抗体与ox40和ctla4结合。在某些实施方案中，多特异性抗体包含i)第一抗原结合部分，包含激动型抗ox40抗体，其包含结合ox40的单域抗体；和ii)第二抗原结合部分，包含结合ctla4的拮抗型抗ctla4抗体。在某些实施方案中，单域抗体包含vhh。在某些实施方案中，单域抗体或vhh包含重链可变区(vh)。
3、在某些实施方案中，单域抗体以1×10-7m或更低的kd与ox40结合。在某些实施方案中，单域抗体以5×10-8m或更低的kd与ox40结合。在某些实施方案中，单域抗体以1×10-8m或更小的kd结合ox40。在某些实施方案中，单域抗体以约1×10-10m至约5×10-8m的kd结合ox40。
4、在某些实施方案中，单域抗体与参考抗ox40单域抗体交叉竞争结合ox40，该参考抗体包含重链可变区，其包含：a)包含seq id no:1所示氨基酸序列的重链可变区cdr1，包含seq id no:2所示氨基酸序列的重链可变区cdr2，和包含seq id no:3所示氨基酸序列的重链可变区cdr3；b)包含seq id no:6所示氨基酸序列的重链可变区cdr1，包含seq id no:7所示氨基酸序列的重链可变区cdr2，和包含seq id no:8所示氨基酸序列的重链可变区cdr3；c)包含seq id no:11所示氨基酸序列的重链可变区cdr1，包含seq id no:12所示氨基酸序列的重链可变区cdr2，和包含seq id no:13所示氨基酸序列的重链可变区cdr3；d)包含seq id no:16所示氨基酸序列的重链可变区cdr1，包含seq id no:17所示氨基酸序列的重链可变区cdr2以及包含seq id no:18所示氨基酸序列的重链可变区cdr3；e)包含seqid no:21所示氨基酸序列的重链可变区cdr1，包含seq id no:22所示氨基酸序列的重链可变区cdr2，和包含seq id no:23所示氨基酸序列的重链可变区cdr3；f)包含seq id no:26所示氨基酸序列的重链可变区cdr1，包含seq id no:27所示氨基酸序列的重链可变区cdr2，和包含seq id no:28所示氨基酸序列的重链可变区cdr3；g)包含seq id no:31所示氨基酸序列的重链可变区cdr1，包含seq id no:32所示氨基酸序列的重链可变区cdr2，和包含seq id no:33所示氨基酸序列的重链可变区cdr3；h)包含seq id no:36所示氨基酸序列的重链可变区cdr1，包含seq id no:37所示氨基酸序列的重链可变区cdr，和包含seq idno:38所示氨基酸序列的重链可变区cdr3；i)包含seq id no:41所示氨基酸序列的重链可变区cdr1，包含seq id no:42所示氨基酸序列的重链可变区cdr2，和包含seq id no:43所示氨基酸序列的重链可变区cdr3；j)包含seq id no:46所示氨基酸序列的重链可变区cdr1，包含seq id no:47所示氨基酸序列的重链可变区cdr2，和包含seq id no:48所示氨基酸序列的重链可变区cdr3；k)包含seq id no:51所示氨基酸序列的重链可变区cdr1，包含seq id no:52所示氨基酸序列的重链可变区cdr2，和包含seq id no:53所示氨基酸序列的重链可变区cdr3；l)包含seq id no:56所示氨基酸序列的重链可变区cdr1，包含seq idno:57所示氨基酸序列的重链可变区cdr2，和包含seq id no:58所示氨基酸序列的重链可变区cdr3；m)包含seq id no:61所示氨基酸序列的重链可变区cdr1，包含seq id no:62所示氨基酸序列的重链可变区cdr2，和包含seq id no:63所示氨基酸序列的重链可变区cdr3；n)包含seq id no:66所示氨基酸序列的重链可变区cdr1，包含seq id no:67所示氨基酸序列的重链可变区cdr2，和包含seq id no:68所示氨基酸序列的重链可变区cdr3；o)包含seq id no:71所示氨基酸序列的重链可变区cdr1，包含seq id no:72所示氨基酸序列的重链可变区cdr2，和包含seq id no:73所示氨基酸序列的重链可变区cdr3；或p)包含seqid no:76所示氨基酸序列的重链可变区cdr1，包含seq id no:77所示氨基酸序列的重链可变区cdr2，和包含seq id no:78所示氨基酸序列的重链可变区cdr3。
5、在某些实施方案中，单域抗体包含重链可变区，该重链可变区包含：a)重链可变区cdr1，其包含seq i本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种结合OX40和CTLA4的多特异性抗体，包含：
2.如权利要求1所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含VHH。
3.如权利要求1或2所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体或所述VHH包含重链可变区(VH)。
4.如权利要求1-3中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体以1×10-7M或更小的KD结合OX40。
5.如权利要求1-4中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体以5×10-8M或更小的KD结合OX40。
6.如权利要求1-5中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体以1×10-8M或更小的KD结合OX40。
7.如权利要求1-6中任一项的多特异性抗体，其中所述单域抗体以约1×10-10M至约5×10-8M的KD结合OX40。
8.如权利要求1-7中任一项的多特异性抗体，其中所述单域抗体与参考单域抗体交叉竞争结合OX40，参考单域抗体包含一重链可变区，其包含：
9.如权利要求1-8中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含重链可变区，其包含：
