【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于细胞生物学、分子生物学及药物研发，尤其是涉及一种促进毛发再生的工程化纳米囊泡及其制备方法与应用。
技术介绍
1、毛发生长是一个连续的循环过程，包括四个阶段：生长(生长期)、消退(退行期)、休止(休止期)和脱落(外生期)。脱发是由毛囊阶段的改变引起的，毛囊在其宿主的整个生命周期中，进行有节奏地、自发地、周期性的器官转化。毛囊在相对“静止”状态(休止期)之间循环。许多外源的、系统的、神经的、内分泌的和营养的因素都会影响毛囊的这些循环转化，导致脱发的出现。雄激素性脱发是最常见的脱发形式，雄激素脱发患者的毛囊周期在静止期(休止期)延长，在活跃期(生长期)缩短。目前主要的治疗方式为米诺地尔和非那雄胺，但这些药物的副作用限制了使用的长期性。米诺地尔可引起刺激性皮炎和短暂性面部多毛，非那雄胺可引起性功能障碍、不孕症等不良反应。因此，寻找能够促进头发生长的新替代品仍然是当务之急。
2、许多研究表明，毛囊再生与损伤修复受多组信号通路的调控，如经典的wnt/β-catenin信号通路，tgf-β/smad信号通路，hippo信号通路以及pi3k-akt信号通路。研究证实雄激素脱发患者的毛囊细胞中可显著观察到β-catenin表达减少和gsk-3β活性上调。最近研究证实gsk-3β抑制剂可以抑制毛乳头干细胞中的gsk-3β的活性，提升β-catenin的表达及稳定性，从而进一步的上调人毛乳头干细胞的毛发生长标志蛋白的活性和表达。
3、在tgf-β信号通路中，雄激素脱发患者体内双氢睾酮(dht)处于较高水平，dht
4、hippo信号通路是一条抑制细胞生长的通路。受到胞外生长抑制信号影响后，激活一系列激酶级联磷酸化反应，最终磷酸化下游效应因子yes相关蛋白1(yap)和tafazzin蛋白(taz)，降低因子的细胞核活性，从而实现对器官大小和体积的调控。一项研究指出yap的释放使机体显示出更强的伤口修复能力和新生毛囊形成能力。yap磷酸化主要受到大肿瘤抑制基因1(lats1)的调控，研究证实lats1的高表达会导致yap的磷酸化水平增加，进而导致会导致毛囊干细胞耗竭和脱发。这提示了针对脱发疾病中的毛囊修复可以采用小rna干扰技术对靶向基因进行抑制，进而达到促进毛发再生的作用。
5、与小分子和蛋白质药物不同的是，rna分子必须在胞内才能发挥作用。
6、目前用于rna递送的非病毒载体可分类四类：基于脂质的纳米粒、聚合物纳米粒、无机纳米粒和仿生纳米粒，但因为在体内的毒性和有效性，大部分研究都仅停留在临床前的研究阶段。
技术实现思路
1、为了克服纳米颗粒获得技术存在的缺陷，本专利技术提供一种促进毛发再生的工程化纳米囊泡及其制备方法与应用。
2、本专利技术的目的可以通过以下技术方案来实现：
3、本专利技术第一方面：
4、提供一种促进毛发再生的工程化纳米囊泡，所述促进毛发再生的工程化纳米囊泡，以人诱导多能干细胞(human induced pluripotent stem cells,hipscs)来源的挤压囊泡(human induced pluripotent stem cells-small nanovesicles,hipsc-snvs)为载体，且所述挤压囊泡负载有sigroup，所述sigroup包括sitgf-β1、silats1和sisfrp1，
5、所述sitgf-β1的核苷酸序列为：
6、5’-cgacaagttgaacgcatattgcaca-3’；
7、所述silats1的核苷酸序列为：
8、5’-catgaacactttcgctgtaagtaaa-3’；
9、所述sisfrp1的核苷酸序列为：
10、5’-tcaagagacaaacacttcgagtgaa-3’。
11、本专利技术中，所述促进毛发再生的工程化纳米囊泡即为负载有sitgf-β1、silats1和sisfrp1的hipsc-snvs，简称为hipsc-snvs/sigroup，可促进毛发再生。
12、在本专利技术的一个实施方式中，所述挤压囊泡为将人诱导多能干细胞(humaninduced pluripotent stem cells,hipscs)通过机械挤压形成的均一囊泡，也称之为人诱导多能干细胞snvs或hipsc-snvs。
13、在本专利技术的一个实施方式中，所述促进毛发再生的工程化纳米囊泡的平均粒径为30-150nm，优选为80-120nm。
14、在本专利技术的一个实施方式中，所述挤压囊泡为将人诱导多能干细胞(humaninduced pluripotent stem cells,hipscs)通过机械挤压形成的均一囊泡，也称之为人诱导多能干细胞snvs或hipsc-snvs。
