【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医学，具体地涉及一种壳多糖酶3样蛋白1检测试剂盒及其应用。
技术介绍
1、壳多糖酶-3样蛋白1是由chi3l1基因编码的糖基化蛋白质，是一种广泛存在于哺乳动物的组织和体液中分泌型糖蛋白，含有383个氨基酸，且三个n端氨基酸残基分别表达络氨酸(y)、赖氨酸(k)和亮氨酸(l)序列，相对分子质量约为40kda，故该蛋白又命名为ykl-40, 血清壳多糖酶3样蛋白1 (chi3l1)参与各种病因引起的肝脏纤维化，且与患者病情严重程度呈正相关，包括病毒性肝病、酒精性肝病、代谢相关性肝脂肪性肝病等。临床上测定壳多糖酶3样蛋白1含量主要用于肝纤维化的辅助诊断。
2、目前，临床上测定chi3l1的方法主要有胶乳免疫比浊法、化学发光法和胶体金法等。化学发光法虽然灵敏度高、特异性好，但是其容易由于样本处理不当或试剂稳定性问题而出现假阴性的结果。胶体金法虽然简单、快捷、直观，但是其也容易因为样本的复杂性、试剂的稳定性而影响其灵敏度和特异性。胶乳免疫比浊法也作为一种常用的生化指标定量分析方法，虽然具有高灵敏度和特异性、操作简便、可重复性公安等特点，但是其同样受样本的复杂性、试剂的稳定性的影响。因此，开发一种准确、高效、稳定且成本低的壳多糖酶-3样蛋白1的检测试剂盒很有必要。
技术实现思路
1、针对
技术介绍
提到的上述不足，本专利技术的目的在于提供一种壳多糖酶3样蛋白1检测试剂盒及其应用。该壳多糖酶3样蛋白1检测试剂盒线性好，灵敏度高，重复性好，且无论在封闭还是开瓶状态下稳定性
2、为了实现上述目的，本专利技术提供一种壳多糖酶3样蛋白1检测试剂盒，包括试剂a和试剂b，所述试剂a包括三羟甲基氨基甲烷缓冲液、聚乙二醇8000；
3、所述试剂b包括hepes缓冲液（主要成分是羟乙基哌嗪乙硫磺酸）、偶联壳多糖酶3样蛋白1抗体的胶乳颗粒；
4、使用时，所述试剂a与所述试剂b的体积比为2.5-3.5:1，优选为3:1。
5、本技术方案中采用壳多糖酶3样蛋白1致敏的胶乳颗粒，在检测时其与待测样品中壳多糖酶3样蛋白1在液相中相遇，立即形成不溶性抗原-抗体复合物，并产生一定浊度。而浊度高低直接反映了样品中壳多糖酶3样蛋白1的含量，通过与同样处理的校准品比较，即可计算出样品中壳多糖酶3样蛋白1含量，该方法成本低，检测灵敏度高，检测速度快，准确率高。
6、进一步地，上述技术方案中，还包括校准品，所述校准品为人工提取的壳多糖酶3样蛋白1形成重组蛋白与磷酸盐缓冲液基质的混合液，且壳多糖酶3样蛋白1的浓度＞1000ug/l。
7、进一步地，上述技术方案中，还包括质控品，所述质控品为人工提取的壳多糖酶3样蛋白1形成重组蛋白与磷酸盐缓冲液基质的混合液，且壳多糖酶3样蛋白1的浓度＞1000ug/l。
8、进一步地，上述技术方案中，所述三羟甲基氨基甲烷缓冲液的浓度为8-12mmol/l，所述聚乙二醇8000的浓度为15-25g/l；所述hepes缓冲液的浓度为18-22mmol/l。具体地，所述三羟甲基氨基甲烷缓冲液的浓度优选为10mmol/l，所述聚乙二醇8000的浓度为20g/l；所述hepes缓冲液的浓度为20mmol/l。本技术方案中试剂a以三羟甲基氨基甲烷缓冲液和聚乙二醇为成分，充分利用三羟甲基氨基甲烷缓冲液具有调节、稳定溶液ph，提高导电率，以及具有保护dna和蛋白质的特性，提高检测的准确性和可靠性，缩短检查时间；利用聚乙二醇8000能提高试剂稳定性，防止试剂在存储和使用过程中发生降解或变质，能作为增溶剂提高物质的溶解度，可以降低非特异性结合，减少背景干扰等，提高检测结果的准确性、可靠性、灵敏性和特异性等。hepes缓冲液一方面在一定范围内稳定维持溶液的ph，避免核算降解或污染，另一方面能抑制核酸酶的活性，保持样本的完整性和稳定性。