11.如权利要求1-10中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含包含SEQID NO:1所示氨基酸序列的重链可变区CDR1，包含SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的重链可变区CDR2，和包含SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的重链可变区CDR3。
12.如权利要求1-10中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含包含SEQID NO:6所示氨基酸序列的重链可变区CDR1，包含SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的重链可变区CDR2，和包含SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的重链可变区CDR3。
13.如权利要求1-10中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含包含SEQID NO:11所示氨基酸序列的重链可变区CDR1，包含SEQ ID NO:12所示氨基酸序列的重链可变区CDR2，和包含SEQ ID NO:13所示氨基酸序列的重链可变区CDR3。
14.如权利要求1-10中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含包含SEQID NO:16所示氨基酸序列的重链可变区CDR1，包含SEQ ID NO:17所示氨基酸序列的重链可变区CDR2，和包含SEQ ID NO:18所示氨基酸序列的重链可变区CDR3。
15.如权利要求1-10中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含包含SEQID NO:21所示氨基酸序列的重链可变区CDR1，包含SEQ ID NO:22所示氨基酸序列的重链可变区CDR2，和包含SEQ ID NO:23所示氨基酸序列的重链可变区CDR3。
16.如权利要求1-10中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含包含SEQID NO:26所示氨基酸序列的重链可变区CDR1，包含SEQ ID NO:27所示氨基酸序列的重链可变区CDR2，和包含SEQ ID NO:28所示氨基酸序列的重链可变区CDR3。
17.如权利要求1-10中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含包含SEQID NO:31所示氨基酸序列的重链可变区CDR1，包含SEQ ID NO:32所示氨基酸序列的重链可变区CDR2，和包含SEQ ID NO:33所示氨基酸序列的重链可变区CDR3。
18.如权利要求1-10中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含包含SEQID NO:36所示氨基酸序列的重链可变区CDR1，包含SEQ ID NO:37所示氨基酸序列的重链可变区CDR2，和包含SEQ ID NO:38所示氨基酸序列的重链可变区CDR3。
19.如权利要求1-10中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含包含SEQID NO:41所示氨基酸序列的重链可变区CDR1，包含SEQ ID NO:42所示氨基酸序列的重链可变区CDR2，和包含SEQ ID NO:43所示氨基酸序列的重链可变区CDR3。
20.如权利要求1-10中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种结合ox40和ctla4的多特异性抗体，包含：
2.如权利要求1所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含vhh。
3.如权利要求1或2所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体或所述vhh包含重链可变区(vh)。
4.如权利要求1-3中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体以1×10-7m或更小的kd结合ox40。
5.如权利要求1-4中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体以5×10-8m或更小的kd结合ox40。
6.如权利要求1-5中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体以1×10-8m或更小的kd结合ox40。
7.如权利要求1-6中任一项的多特异性抗体，其中所述单域抗体以约1×10-10m至约5×10-8m的kd结合ox40。
8.如权利要求1-7中任一项的多特异性抗体，其中所述单域抗体与参考单域抗体交叉竞争结合ox40，参考单域抗体包含一重链可变区，其包含：
9.如权利要求1-8中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含重链可变区，其包含：
10.如权利要求1-9任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含重链可变区，该重链可变区包含cdr1结构域、cdr2结构域和cdr3结构域，其中所述cdr1结构域、cdr2结构域和cdr3结构域分别包含参考重链可变区所包含的cdr1结构域、cdr2结构域和cdr3结构域，该参考重链可变区包含选自seq id no:4、9、14、19、24、29、34、39、44、49、54、59、64、69、74和79的氨基酸序列。
11.如权利要求1-10中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含包含seqid no:1所示氨基酸序列的重链可变区cdr1，包含seq id no:2所示氨基酸序列的重链可变区cdr2，和包含seq id no:3所示氨基酸序列的重链可变区cdr3。
12.如权利要求1-10中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含包含seqid no:6所示氨基酸序列的重链可变区cdr1，包含seq id no:7所示氨基酸序列的重链可变区cdr2，和包含seq id no:8所示氨基酸序列的重链可变区cdr3。