15、在本专利技术的一个实施方式中，促进毛发再生的工程化纳米囊泡以悬浮剂的形式存在，且hipsc-snvs的浓度范围为1×108/ml–1×1012/ml，优选为1×1010/ml。
16、在本专利技术的一个实施方式中，促进毛发再生的工程化纳米囊泡以悬浮剂的形式存在，且sigroup的浓度为100nm。
17、本专利技术的第二方面：
18、提供一种促进毛发再生的工程化纳米囊泡的制备方法，包括以下步骤：
19、s1、采用无饲养层培养方法，在无血清培养体系培养hipscs，收集hipscs；
20、s2、用脂质体挤压器，将hipscs依次通过5μm、1μm、400nm、200nm、100nm孔径的聚碳酸酯滤膜，获得粗制混悬液；
21、s3、粗制混悬液采用梯度离心结合切向流的方法收集纯化挤压囊泡，获得hipsc-snvs；
22、s4、将步骤s3获得的hipsc-snvs与sigroup进行孵育获得hipsc-snvs/sigroup，即为促进毛发再生的工程化纳米囊泡，所述sigroup包括sitgf-β1、silats1和sisfrp1。
23、在本专利技术的一个实施方式中，步骤s1中，以商品化人诱导多能干细胞(rc01001-a)，采用无饲养层培养方法，在无血清培养体系培养hipscs后收集细胞。
24、在本专利技术的一个实施方式中，步骤s1中，无血清培养体系选择市售的型号为rp01020或rp01001的培养基。
25、在本专利技术的一个实施方式中，步骤s1中，培养hipscs后，将人诱导多能干细胞进本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种促进毛发再生的工程化纳米囊泡，其特征在于，所述促进毛发再生的工程化纳米囊泡，以人诱导多能干细胞来源的挤压囊泡为载体，且所述挤压囊泡负载有siGroup，所述siGroup包括siTGF-β1、siLats1和siSFRP1，
2.根据权利要求1所述的一种促进毛发再生的工程化纳米囊泡，其特征在于，所述促进毛发再生的工程化纳米囊泡的平均粒径为30-150nm，优选为80-120nm。
3.权利要求1或2所述的一种促进毛发再生的工程化纳米囊泡的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的一种促进毛发再生的工程化纳米囊泡的制备方法，其特征在于，步骤S1中，无血清培养体系选择市售的型号为RP01020或RP01001的培养基；
5.根据权利要求3所述的一种促进毛发再生的工程化纳米囊泡的制备方法，其特征在于，步骤S3中，采用梯度离心结合切向流的方法收集纯化挤压囊泡，主要步骤是：
6.根据权利要求5所述的一种促进毛发再生的工程化纳米囊泡的制备方法，其特征在于，用切向流过滤设备进行纯化与浓缩具体操作工艺为：流速
7.根据权利要求3所述的一种促进毛发再生的工程化纳米囊泡的制备方法，其特征在于，步骤S4中，孵育处理，按以下方法进行：
8.基于权利要求1所述促进毛发再生的工程化纳米囊泡的制剂，其特征在于，所述制剂为悬浮剂：将所述促进毛发再生的工程化纳米囊泡溶于溶剂中，以悬浮剂的形式存在；
9.权利要求1所述促进毛发再生的工程化纳米囊泡的应用，其特征在于，所述促进毛发再生的工程化纳米囊泡在制备治疗和/预防脱发的药物中的应用。
10.根据权利要求9所述促进毛发再生的工程化纳米囊泡的应用，其特征在于，所述促进毛发再生的工程化纳米囊泡在制备脱发疾病中毛囊修复的药物中的应用；或，
...【技术特征摘要】
1.一种促进毛发再生的工程化纳米囊泡，其特征在于，所述促进毛发再生的工程化纳米囊泡，以人诱导多能干细胞来源的挤压囊泡为载体，且所述挤压囊泡负载有sigroup，所述sigroup包括sitgf-β1、silats1和sisfrp1，
2.根据权利要求1所述的一种促进毛发再生的工程化纳米囊泡，其特征在于，所述促进毛发再生的工程化纳米囊泡的平均粒径为30-150nm，优选为80-120nm。
3.权利要求1或2所述的一种促进毛发再生的工程化纳米囊泡的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的一种促进毛发再生的工程化纳米囊泡的制备方法，其特征在于，步骤s1中，无血清培养体系选择市售的型号为rp01020或rp01001的培养基；
5.根据权利要求3所述的一种促进毛发再生的工程化纳米囊泡的制备方法，其特征在于，步骤s3中，采用梯度离心结合切向流的方法收集纯化挤...
【专利技术属性】
技术研发人员：于树祥，汪泱，
申请(专利权)人：上海泌靓生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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