【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于糖基化肽段富集应用，具体涉及一种二维共价有机骨架纳米片及其制备方法和应用。
技术介绍
1、共价有机骨架材料(covalentorganic frameworks,cofs)是一类多孔材料，其具有一些独特的性质，例如超高的比表面积且孔容大，孔表面容易功能化改性等特点，因此常被用于气体吸附于分离、催化、能量存储和二氧化碳捕获。二维cofs纳米片是目前研究的热点，而它们的应用却主要集中在能量存储、膜分离和传感等方面。二维cofs纳米片的主要优点包括形态良好的二维片层结构，大的活性表面积和良好的分散性，因此其具有可被用于富集糖基化肽段(简称糖肽段)的潜在可能性。
2、蛋白糖基化参与着许多细胞反应过程，其在调控蛋白活性和功能方面发挥着重要作用。基于质谱(mass spectrometry,ms)的蛋白质组学是一种有效的检测糖基化蛋白/糖肽段的手段。但是，糖肽段的浓度很低(低于1×10-9m)，因此从复杂生物样品中检测糖肽段面临着巨大的挑战。另外检测糖肽段的灵敏度经常受到低的电离效率、高丰度的其他肽段的干扰以及直接ms分析时糖肽段的信号被抑制等问题。考虑到蛋白糖基化在调控蛋白活性和功能方面的重要作用，关于在蛋白质组研究中实现对糖肽段的高效富集的研究吸引了越来越多的关注。
3、截至目前，各种各样的方法技术和材料被用于选择性富集糖肽段，包括肼化学法，凝集素亲和色谱法，硼酸亲和色谱法和亲水作用色谱法。在上述几种方法中，hilic法由于其成本低、效率高、重复性好及操作简便已成为目前应用最广泛的糖肽段富集法。hi
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种二维共价有机骨架纳米片及其制备方法和应用，所述方法制得的二维cofs纳米片可用于富集样品中的糖基化肽段(简称糖肽段)，材料合成过程简易，纳米片产量高，富集方法简单，解决现有技术中商业化亲水材料富集效率低的缺点，并展现出强的抗干扰能力(酶解后的糖蛋白：非糖蛋白＝1：800，糖肽段浓度为2.5×10-6m)、高效的富集能力和极低的检测限(1×10-10m)，有利于推广使用。
2、为实现上述专利技术目的，本专利技术采用如下技术方案：
3、本专利技术提供了一种二维共价有机骨架纳米片的制备方法，所述方法包括以下步骤：将三聚氰胺和三聚氯氰溶解于溶剂二甲基亚砜中形成混合溶液，然后将混合溶液加热回流反应，反应结束后自然冷却降至室温，取出反应后的固体用二甲基亚砜和纯水洗涤，最后真空干燥，得到白色粉末状的二维共价有机骨架纳米片。其具有超薄的厚度，有序的纳米孔结构，溶解分散性好等优异特点。
4、优选的，将三聚氰胺和三聚氯氰溶解于溶剂二甲基亚砜中形成混合溶液，然后将混合溶液于120-150℃加热回流反应96h，反应结束后自然冷却降至室温，取出反应后的固体用二甲基亚砜和纯水洗涤分别洗涤3次，最后60℃真空干燥过夜，得到白色粉末状的二维共价有机骨架纳米片。
5、进一步优选，加热回流的温度为150℃。
6、优选的，所述三聚氰胺和三聚氯氰的摩尔比为1:1。
7、优选的，所述合成的二维共价有机骨架纳米片的厚度范围为30-70nm，且分散性好，有明显的丁达尔现象。
8、本专利技术提供了由上述方法制得的二维共价有机骨架纳米片。
9、本专利技术还提供了上述二维共价有机骨架纳米片在富集糖基化肽段中的应用。
10、本专利技术还提供了上述二维共价有机骨架纳米片在检测糖基化肽段中的应用。
11、优选的，上述二维共价有机骨架纳米片在富集糖基化肽段中的应用，其应用方法包括如下步骤：
12、(1)将所述二维共价有机骨架纳米片与富集溶液混合后超声分散均匀，得到悬浊液；
13、(2)将待分离的糖基化肽段样品加入到上述悬浊液中，涡旋进行富集，二维共价有机骨架纳米片表面丰富的亲水性基团与糖基化肽段中的亲水肽段通过亲水相互作用而结合；
14、(3)富集后离心，除去上清液，加入洗涤溶液，洗去非糖肽段；
15、(4)洗涤后加入洗提溶液，超声分散均匀，然后涡旋进行洗提，得到富集的糖基化肽段。
16、进一步优选，所述二维共价有机骨架纳米片与富集溶液的用量比为1.0mg：100μl。
