【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体为一株应用于耐药性弧菌的溶藻弧菌噬菌体及其脂质体包被制剂的应用。
技术介绍
1、副溶血弧菌、溶藻弧菌、哈维氏弧菌和坎氏弧菌等不仅是水产养殖危害极大的致病菌，也是人类食源性的致病菌来源。弧菌能引起海参腐皮综合症、对虾肠炎、鱼类败血症、人类腹泻等疾病，其中能引起对虾急性肝胰腺坏死(ahpnd)的副溶血弧菌、引起虾体玻璃化疾病(hlvd)的高致病性弧菌均对水产养殖造成了不可估量的损失。
2、2023年以来，有学者对中国海域抗生素残留进行监测，中国海域的土霉素、恩诺沙星和脱水红霉素含量超标，特别是在闽南一带，其土霉素含量已经远远超越国家标准限值，后期均有学者报道了中国海域弧菌的耐药问题，现目前弧菌耐药性已经非常严峻。噬菌体是一种“吃”细菌的纳米级微生物，与抗生素相比，噬菌体的突出优势在于：(1)可以在细菌感染部位自我复制增殖，靶向杀灭致病菌；(2)其具有种属特异性，专一性裂解目标菌，不会引起机体微生态失衡；(3)噬菌体在自然界和动物体中广泛存在，无毒副作用、无残留；(4)噬菌体制剂的研制时间和成本远远低于新型抗生素药物的研发周期和成本，噬菌体是最有潜力的抗生素替代品之一。
3、脂质体包被技术是由脂质双层包围的球形纳米颗粒，具有高度生物相容性，是一种定向药物载体。利用脂质体包被物质方法，又称为“特洛伊木马”法，该方法可以提高噬菌体的抗逆性，延长其储存期，改变被包被噬菌体在动物体内的分布。由于阳离子脂质体与带负电荷细菌的相互作用，脂质体包裹的噬菌体可以黏附并扩散到含有致病菌的病灶部位或者黏膜内
技术实现思路
1、为了预防由耐药性弧菌引起的疾病或养殖问题，降低由该问题引起的患病率，本专利技术目的之一是提供一株针对防治耐药性溶藻弧菌、副溶血弧菌、哈维氏弧菌和坎氏弧菌的多价性溶藻弧菌噬菌体vap2312001。
2、本专利技术的目的之二在于提供了溶藻弧菌噬菌体vap2312001脂质体包被工艺方案上提供具有重要价值的参数及其应用，提高噬菌体包封率。
3、本专利技术的目的之三在于提供了溶藻弧菌噬菌体vap2312001脂质体有效提高噬菌体对温度、ph值的耐受性。
4、本专利技术的目的之四在于提供了溶藻弧菌噬菌体vap2312001在制备治疗或预防溶藻弧菌感染引起的疾病的药物中的应用。
5、为了实现上述目的，本专利技术是通过如下的技术方案来实现：一株应用于耐药性弧菌的溶藻弧菌噬菌体，该噬菌体的分类命名为溶藻弧菌噬菌体vap2312001，申请人自福建漳州某养殖场水体中分离出一株溶藻弧菌噬菌体vap2312001，该噬菌体已于2024年3月6日送至中国典型培养物保藏中心保藏，保藏地址为：中国武汉武汉大学；保藏编号为cctccno：m 2024391。
6、进一步的，还包括溶藻弧菌噬菌体vap2312001的复配物，包括但不限于与其它噬菌体、其它益生菌进行复配。
7、进一步的，应用于环境消毒、畜牧养殖、家禽养殖、水产养殖和生物医疗等行业中，进行制备弧菌的防治应用。
8、进一步的，还应用于制备治疗或预防弧菌感染引起的疾病的药物。
9、进一步的，还应用于制备防治弧菌的饲料或饲料添加剂。
10、进一步的，所述弧菌包括但不限于耐药性溶藻弧菌、副溶血弧菌、哈维氏弧菌和坎氏弧菌。
11、一种如上述噬菌体acp2401001的脂质体包被制剂的应用，噬菌体acp2401001的脂质体包被制剂的成分包括大豆卵磷脂、胆固醇、十二烷基二亚甲基氨基二甲酸钠和海藻酸钠。
12、进一步的，用于提高噬菌体包封率，提高噬菌体对温度、ph值的耐受性。
13、进一步的，脂质体制剂有效提高噬菌体在动物上的治疗效果。
14、本专利技术的有益效果：
15、1.该噬菌体vap2312001对耐药性溶藻弧菌、副溶血弧菌、哈维氏弧菌和坎氏弧菌具有裂解性，该株噬菌体vap2312001在对不同弧菌的抑制作用卓有成效，对今后弧菌的防控及治疗具有重大参考意义；噬菌体vap2312001具有高发酵率，在温度为30℃、最佳感染复数moi＝0.1时，发酵5h，效价可达3.3×1012pfu/ml；在工业发酵过程中，试验发酵至5h时，发酵效价可达4.1×1012pfu/ml。
16、2.该溶藻弧菌噬菌体vap2312001具有良好的环境耐受性，溶藻弧菌噬菌体vap2312001在ph为4-11范围内处理6h其效价无明显数量级变化；经脂质体包被后vap2312001在ph为3-12范围内处理6h其效价无明显数量级变化，经过脂质体包被后能有效提升噬菌体对温度的耐受性。
