【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物分离，具体涉及一种靶型多腔电泳装置及其制备方法、分离细胞外囊泡的方法。
技术介绍
1、细胞外囊泡(extracellular vesicles，evs)是一种由细胞向外出芽或者通过内体膜向内出芽形成的多泡体与质膜融合释放的小囊泡，具有来源广泛、内含物丰富(包含蛋白质、核酸和脂质等成分)、尺寸分布广(30-1000nm)等特征。此外，因其具有磷脂双分子层膜结构表现出良好的稳定性、靶向性、远距离迁移性等特征，在细胞间通讯和信号传递中发挥重要通讯作用。
2、目前，对于evs的生物学功能研究及临床研究需要使用一定纯度及样品量的evs。然而因evs体积小、样品基质复杂、尺寸和电荷量与其他脂蛋白相似等特征，严重影响了evs的高效率纯化和高产量制备。
3、目前传统的evs分离方法主要根据自身密度、尺寸、抗体与靶分子的特异性结合原理的超速离心法、尺寸排阻法、聚合物沉淀法等，但这些技术操作繁琐、费时费力、无法获取高纯度及高产量的evs，难以满足临床应用需求。
4、综上，迫切需要开发一种快速、高纯度、高通量分离制备evs的装置和方法。
技术实现思路
1、本专利技术提供一种靶型多腔电泳装置及其制备方法以及分离细胞外囊泡的方法，其能够快速、高纯度、高通量分离制备evs。
2、本专利技术第一方面提供一种靶型多腔电泳装置，包括：
3、电泳槽，
4、凝胶分离结构，凝胶分离结构为环形，设置在电泳槽的底部；凝胶分离结构包括沿径
5、内电极，内电极设置在第n环形凝胶层的中心通孔内；
6、外电极，外电极为环形，套设在凝胶分离结构的周向外侧。
7、在一些实施例中，第一环形凝胶层包括：
8、环形底壁；
9、环形凸块，环形凸块设置在环形底壁上表面的外边缘处，并且环形凸块上设置有凹槽；第二环形凝胶层以及第n环形凝胶层均设置在环形底壁的上表面，并且第一环形凝胶层、第二环形凝胶层以及第n环形凝胶层一体成型。
10、在一些实施例中，回收室的体积小于样品室的体积。
11、在一些实施例中，n为2，凝胶分离结构包括沿径向从外到内套设的第一环形凝胶层和第二环形凝胶层，第一环形凝胶层和第二环形凝胶层之间的空隙为回收室。
12、在一些实施例中，第一环形凝胶层的孔径为35-300nm；第二环形凝胶层的孔径为15-30nm。
13、在一些实施例中，样品室和回收室之间的第一环形凝胶层部分的厚度为2-5mm；第二环形凝胶层以及第n环形凝胶层的厚度均为3-7mm。
14、本专利技术第二方面提供一种靶型多腔电泳装置的制备方法，该方法用于制备本专利技术第一方面的靶型多腔电泳装置，该方法包括以下步骤：
15、构建本专利技术第一方面的靶型多腔电泳装置中的凝胶分离结构；
16、将凝胶分离结构转移到电泳槽内；
17、将内电极置于凝胶分离结构的第n环形凝胶层的中心通孔内；
18、在凝胶分离结构的周向外侧套设外电极。
19、在一些实施例中，构建凝胶分离结构包括以下步骤：
20、根据预设的浓度和体积配置第一凝胶，将第一凝胶灌入第一模具中，凝固后形成第一环形凝胶层；
21、根据预设的浓度和体积配置第二凝胶，在第一环形凝胶层的环内放置第二模具，将第二凝胶灌入第二模具内，凝固后形成第二环形凝胶层；
22、以此类推，形成第n环形凝胶层。
23、本专利技术第三方面提供一种分离细胞外囊泡的方法，包括以下步骤：
24、在本专利技术第一方面的靶型多腔电泳装置中注入缓冲溶液；
25、将生物样品进样至样品室内；
26、将内电极、外电极与电源接通后开始电泳，从而将生物样品中的细胞外囊泡截留在回收室内。
27、在一些实施例中，在电泳结束后，将样品室内剩余的溶液排出，再多次重复进行进样、电泳和排出步骤。
28、相比现有技术，本专利技术的有益效果：
