【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物活性肽，尤其涉及一种具有改善睡眠活性的海参低聚肽及其制备方法和应用。
技术介绍
1、睡眠是人类必不可少的自然生理状态。睡眠质量对于人体健康起着至关重要的作用，短期失眠会直接导致躯体疲劳、注意力下降、思维及行动迟缓，极大影响了生活和工作质量，造成不可挽回的经济损失。长期失眠更会导致人体记忆力下降、内分泌失调、免疫力下降，糖尿病、肥胖等代谢疾病患病概率上升，暴躁、易怒、焦虑甚至抑郁。随着现代社会养生理念的发展，人们越来越注重睡眠质量。然而很多人具有睡眠障碍，失眠成为影响其生活质量的头号问题，包括入睡困难、易醒、多梦等症状。失眠病因复杂，生理、心理、环境等多种因素均可影响睡眠。目前临床主要使用化学合成的镇静催眠药物治疗失眠，包括苯二氮䓬类受体激动剂、非苯二氮䓬类受体激动剂、抗抑郁药等。其中，苯二氮䓬类药物应用最广泛，如地西泮（安定）、氟西泮、艾司唑仑、三唑仑等。gabaa受体是一种配体门控cl-通道，苯二氮䓬位点位于其α1γ2亚基上，当gabaa受体被激动时，cl-通道开放的数目增多，选择性让cl-内流进入神经元，引发抑制性突触后电位，从而抑制突触后神经元兴奋性降低，起到镇静作用。尽管苯二氮䓬类药物可缩短诱导睡眠时间，减少夜间觉醒次数，延长睡眠持续时间，其催眠作用较近似生理性睡眠，但长期用药会出现头昏、嗜睡、乏力等副作用，产生耐药性和依赖性，停药时出现反跳和戒断症状。因此，寻找一种能够作用于苯二氮䓬位点、镇静效果好、副作用小、安全、可长期服用的生物药迫在眉睫。
2、生物活性肽是从天然生物中提取的具有积极生
技术实现思路
1、针对以上技术问题，本专利技术提供一种有助于改善睡眠的海参低聚肽及其制备方法和应用。本专利技术提供的海参低聚肽具有优异的改善睡眠作用，可用于制成多种改善睡眠产品；本专利技术提供的制备方法条件温和、易控，适合于产业化实施。
2、为达到上述专利技术目的，本专利技术采用了如下的技术方案：
3、本专利技术第一方面提供一种海参低聚肽，所述海参低聚肽含有海参低聚肽scp1和海参低聚肽scp2；其中所述海参低聚肽scp1由以下四种氨基酸组成：色氨酸-组氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸（缩写为whpf，序列如seq id no.1所示），分子量为585.27da；所述海参低聚肽scp2由以下四种氨基酸组成：丙氨酸-精氨酸-色氨酸-苯丙氨酸（缩写为arwf，序列如seqid no.2所示），分子量为578.30da。
4、本专利技术提供的海参低聚肽是以海参为原料的生物活性肽，天然安全、无毒副作用。经试验研究发现，海参低聚肽scp1和scp2与gabaa受体苯二氮䓬位点均有良好的结合能力，对接结合能分别为-10.7kcal/mol和-10.8kcal/mol。海参低聚肽scp1与gabaa受体lys151、val238、his137、tyr195、phe116、asn99、tyr97、pro175、gly230、asp231残基形成7条氢键，存在5个疏水作用；海参低聚肽scp2与gabaa受体asn99、asp231、phe116、ser240、tyr195、tyr245、gln239、tyr97、ser241、his137残基形成10条氢键，存在1种静电作用和3种疏水作用。海参低聚肽scp1和scp2均能缩短戊巴比妥钠催眠小鼠的睡眠潜伏期，延长睡眠持续时间，且二者在延长睡眠持续时间方面具有协同作用。
5、优选地，所述海参低聚肽中海参低聚肽scp1和海参低聚肽scp2的含量均大于等于40%。
6、优选地，所述海参低聚肽scp1和海参低聚肽scp2由固相合成法化学合成。
7、本专利技术第二方面提供了上述海参低聚肽的制备方法，具体包括以下步骤：
8、s1、将海参与水按1:（18~20）的料液比制成海参匀浆，按7000~8000u/g蛋白的加酶量加入由α-糜蛋白酶和碱性蛋白酶按1:（0.7~0.8）的质量比复配的复合酶，进行酶解，得酶解液；
9、s2、将s1得到的所述酶解液离心，取上清，浓缩后加入乙醇，使乙醇体积浓度为75%~85%，沉淀60~72 h后取上清液，浓缩、干燥，得海参粗肽；
10、s3、将s2所得海参粗肽溶于超纯水中，用凝胶色谱进行分离纯化，收集分子量小于1kda的流出液；
11、s4、将s3所得流出液用制备型反相高效液相色谱进行分离纯化，得到所述海参低聚肽。
12、本专利技术中的上述制备方法首先通过采用由α-糜蛋白酶和碱性蛋白酶以1:（0.7~0.8）的质量比复配的复合酶在温和条件下进行协同水解，经醇沉除糖后获得海参粗肽，再用凝胶色谱与反相高效液相色谱组合对海参粗肽进行系统分离，从而使得到的海参低聚肽中以scp1和scp2为主成分，具有显著的改善睡眠作用。
13、优选地，s1中所述料液比为1:20。
14、优选地，s1中所述加酶量为8000u/g蛋白。其中“蛋白”是指海参匀浆中蛋白的质量。
15、优选地，s1中所述复合酶中α-糜蛋白酶和碱性蛋白酶的质量比为1:0.7。
16、优选地，s1中所述酶解的参数为：ph8.5-9.0，酶解温度38-42 ℃，酶解时间5-6 h。