17、3.该藻弧菌噬菌体vap2312001在4℃条件下噬菌体效价在16w后效价无明显数量级差异，在25℃条件下噬菌体效价在12w后效价无明显数量级差异，37℃条件下噬菌体效价在2w后效价无明显数量级差异；经脂质体包被后vap2312001在4℃内处理16w其效价无明显数量级变化，在25℃内处理16w其效价无明显数量级变化，37℃条件下噬菌体效价在4w后效价无明显数量级差异；在4-37℃具有良好的稳定性，可有效保存。
18、4.该溶藻弧菌噬菌体vap2312001能对多种耐药性弧菌(副溶血弧菌、溶藻弧菌、哈维氏弧菌和坎氏弧菌)具有裂解性，噬菌体vap2312001能全部裂解10株耐药性副溶血弧菌中的7株、10株耐药性溶藻弧菌中的9株、10株耐药性哈维氏弧菌中的8株和、10株耐药性坎氏弧菌中6株；实验结果证实噬菌体vap2312001在应对耐药性弧菌中的一种多或多种的裂解性有非常突出的效果，对今后的耐药性弧菌的靶向防控及治疗具有重大价值。
19、5.该溶藻弧菌噬菌体vap2312001可有效治疗由耐药性溶藻弧菌引发的小鼠肠炎问题，预防及治疗组均有效提高了小鼠的存活率，空白组存活率为100％，攻毒组小鼠存活率为10％；噬菌体脂质体包被治疗组存活率为90％，普通噬菌体治疗组存活率为70％，恩诺沙星组80％。对今后溶藻弧菌的预防和治疗提供了重要参考价值，可以作为一种生物抗菌剂应用于小鼠及其它动物的溶藻弧菌疾病的预防和治疗。
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1.一株应用于耐药性弧菌的溶藻弧菌噬菌体，其特征在于：该噬菌体的分类命名为溶藻弧菌噬菌体VAP2312001，申请人自福建漳州某养殖场水体中分离出一株溶藻弧菌噬菌体VAP2312001，该噬菌体已于2024年3月6日送至中国典型培养物保藏中心保藏，保藏地址为：中国武汉武汉大学；保藏编号为CCTCC NO：M 2024391。
2.根据权利要求1所述的噬菌体，其特征在于：还包括溶藻弧菌噬菌体VAP2312001的复配物，包括但不限于与其它噬菌体、其它益生菌进行复配。
3.根据权利要求2所述的噬菌体或噬菌体VAP2312001复配物的应用，其特征在于：应用于环境消毒、畜牧养殖、家禽养殖、水产养殖和生物医疗等行业中，进行制备弧菌的防治应用。
4.根据权利要求2所述的噬菌体或噬菌体VAP2312001复配物的应用，其特征在于：还应用于制备治疗或预防弧菌感染引起的疾病的药物。
5.根据权利要求2所述的噬菌体或噬菌体VAP2312001复配物的应用，其特征在于：还应用于制备防治弧菌的饲料或饲料添加剂。
6.根据权利要求2所述的噬菌体
7.一种如权利要求1所述噬菌体ACP2401001的脂质体包被制剂的应用，其特征在于：噬菌体ACP2401001的脂质体包被制剂的成分包括大豆卵磷脂、胆固醇、十二烷基二亚甲基氨基二甲酸钠和海藻酸钠。
8.根据权利要求7所述的脂质体包被制剂的应用，其特征在于：用于提高溶藻弧菌噬菌体包封率、提高噬菌体对温度、pH值的耐受性。
9.根据权利要求7所述的脂质体包被制剂的应用，其特征在于：用于提高溶藻弧菌噬菌体在动物治疗上的效果。
...【技术特征摘要】
1.一株应用于耐药性弧菌的溶藻弧菌噬菌体，其特征在于：该噬菌体的分类命名为溶藻弧菌噬菌体vap2312001，申请人自福建漳州某养殖场水体中分离出一株溶藻弧菌噬菌体vap2312001，该噬菌体已于2024年3月6日送至中国典型培养物保藏中心保藏，保藏地址为：中国武汉武汉大学；保藏编号为cctcc no：m 2024391。
2.根据权利要求1所述的噬菌体，其特征在于：还包括溶藻弧菌噬菌体vap2312001的复配物，包括但不限于与其它噬菌体、其它益生菌进行复配。
3.根据权利要求2所述的噬菌体或噬菌体vap2312001复配物的应用，其特征在于：应用于环境消毒、畜牧养殖、家禽养殖、水产养殖和生物医疗等行业中，进行制备弧菌的防治应用。
4.根据权利要求2所述的噬菌体或噬菌体vap2312001复配物的应用，其特征在于：还应用于制备治疗或预防弧菌...
【专利技术属性】
技术研发人员：王喜亮，田甲，黄金梅，张圣海，万远，张晓东，
申请(专利权)人：武汉格瑞农生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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