29、本专利技术提供了一种靶型多腔电泳装置及其制备方法以及分离细胞外囊泡的方法，其能够快速、高纯度、高通量分离制备evs，原理如下：基于evs与样品中其他颗粒的尺寸和电荷异质性特征，构建了具有样品室、回收室、冷凝室的靶型多腔凝胶装置，利用内电极和环形外电极形成环形非均匀电场，电场强度从外向内梯度增高，由于样品室的电场强度低，第一环形凝胶层的孔径大，evs和蛋白质在电场作用下通过孔径大的第一环形凝胶层后迁移至回收室，实现了与样品中小细胞碎片等大颗粒的分离；而不同回收室的电场强度从外到内依次递减，evs和蛋白质通过由外向内不断迁移，从而可实现不同尺寸和电荷特征的evs的进一步细化分离；回收室的电场强度小于冷凝室，小尺寸蛋白质可穿过小孔径的第n环形凝胶层后进入冷凝室，实现evs与蛋白质的高效分离，有效提高了回收室的evs纯度。另外，本专利技术通过持续进样，使得回收室内evs浓度持续增加，从而达到分离浓缩一体化的效果，实现快速、高通量分离制备evs。综上，本专利技术实现了evs的快速、高纯度、高通量分离与制备。
30、此外，本专利技术可以通过在冷凝室中持续循环排出和注入缓冲溶液，维持体系温度及ph稳定，保持分离有效进行，同时排出冷凝室中的蛋白质。
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1.一种靶型多腔电泳装置，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的靶型多腔电泳装置，其特征在于，所述第一环形凝胶层包括：
3.根据权利要求1所述的靶型多腔电泳装置，其特征在于，所述回收室的体积小于所述样品室的体积。
4.根据权利要求1所述的靶型多腔电泳装置，其特征在于，n为2，所述凝胶分离结构包括沿径向从外到内套设的所述第一环形凝胶层和所述第二环形凝胶层，所述第一环形凝胶层和所述第二环形凝胶层之间的空隙为回收室。
5.根据权利要求4所述的靶型多腔电泳装置，其特征在于，所述第一环形凝胶层的孔径为35-300nm；所述第二环形凝胶层的孔径为15-30nm。
6.根据权利要求1所述的靶型多腔电泳装置，其特征在于，所述样品室和所述回收室之间的所述第一环形凝胶层部分的厚度为2-5mm；所述第二环形凝胶层以及所述第n环形凝胶层的厚度均为3-7mm。
7.一种靶型多腔电泳装置的制备方法，所述制备方法用于制备权利要求1-6中任一项所述的靶型多腔电泳装置，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
8.根据权利要求
9.一种分离细胞外囊泡的方法，其特征在于，包括以下步骤：
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，在所述电泳结束后，将样品室内剩余的溶液排出，再多次重复进行所述进样、所述电泳和所述排出步骤，从而实现连续分离细胞外囊泡。
...【技术特征摘要】
1.一种靶型多腔电泳装置，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的靶型多腔电泳装置，其特征在于，所述第一环形凝胶层包括：
3.根据权利要求1所述的靶型多腔电泳装置，其特征在于，所述回收室的体积小于所述样品室的体积。
4.根据权利要求1所述的靶型多腔电泳装置，其特征在于，n为2，所述凝胶分离结构包括沿径向从外到内套设的所述第一环形凝胶层和所述第二环形凝胶层，所述第一环形凝胶层和所述第二环形凝胶层之间的空隙为回收室。
5.根据权利要求4所述的靶型多腔电泳装置，其特征在于，所述第一环形凝胶层的孔径为35-300nm；所述第二环形凝胶层的孔径为15-30nm。
6.根据权利要求1所述的靶型多...
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