17、优选地，s2中加入乙醇后的所述乙醇体积浓度为80%。
18、优选地，s2中所述干燥的方式为冷冻干燥。
19、优选地，s3中所述凝胶色谱的色谱柱为tk-col 16/60 gf30，紫外检测器检测波长为220 nm，平衡缓冲液为超纯水。
20、进一步优选地，进样浓度为10mg/ml。
21、优选地，s4中所述制备型反相高效液相色谱的色谱条件包括：色谱柱为agilentprep c18，规格为100å，5 µm，30×100 mm，检测波长为220nm，柱温为30℃，流动相a为0.05%~0.1%三氟乙酸（tfa）水溶液，流动相b为含0.05%~0.1%三氟乙酸的乙腈水溶液，所述乙腈水溶液中乙腈体积百分浓度为84%~85%；洗脱梯度，洗脱程序为0~50min 96%-50%a；50~54min50% ~0%a；54~60min 0%a；收集8~12min的流出液。
22、优选地，流动相a为0.1%三氟乙酸（tfa）水溶液，流动相b为含0.1%三氟乙酸的乙腈水溶液，所述乙腈水溶液中乙腈体积百分浓度为84%。
23、本专利技术第三方面提供了上述海参低聚肽在制备改善本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种海参低聚肽，其特征在于，所述海参低聚肽含有海参低聚肽SCP1和海参低聚肽SCP2；其中所述海参低聚肽SCP1由以下四种氨基酸组成：色氨酸-组氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸，分子量为585.27Da；所述海参低聚肽SCP2由以下四种氨基酸组成：丙氨酸-精氨酸-色氨酸-苯丙氨酸，分子量为578.30Da。
2.根据权利要求1所述的海参低聚肽，其特征在于，所述海参低聚肽中海参低聚肽SCP1和海参低聚肽SCP2的含量均大于等于40%。
3.根据权利要求1所述的海参低聚肽，其特征在于，所述海参低聚肽SCP1和海参低聚肽SCP2由固相合成法化学合成。
4.权利要求1或2所述的海参低聚肽的制备方法，具体包括以下步骤：
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，S1中所述料液比为1:20；和/或
6.根据权利要求4或5所述的制备方法，其特征在于，S3中所述凝胶色谱的色谱柱为TK-Col 16/60 GF30，紫外检测器检测波长为220 nm，平衡缓冲液为超纯水。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，进样浓度为1
8.根据权利要求4或5所述的制备方法，其特征在于，S4中所述制备型反相高效液相色谱的色谱条件包括：色谱柱为Agilent Prep C18，规格为100Å，5 µm，30×100 mm，检测波长为220nm，柱温为30℃，流动相A为0.05%~0.1%三氟乙酸水溶液，流动相B为含0.05%~0.1%三氟乙酸的乙腈水溶液，所述乙腈水溶液中乙腈体积百分浓度为84%~85%；洗脱梯度，洗脱程序为0~50min 96%-50%A；50~54min50% ~0%A；54~60min 0%A；收集8~12min的流出液。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，流动相A为0.1%三氟乙酸水溶液，流动相B为含0.1%三氟乙酸的乙腈水溶液，所述乙腈水溶液中乙腈体积百分浓度为84%。
10.权利要求1~3任一项所述的海参低聚肽或按权利要求4~9任一项所述的制备方法制得的海参低聚肽在制备改善睡眠产品中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种海参低聚肽，其特征在于，所述海参低聚肽含有海参低聚肽scp1和海参低聚肽scp2；其中所述海参低聚肽scp1由以下四种氨基酸组成：色氨酸-组氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸，分子量为585.27da；所述海参低聚肽scp2由以下四种氨基酸组成：丙氨酸-精氨酸-色氨酸-苯丙氨酸，分子量为578.30da。
2.根据权利要求1所述的海参低聚肽，其特征在于，所述海参低聚肽中海参低聚肽scp1和海参低聚肽scp2的含量均大于等于40%。
3.根据权利要求1所述的海参低聚肽，其特征在于，所述海参低聚肽scp1和海参低聚肽scp2由固相合成法化学合成。
4.权利要求1或2所述的海参低聚肽的制备方法，具体包括以下步骤：
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，s1中所述料液比为1:20；和/或
6.根据权利要求4或5所述的制备方法，其特征在于，s3中所述凝胶色谱的色谱柱为tk-col 16/60 gf30，紫外检测器检测波长为220 nm，平衡缓冲液为超纯水。
【专利技术属性】
技术研发人员：吴涛，孙雨婷，李亚师，任梦帆，于佳鑫，金艳，张民，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：
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