【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物检测领域，更具体地，本专利技术涉及一种用于检测猪萨佩罗病毒的双抗体夹心elisa试剂盒和方法。
技术介绍
1、猪萨佩罗病毒(porcine sapelovirus,psv)是一种新发猪传染病，主要经粪-口传播，猪感染后可引起腹泻，严重时致死。据研究，psv感染可导致猪群出现多种临床症状。psv感染会引起仔猪腹泻及psv感染后仔猪抵抗力下降后会诱发肺炎感染。感染仔猪会表现为呼吸速度加快、四肢无力、精神沉郁、食欲减退造成身型消瘦等。psv个别毒株可引起脑脊髓病。被感染的母猪可发生不孕、死产、木乃伊胎、死胎等。
2、有研究表明psv与其他腹泻病原混合感染现象较严重，常与猪萨佩罗病毒(psv)、猪嵴病毒(pkov)、猪星状病毒(pastv)等发生混合感染，阻碍了腹泻病的防控，目前关于psv的致病机理研究尚处于起步阶段，其发病和感染机制尚不清楚。目前，在psv的相关报道中，多采用反转录-聚合酶链式反应(rt-pcr)、荧光pcr(qpcr)等技术进行检测。据研究，5’-utr序列和3d基因相对保守，一般用于引物设计。但该方法无法进行定量分析且电泳易污染，可能导致结果假阳性。qpcr利用敏感荧光信号对病毒的扩增过程进行实时监控，从而实现对扩增结果的检测。该方法成本高，不适合大规模推广应用。
3、因此，本领域亟需建立一种成本低、能够准确检出psv，从而有利于大规模psv抗原筛查的试剂盒及检测方法。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种用于检测猪
2、在本专利技术的第一方面，提供一种单克隆抗体，所述单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含如seq id no:3、4、5所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3；所述轻链可变区包含如seq id no:6、7、8所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3。
3、在一种或多种实施方案中，所述单克隆抗体包含如seq id no:9所示的重链可变区，以及如seq id no:10所示的轻链可变区。
4、在本专利技术的第二方面，提供一种检测抗体，所述的检测抗体包括：本专利技术所述的单克隆抗体，或利用猪萨佩罗病毒vp1蛋白免疫动物获得的多克隆抗体；以及与之连接的可检测标记物；其中所述vp1蛋白的氨基酸序列如seq id no:2所示。
5、在一种或多种实施方案中，所述可检测标记物包括：荧光标记物、显色标记物；更佳地包括：辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶、β–d-半乳糖苷酶、脲酶、过氧化氢酶、葡萄糖淀粉酶、生物素、胶体金或荧光探针。
6、在一种或多种实施方案中，所述vp1蛋白的编码基因序列如seq id no:1所示。
7、在一种或多种实施方案中，所述动物是小鼠、大鼠、兔、羊或牛，例如为小鼠。
8、在本专利技术的第三方面，提供本专利技术所述的单克隆抗体，或本专利技术所述的检测抗体的用途，用于制备特异性地识别或检测猪萨佩罗病毒vp1蛋白或猪萨佩罗病毒的检测试剂或试剂盒。
9、在本专利技术的第四方面，提供一种用于特异性识别或检测猪萨佩罗病毒vp1蛋白和/或猪萨佩罗病毒的检测试剂，其包括：本专利技术所述的单克隆抗体，和/或本专利技术所述的检测抗体。
10、在一种或多种实施方案中，所述单克隆抗体的浓度为0.125～2μg/ml、0.25～2μg/ml、0.5～2μg/ml、0.25～1μg/ml、0.25～1μg/ml或0.5～1μg/ml，例如为0.5±0.1μg/ml；所述检测抗体的浓度为0.125～2μg/ml、0.125～1μg/ml、0.125～0.5μg/ml、0.25～2μg/ml、0.25～1μg/ml或0.25～0.5μg/ml，例如为0.25±0.1μg/ml。
11、在一种或多种实施方案中，所述检测试剂还包括显色液。