9、进一步地，上述技术方案中，所述偶联壳多糖酶3样蛋白1抗体的胶乳颗粒占所述试剂b总重量的4.5-5.5%，粒径为100-400nm。
10、进一步地，上述技术方案中，所述偶联壳多糖酶3样蛋白1抗体的胶乳颗粒的制备方法为：
11、（1）将乳胶微球加入到偶联缓冲液中，超声混匀，离心去除上清液，然后将沉淀再次超声重悬于偶联缓冲液中；
12、（2）往步骤（1）所得乳胶微球混合液中加入新鲜配制的nhs（n-羟基琥珀酰亚胺）溶液和edc（1-[3-二甲氨基丙基]-3-乙基碳二亚胺盐酸盐）溶液，混合均匀，然后加入壳多糖酶3样蛋白1抗体溶液，混合均匀后，置于混合器上室温旋转孵育2-3h；
13、（3）将步骤（2）所得溶液进行离心，并去除上清液，加入封闭液进行封闭，室温孵育0.5-1.5h；
14、（4）将步骤（3）所得产物用tris溶液重复洗涤2-3次，然后重悬于tris溶液中，4℃保存，得到偶联壳多糖酶3样蛋白1抗体的胶乳颗粒。
15、进一步地，上述技术方案步骤（1）中，所述偶联缓冲液为ems，浓度为50mm，ph为6.5；离心转速为15000-20000rpm，时间为15-30min。
16、进一步地，上述技术方案步骤（2）中，nhs溶液和edc溶液的浓度均为10mg/ml；步骤（3）中，所述封闭液为浓度为2%的bsa与100mm乙醇胺溶液溶液的混合物，ph为8.0。
17、进一步地，上述技术方案中，所述乳胶微球与偶联壳多糖酶3样蛋白1抗体的质量比为10-10.5:1。
18、本专利技术还提供一种壳多糖酶3样蛋白1检测试剂盒在制备诊断或辅助诊断肝纤维化产品中的应用。
19、与现有技术相比，本专利技术的有益效果：
20、本专利技术采用偶联壳多糖酶3样蛋白1致敏的胶乳颗粒，在检测时其与待测样品中壳多糖酶3样蛋白1在液相中相遇，立即形成不溶性抗原-抗体复合物，并产生一定浊度。而浊度高低直接反映了样品中壳多糖酶3样蛋白1的含量，通过与同样处理的校准品比较，即可计算出样品中壳多糖酶3样蛋白1含量，该方法成本低，检测灵敏度高，检测速度快，准确率高。
21、本专利技术试剂盒所用试剂成分简单，稳定性好，将壳多糖酶3样蛋白1抗体与胶乳颗粒预先制备成偶联壳多糖酶3样蛋白1抗体的胶乳颗粒，胶乳颗粒被特异地设计为能够与壳多糖酶3样蛋白1结合，当这些颗粒与样本中的壳多糖酶3样蛋白1接触时，它们会发生特异性结合并导致颗粒凝聚，通过测量这种凝聚反应的程度，可以准确地确定样本中壳多糖酶3样蛋白1的浓度，这种方法快速、简便、易于自动化，可为临床上制备诊断或辅助诊断肝纤维化产品提供依据。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种壳多糖酶3样蛋白1检测试剂盒，其特征在于，包括试剂A和试剂B，所述试剂A包括三羟甲基氨基甲烷缓冲液、聚乙二醇8000；
