【技术实现步骤摘要】
本专利技术大体涉及发育生物学，具体而言，涉及一种嵌合胚胎的制备方法。
技术介绍
1、经过基因改造过的动物模型已成了现在医学研究的必不可少的工具和对象。经过半个世纪的不断发展，现在我们已能条件性地控制某些感兴趣的基因在某一器官的即时表达和关闭来研究蛋白的升降、有无对其它蛋白及整体影响。但有时我们需要同类细胞带有不同的基因，不同程度人源化基因的嵌合动物模型。
2、嵌合动物有多重应用场景，例如，从ips细胞(诱导性多能干细胞)或es细胞(胚胎干细胞)制备或供应器官原基或器官干细胞对于使用ips细胞等的再生医学的开发是必需的。对于将ips细胞或es细胞再生的人体器官或器官原基移植到人体，在猪或羊等异种特异性环境中诱导细胞形成目标器官的步骤被认为是有效的。然而，由于器官原基或器官干细胞难以在体外制备，因此需要制备不同物种之间的嵌合胚胎，并从嵌合胚胎中收集器官原基或器官干细胞。为此，需要使用可在不同物种之间移植并保持形成嵌合体能力的高质量干细胞作为器官形成的起始细胞。
3、从ips细胞或es细胞制备嵌合动物一般被认为对保护、再生或维持稀有动物物种如濒危物种、伴侣哺乳动物如宠物动物、或商业动物是很有价值的。在这种情况下，需要使用可在同种或不同种之间移植并保持形成嵌合体能力的优质干细胞作为起始细胞。
4、又例如，如果能够在小鼠肺中一半的肺细胞是人的ace2，另一半的肺细胞是蝙蝠的ace2。这种动物模型对研究神经细胞的轴突生长引导发育，细胞和细胞之间的信号传递，病源微生物的感染的基理研究就可以提供了一个较为理想
5、传统嵌合动物一般用全能或多能性细胞注入植入前的不同发育阶段的胚胎中获取，也可以通过es细胞和去透明带八细胞卵聚合培养来达到，运用最多的是卵囊腔内es细胞注射。
6、在典型的案例中，可以通过显微注射将dna注射到小鼠受精卵中，然后移植到孕鼠的囊胚中，能发育成转基因的嵌合体，后代可以得到转基因的动物，通过这种方法可以将目的基因快速导入小鼠体内。利用这种方法可以快速将通过crispr/cas9等系统编辑过的细胞整合到小鼠基因组中，并产生嵌合体小鼠。
7、但是，因对嵌合体产生的原理不明确，现有方法产生的嵌合鼠都存在嵌合度不易控制，嵌合不均匀，被嵌合的细胞成板块分布的特点。
技术实现思路
1、本专利技术的第一目的在于提供一种嵌合胚胎的制备方法，包括：
2、a)将第一动物来源的第一全能干细胞与第二动物来源的第二全能干细胞在卵裂球分裂液中通过微型操作分离制备；
3、b)将培养后的所述第一干细胞和第二干细胞混合形成细胞团；
4、c)在卵裂球培养液中培养所述细胞团形成胚胎。
5、本专利技术的第二目的在于提供一种嵌合体动物的制备方法，包括：
6、将如上所述的嵌合胚胎移入假孕雌性动物体内，代孕分娩。
7、本方法是一个全新首创方法，第一次成功证明了，从不同基因背景动物来源的全能干细胞，可以被成功分离并通过共同培养能融合发育成嵌合个体，且能够实现嵌合细胞的均匀分布。
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1.嵌合胚胎的制备方法，包括：
2.根据权利要求1所述的嵌合胚胎的制备方法，所述第一动物和/或所述第二动物为哺乳动物。
3.根据权利要求1所述的嵌合胚胎的制备方法，所述第一动物和所述第二动物为同属动物。
4.根据权利要求3所述的嵌合胚胎的制备方法，所述第一动物和所述第二动物为同种动物。
5.根据权利要求1～4任一项所述的嵌合胚胎的制备方法，所述第一动物和所述第二动物各自独立地选自大鼠、小鼠、兔、狗、猫、马、牛、山羊、绵羊、猪、猴和大熊猫。
6.根据权利要求1～5任一项所述的嵌合胚胎的制备方法，所述第一全能干细胞和所述第二全能干细胞独立地选自诱导全功能干细胞或全能胚胎干细胞。
7.根据权利要求6所述的嵌合胚胎的制备方法，步骤b)中，每个细胞团中所述第一全能干细胞和所述第二全能干细胞的数量相同。
8.根据权利要求7所述的嵌合胚胎的制备方法，步骤a)具体包括：对第一动物和第二动物的受精卵分别进行培养至二细胞期或直接从输卵管获取二细胞期卵，在卵裂球分裂液中从两个受精卵中各取得一个胚胎干细胞得到第一全能干细
9.根据权利要求1～4、7、8任一项所述的嵌合胚胎的制备方法，其中所述第一全能干细胞和/或第二全能干细胞经过基因编辑处理。
10.根据权利要求9所述的嵌合胚胎的制备方法，所述基因编辑方法基于以下任一种技术或其组合：
11.根据权利要求1～4、7、8任一项所述的嵌合胚胎的制备方法，所述第一动物与所述第二动物具有易于区分的表型。
12.根据权利要求11所述的嵌合胚胎的制备方法，所述第一动物与所述第二动物毛色不同或拥有不同标记，如荧光标记。
13.根据权利要求1～4、7、8、12任一项所述的嵌合胚胎的制备方法，所述卵裂球分裂液包含丙酮酸钠0.1mM～0.3mM、葡萄糖0.2mM～0.4mM、乳酸钠8mM～12mM；优选还包含0.4w/w％～0.6w/w％的BSA和0.8w/w％～1.0w/w％的NaCl。
14.根据权利要求1～4、7、8、12任一项所述的嵌合胚胎的制备方法，所述卵裂培养液为KSON培养液。
15.嵌合体动物的制备方法，包括：
16.根据权利要求15所述的制备方法，所述雌性动物与所述第一动物或所述第二动物为同种动物。
...【技术特征摘要】
1.嵌合胚胎的制备方法，包括：
2.根据权利要求1所述的嵌合胚胎的制备方法，所述第一动物和/或所述第二动物为哺乳动物。
3.根据权利要求1所述的嵌合胚胎的制备方法，所述第一动物和所述第二动物为同属动物。
4.根据权利要求3所述的嵌合胚胎的制备方法，所述第一动物和所述第二动物为同种动物。
5.根据权利要求1～4任一项所述的嵌合胚胎的制备方法，所述第一动物和所述第二动物各自独立地选自大鼠、小鼠、兔、狗、猫、马、牛、山羊、绵羊、猪、猴和大熊猫。
6.根据权利要求1～5任一项所述的嵌合胚胎的制备方法，所述第一全能干细胞和所述第二全能干细胞独立地选自诱导全功能干细胞或全能胚胎干细胞。
7.根据权利要求6所述的嵌合胚胎的制备方法，步骤b)中，每个细胞团中所述第一全能干细胞和所述第二全能干细胞的数量相同。
8.根据权利要求7所述的嵌合胚胎的制备方法，步骤a)具体包括：对第一动物和第二动物的受精卵分别进行培养至二细胞期或直接从输卵管获取二细胞期卵，在卵裂球分裂液中从两个受精卵中各取得一个胚胎干细胞得到第一全能干细胞和第二全能干细胞；优选采用酸性台氏液(acidified tyrode′ssolut...
【专利技术属性】
技术研发人员：竺勤章，
申请(专利权)人：昆山鸣谦微生物研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：
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