13.如权利要求1-10中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含包含seqid no:11所示氨基酸序列的重链可变区cdr1，包含seq id no:12所示氨基酸序列的重链可变区cdr2，和包含seq id no:13所示氨基酸序列的重链可变区cdr3。
14.如权利要求1-10中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含包含seqid no:16所示氨基酸序列的重链可变区cdr1，包含seq id no:17所示氨基酸序列的重链可变区cdr2，和包含seq id no:18所示氨基酸序列的重链可变区cdr3。
15.如权利要求1-10中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含包含seqid no:21所示氨基酸序列的重链可变区cdr1，包含seq id no:22所示氨基酸序列的重链可变区cdr2，和包含seq id no:23所示氨基酸序列的重链可变区cdr3。
16.如权利要求1-10中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含包含seqid no:26所示氨基酸序列的重链可变区cdr1，包含seq id no:27所示氨基酸序列的重链可变区cdr2，和包含seq id no:28所示氨基酸序列的重链可变区cdr3。
17.如权利要求1-10中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含包含seqid no:31所示氨基酸序列的重链可变区cdr1，包含seq id no:32所示氨基酸序列的重链可变区cdr2，和包含seq id no:33所示氨基酸序列的重链可变区cdr3。
18.如权利要求1-10中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含包含seqid no:36所示氨基酸序列的重链可变区cdr1，包含seq id no:37所示氨基酸序列的重链可变区cdr2，和包含seq id no:38所示氨基酸序列的重链可变区cdr3。
19.如权利要求1-10中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含包含seqid no:41所示氨基酸序列的重链可变区cdr1，包含seq id no:42所示氨基酸序列的重链可变区cdr2，和包含seq id no:43所示氨基酸序列的重链可变区cdr3。
20.如权利要求1-10中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含包含seqid no:46所示氨基酸序列的重链可变区cdr1，包含seq id no:47所示氨基酸序列的重链可变区cdr2，和包含seq id no:48所示氨基酸序列的重链可变区cdr3。
21.如权利要求1-10中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含包含seqid no:51所示氨基酸序列的重链可变区cdr1，包含seq id no:52所示氨基酸序列的重链可变区cdr2，和包含seq id no:53所示氨基酸序列的重链可变区cdr3。
22.如权利要求1-10中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含包含seqid no:56所示氨基酸序列的重链可变区cdr1，包含seq id no:57所示氨基酸序列的重链可变区cdr2，和包含seq id no:58所示氨基酸序列的重链可变区cdr3。
23.如权利要求1-10中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含包含seqid no:61所示氨基酸序列的重链可变区cdr1，包含seq id no:62所示氨基酸序列的重链可变区cdr2，和包含seq id no:63所示氨基酸序列的重链可变区cdr3。
24.如权利要求1-10中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含包含seqid no:66所示氨基酸序列的重链可变区cdr1，包含seq id no:67所示氨基酸序列的重链可变区cdr2，和包含seq id no:68所示氨基酸序列的重链可变区cdr3。
25.如权利要求1-10中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含包含seqid no:71所示氨基酸序列的重链可变区cdr1，包含seq idno:72所示氨基酸序列的重链可变区cdr2，和包含seq id no:73所示氨基酸序列的重链可变区cdr3。
26.如权利要求1-10中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含包含seqid no:76所示氨基酸序列的重链可变区cdr1，包含seq id no:77所示氨基酸序列的重链可变区cdr2，和包含seq id no:78所示氨基酸序列的重链可变区cdr3。
27.如权利要求1-26中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含重链可变区，该重链可变区包含与选自seq id no:4、9、14、19、24、29、34、39、44、49、54、59、64、69、74和79的氨基酸序列具有至少约90％序列同一性的氨基酸序列。
28.如权利要求1-27中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含重链可变区，其包含seq id no:4所示的氨基酸序列。
29.如权利要求1-27中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含重链可变区，其包含seq id no:9所示的氨基酸序列。
30.如权利要求1-27中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含重链可变区，其包含seq id no:14所示的氨基酸序列。