17、优选的，所述富集溶液为乙腈、三氟乙酸和纯水配制而成的混合溶液，其中乙腈的体积浓度为90％-95％、三氟乙酸的体积浓度为0.1％-0.5％；所述洗涤溶液为乙腈、三氟乙酸和纯水配制而成的混合溶液，其中乙腈的体积浓度为90％-95％、三氟乙酸的体积浓度为0.1％-0.5％。
18、进一步优选，所述富集溶液为乙腈、三氟乙酸和纯水配制而成的混合溶液，其中乙腈的体积浓度为95％、三氟乙酸的体积浓度为0.1％；该富集溶液的比例使富集效果达到最优；所述洗涤溶液为乙腈、三氟乙酸和纯水配制而成的混合溶液，其中乙腈的体积浓度为95％、三氟乙酸的体积浓度为0.1％。
19、优选的，所述洗提溶液为乙腈、三氟乙酸和纯水配制而成的混合溶液，其中乙腈的体积浓度为30％-40％、三氟乙酸的体积浓度为0.1％-0.5％。
20、进一步优选，所述洗提溶液为乙腈、三氟乙酸和纯水配制而成的混合溶液，其中乙腈的体积浓度为30％、三氟乙酸的体积浓度为0.1％。
21、有益效果：与现有技术相比，本专利技术基于二维cofs纳米片来实现对糖肽段的特异性富集，二维cofs纳米片具有一些独特的优点，包括形态良好的二维片层形貌，较大的比表面积，较高的孔隙率，表面富含亲水结合的位点，易于分散等优异性质，从而达到高效富集糖肽段的效果。相比传统的商业化hilic法富集糖肽段的方法，本专利技术富集方法具有适用范围广、选择性好、抗干扰能力强、检测限低等优异性能，此方法为糖肽段的高效富集提供了新的手段，并且有望在未来的复杂生物样品蛋白质组的大规模分析研究中实现应用。
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1.一种二维共价有机骨架纳米片的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：将三聚氰胺和三聚氯氰溶解于溶剂二甲基亚砜中形成混合溶液，然后将混合溶液加热回流反应，反应结束后自然冷却降至室温，取出反应后的固体用二甲基亚砜和纯水洗涤，最后真空干燥，得到白色粉末状的二维共价有机骨架纳米片。
2.根据权利要求1所述二维共价有机骨架纳米片的制备方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：将三聚氰胺和三聚氯氰溶解于溶剂二甲基亚砜中形成混合溶液，然后将混合溶液于120-150℃加热回流反应96h，反应结束后自然冷却降至室温，取出反应后的固体用二甲基亚砜和纯水洗涤分别洗涤3次，最后60℃真空干燥过夜，得到白色粉末状的二维共价有机骨架纳米片。
3.根据权利要求1或2所述二维共价有机骨架纳米片的制备方法，其特征在于：所述三聚氰胺和三聚氯氰的摩尔比为1:1。
4.根据权利要求1或2所述二维共价有机骨架纳米片的制备方法，其特征在于：所述合成的二维共价有机骨架纳米片的厚度范围为30-70nm。
5.一种如权利要求1-4任一项所述方法制得的二维共价有机骨架纳米片。<...
【技术特征摘要】
1.一种二维共价有机骨架纳米片的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：将三聚氰胺和三聚氯氰溶解于溶剂二甲基亚砜中形成混合溶液，然后将混合溶液加热回流反应，反应结束后自然冷却降至室温，取出反应后的固体用二甲基亚砜和纯水洗涤，最后真空干燥，得到白色粉末状的二维共价有机骨架纳米片。
2.根据权利要求1所述二维共价有机骨架纳米片的制备方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：将三聚氰胺和三聚氯氰溶解于溶剂二甲基亚砜中形成混合溶液，然后将混合溶液于120-150℃加热回流反应96h，反应结束后自然冷却降至室温，取出反应后的固体用二甲基亚砜和纯水洗涤分别洗涤3次，最后60℃真空干燥过夜，得到白色粉末状的二维共价有机骨架纳米片。
3.根据权利要求1或2所述二维共价有机骨架纳米片的制备方法，其特征在于：所述三聚氰胺和三聚氯氰的摩尔比为1:1。
4.根据权利要求1或2所述二维共价有机骨架纳米片的制备方法，其特征在于：所述合成的二维共价有机骨...
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