12、在一种或多种实施方案中，所述显色液包括与可检测标记物相对应的底物；例如，当所述标记物是辣根过氧化物酶时，所述底物为opd、mb、abts或tmb；更佳地，所述显色液中还包括h2o2。
13、在一种或多种实施方案中，所述检测试剂还包括洗涤液、标准品、稀释液、封闭液、终止液中的一种或多种。
14、在一种或多种实施方案中，所述洗涤液为pbs或pbst缓冲液。
15、在一种或多种实施方案中，所述稀释液为pbs或pbst缓冲液。
16、在一种或多种实施方案中，所述标准品为猪萨佩罗病毒vp1蛋白。
17、在一种或多种实施方案中，所述封闭液为1％～5％的脱脂奶粉或1％～5％的bsa缓冲液。
18、在一种或多种实施方案中，所述的终止液为硫酸水溶液。
19、在一种或多种实施方案中，所述标准品为溶液或冻干粉，所述封闭液为1±0.1％bsa，所述终止液为0.5～2m的硫酸水溶液。
20、在本专利技术的第五方面，提供一种用于特异性识别或检测猪萨佩罗病毒vp1蛋白和/或猪萨佩罗病毒的试剂盒，其包括：本专利技术所述的单克隆抗体，和/或本专利技术所述的检测抗体。
21、在一种或多种实施方案中，所述试剂盒中还包括本专利技术所述的检测试剂。
22、在一种或多种实施方案中，所述试剂盒中包括：捕获抗体和检测抗体；其中所述捕获抗体为本专利技术所述的单克隆抗体，所述检测抗体为本专利技术所述的检测抗体。
23、在一种或多种实施方案中，所述捕获抗体的浓度为0.125～2μg/ml、0.25～2μg/ml、0.5～2μg/ml、0.25～1μg/ml、0.25～1μg/ml或0.5～1μg/ml，更佳为0.5±0.1μg/ml；所述检测抗体的浓度为0.125～2μg/ml、0.125～1μg/ml、0.125～0.5μg/ml、0.25～2μg/ml、0.25～1μg/ml或0.25～0.5μg/ml，更佳为0.25±0.1μg/ml。
24、在一种或多种实施方案中，所述检测试剂还包括显色液。
25、在一种或多种实施方案中，所述显色液包括与可检测标记物相对应的底物；例如，当所述标记物是辣根过氧化物酶时，所述底物为opd、mb、abts或tmb；更佳地，所述显色液中还包括h2o2。
26、在一种或多种实施方案中，所述检测试剂还包括洗涤液、标准品、稀释液、封闭液、终止液中的一种或多种。
27、在一种或多种实施方案中，所述洗涤液为pbs或pbst缓冲液。
28、在一种或多种实施方案中，所述稀释液为pbs或pbst缓冲液。
29、在一种或多种实施方案中，所述标准品为猪萨佩罗病毒vp1蛋白。
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1.一种单克隆抗体，所述单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含如SEQ ID NO:3、4、5所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；所述轻链可变区包含如SEQIDNO:6、7、8所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
2.如权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体包含如SEQ ID NO:9所示的重链可变区，以及如SEQ ID NO:10所示的轻链可变区。
3.一种检测抗体，其特征在于，所述的检测抗体包括：权利要求1或2所述单克隆抗体，或利用猪萨佩罗病毒VP1蛋白免疫动物获得的多克隆抗体；以及与之连接的可检测标记物；其中所述VP1蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；
4.权利要求1或2所述的单克隆抗体，或权利要求3所述的检测抗体的用途，用于制备特异性地识别或检测猪萨佩罗病毒VP1蛋白或猪萨佩罗病毒的检测试剂或试剂盒。
5.一种用于特异性识别或检测猪萨佩罗病毒VP1蛋白和/或猪萨佩罗病毒的检测试剂，其包括：权利要求1或2所述的单克隆抗体，和/或权利要求3所述的检测抗体；
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