31.如权利要求1-27中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含重链可变区，其包含seq id no:19所示的氨基酸序列。
32.如权利要求1-27中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含重链可变区，其包含seq id no:24所示的氨基酸序列。
33.如权利要求1-27中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含重链可变区，其包含seq id no:29所示的氨基酸序列。
34.如权利要求1-27中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含重链可变区，其包含seq id no:34所示的氨基酸序列。
35.如权利要求1-27中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含重链可变区，其包含seq id no:39所示的氨基酸序列。
36.如权利要求1-27中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含重链可变区，其包含seq id no:44所示的氨基酸序列。
37.如权利要求1-27中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含重链可变区，其包含seq id no:49所示的氨基酸序列。
38.如权利要求1-27中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含重链可变区，其包含seq id no:54所示的氨基酸序列。
39.如权利要求1-27中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含重链可变区，其包含seq id no:59所示氨基酸序列。
40.如权利要求1-27中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含重链可变区，其包含seq id no:64所示氨基酸序列。
41.如权利要求1-27中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含重链可变区，其包含seq id no:69所示氨基酸序列。
42.如权利要求1-27中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含重链可变区，其包含seq id no:74所示氨基酸序列。
43.如权利要求1-27中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含重链可变区，其包含seq id no:79所示氨基酸序列。
44.如权利要求1-43中任一项所述的多特异性抗体，其中所述单域抗体包含人源化框架。
45.如权利要求1-44中任一项所述的多特异性抗体，其中所述第二抗原结合部分包含与参考抗ctla4抗体交叉竞争的抗ctla4抗体，该参考抗体包含重链可变区(vh)，其包含(1)包含seq id no:141所示氨基酸序列的cdr-h1，(2)包含seq id no:142所示氨基酸序列的cdr-h2，和(3)包含seq id no:143所示氨基酸序列的cdr-h3；和轻链可变区(vl)，其包含(1)包含seq id no:144所示氨基酸序列的cdr-l1，(2)包含seq id no:145所示氨基酸序列的cdr-l2，和(3)包含seq id no:146所示氨基酸序列的cdr-l3。
46.如权利要求1-45中任一项所述的多特异性抗体，其中所述第二抗原结合部分包含重链可变区(vh)，其包含(1)包含seq id no:141所示氨基酸序列的cdr-h1，(2)包含seq idno:142所示氨基酸序列的cdr-h2，和(3)包含seq id no:143所示氨基酸序列的cdr-h3；和轻链可变区(vl)，其包含(1)包含seq id no:144所示氨基酸序列的cdr-l1，(2)包含seq idno:145所示氨基酸序列的cdr-l2，和(3)包含seq id no:146所示氨基酸序列的cdr-l3。
47.如权利要求1-46中任一项所述的多特异性抗体，其中所述第二抗原结合部分包含重链可变区，其包含seq id no:147所示氨基酸序列，和轻链可变区，其包含seq id no:148所示氨基酸序列。
48.如权利要求1-47中任一项所述的多特异性抗体，其中所述抗ctla4抗体包含人抗体。
49.如权利要求1-48中任一项所述的多特异性抗体，其中所述第二抗原结合部分包含抗ctla4抗体，其包含两条抗体重链和两条抗体轻链。
50.如权利要求1-49中任一项所述的多特异性抗体，其中所述第一抗原结合部分包含一个或多个抗ox40抗体。
51.如权利要求1-50中任一项所述的多特异性抗体，其中所述第一抗原结合部分包含四个抗ox40抗体。
52.如权利要求1-51中任一项所述的多特异性抗体，其中所述两条抗ctla4轻链中的至少一条的c末端与所述第一抗原结合部分的抗ox40抗体连接。
53.如权利要求52所述的多特异性抗体，其中所述两条抗ctla4轻链中每条的c末端与所述第一抗原结合部分的抗ox40抗体连接。
54.如权利要求1-53中任一项所述的多特异性抗体，其中所述两条抗ctla4轻链中的至少一条的n末端与所述第一抗原结合部分的抗ox40抗体连接。
55.如权利要求54所述的多特异性抗体，其中所述两条抗ctla4轻链中每条的n末端与所述第一抗原结合部分的抗ox40抗体连接。
56.如权利要求1-55中任一项所述的多特异性抗体，其中所述两条抗ctla4重链中的至少一条的c末端与所述第一抗原结合部分的抗ox40抗体连接。
57.如权利要求56所述的多特异性抗体，其中所述两条抗ctla4重链中每条的c末端与所述第一抗原结合部...
【专利技术属性】
技术研发人员：许文峰，董晨，林佩桦，姜伟东，张仁宽，
申请(专利权)人：上海复宏汉霖生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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