2.根据权利要求1所述的一种壳多糖酶3样蛋白1检测试剂盒，其特征在于，还包括校准品，所述校准品为人工提取的壳多糖酶3样蛋白1形成重组蛋白与磷酸盐缓冲液基质的混合液，且壳多糖酶3样蛋白1的浓度＞1000ug/L。
3.根据权利要求1所述的一种壳多糖酶3样蛋白1检测试剂盒，其特征在于，还包括质控品，所述质控品为人工提取的壳多糖酶3样蛋白1形成重组蛋白与磷酸盐缓冲液基质的混合液，且壳多糖酶3样蛋白1的浓度＞1000ug/L。
4.根据权利要求1所述的一种壳多糖酶3样蛋白1检测试剂盒，其特征在于，所述三羟甲基氨基甲烷缓冲液的浓度为8-12mmol/L，所述聚乙二醇8000的浓度为15-25g/L；所述HEPES缓冲液的浓度为18-22mmol/L。
5.根据权利要求1所述的一种壳多糖酶3样蛋白1检测试剂盒，其特征在于，所述偶联壳多糖酶3样蛋白1抗体的胶乳颗粒占所述试剂B总重量的4.5-5.5%，粒径为100-400
6.根据权利要求1所述的一种壳多糖酶3样蛋白1检测试剂盒，其特征在于，所述偶联壳多糖酶3样蛋白1抗体的胶乳颗粒的制备方法为：
7.根据权利要求6所述的一种壳多糖酶3样蛋白1检测试剂盒，其特征在于，步骤（1）中，所述偶联缓冲液为EMS，浓度为50mM，pH为6.5；离心转速为15000-20000rpm，时间为15-30min。
8.根据权利要求6所述的一种壳多糖酶3样蛋白1检测试剂盒，其特征在于，步骤（2）中，NHS溶液和EDC溶液的浓度均为10mg/mL；步骤（3）中，所述封闭液为浓度为2%的BSA与100mM乙醇胺溶液溶液的混合物，pH为8.0。
9.根据权利要求6所述的一种壳多糖酶3样蛋白1检测试剂盒，其特征在于，所述乳胶微球与偶联壳多糖酶3样蛋白1抗体的质量比为10-10.5:1。
10.如权利要求1-9任一项所述的一种壳多糖酶3样蛋白1检测试剂盒在制备诊断或辅助诊断肝纤维化产品中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种壳多糖酶3样蛋白1检测试剂盒，其特征在于，包括试剂a和试剂b，所述试剂a包括三羟甲基氨基甲烷缓冲液、聚乙二醇8000；
2.根据权利要求1所述的一种壳多糖酶3样蛋白1检测试剂盒，其特征在于，还包括校准品，所述校准品为人工提取的壳多糖酶3样蛋白1形成重组蛋白与磷酸盐缓冲液基质的混合液，且壳多糖酶3样蛋白1的浓度＞1000ug/l。
3.根据权利要求1所述的一种壳多糖酶3样蛋白1检测试剂盒，其特征在于，还包括质控品，所述质控品为人工提取的壳多糖酶3样蛋白1形成重组蛋白与磷酸盐缓冲液基质的混合液，且壳多糖酶3样蛋白1的浓度＞1000ug/l。
4.根据权利要求1所述的一种壳多糖酶3样蛋白1检测试剂盒，其特征在于，所述三羟甲基氨基甲烷缓冲液的浓度为8-12mmol/l，所述聚乙二醇8000的浓度为15-25g/l；所述hepes缓冲液的浓度为18-22mmol/l。
5.根据权利要求1所述的一种壳多糖酶3样蛋白1检测试剂盒，其特征在于，所述偶联壳多糖酶3样蛋白1抗体的胶乳颗粒...
【专利技术属性】
技术研发人员：蔡其浩，毛勇，刘如石，刘芸，周喜新，唐本义，马庆伟，
申请(专利权)人：江西英大生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。