【技术实现步骤摘要】
本专利技术关于中药成分分析鉴定，尤其涉及一种鉴定生物样品中人参皂苷类成分及其代谢产物的质谱示踪方法及其应用。
技术介绍
1、人参属中药作为保健食品或者中成药的原材料，在全球广泛应用。《中国药典》(2020年版一部)收录了七种人参属来源的中药，包括六种根或根茎类和一种叶类中药：人参(panax ginseng，pg)、红参(red ginseng，rg)、西洋参(p.quinquefolius，pq)、三七(p.notoginseng，pn)、珠子参(p.japonicus，pj)、竹节参(p.japonicus var.major，pjm)和人参叶(leaf of p.ginseng)。不同人参属植物来源的中药的性味、归经和功能主治有所不同，在中医基础理论指导下的临床应用范围也有明显差异，因此不可将它们随意互相替代或者混用。
2、传统人参属中药最常见的给药方式是口服，经过消化液、肠道菌群的分解转化，在胃肠道生成由中药原型成分及其代谢产物组成的混合物，其中部分成分被选择性吸收，随血液循环移行，分布至各个器官组织。入血原型成分和代谢产物与中草药的疗效和安全性密切相关，一般认为药物被人体吸收的成分及相关代谢物是治疗疾病的有效物质基础。人参属植物富含皂苷、多糖等成分，其中人参皂苷类成分具有增强机体的免疫功能，保护心脑血管，调节中枢神经，抗肿瘤，抗衰老等药理作用，是人参属中药质量控制的指标成分。对人参皂苷成分及其代谢产物的研究有助于获知不同人参属植物产生不同临床应用效果的微观机理，并有助于人参属中药或人参皂苷组分的深入开发和利
技术实现思路
1、针对以上技术问题，本专利技术提供一种鉴定生物样品中人参皂苷类成分及其代谢产物的质谱示踪方法及其应用。本专利技术构建的质谱示踪方法能够去除生物样本的本底干扰，直观展示人参皂苷类成分的代谢轮廓，可用于生物样品中人参皂苷类成分及其代谢产物的分析鉴定，并能构建人参皂苷类成分及其代谢产物的特征指纹图谱。
2、为达到上述专利技术目的，本专利技术采用了如下的技术方案：
3、本专利技术第一方面提供一种鉴定生物样品中人参皂苷类成分及其代谢产物的质谱示踪方法，具体包括以下步骤：
4、s1、将待测的生物样品进行去蛋白处理；
5、s2、采用超高效液相色谱/质谱联用分析方法对去蛋白处理后的所述生物样品进行检测，对正离子模式人参皂苷源内裂解(p-sid)特征碎片进行预测，筛选响应高的皂苷元特征碎片作为目标离子进行选择离子监测采集；在负离子模式下，根据人参皂苷主要代谢途径，以人参属中药中皂苷成分为模板进行代谢产物预测，生成pil(母离子列表)，构建pil-hddda方法，并分别通过hdmse和pil-hddda方法采集一级质谱信息和二级质谱信息，用于代谢产物的结构鉴定；
6、s3、将s2所述负离子模式下两种方法采集的一级质谱信息和二级质谱信息用unifi软件校正、处理及分析，实现人参皂苷及其代谢产物的鉴定。
7、该方法创造性地采用以正离子模式示踪，以负离子模式进行结构解析的方式排除了复杂的内源性物质干扰对于人参皂苷检测的影响，实现了人参皂苷体内原型和代谢产物的鉴定。具体来说：该方法采用正离子模式下选择性地监测质荷比来确定目标人参皂苷的保留时间(即，正离子示踪)，锁定所在总离子流图的位置，但正离子模式下人参皂苷结构信息已被破坏，无法用于结构鉴定，故本方法进而结合负离子模式对相同保留时间的数据进行解析，通过高分辨二级质谱裂解特征鉴定其原型或代谢产物。该方法使得拥有某种苷元的人参皂苷都能给出质谱信号，且含量与强度基本正相关，从而实现了在成分极其复杂的生物样品中的准确分析、鉴定人参皂苷原型及其代谢产物。
8、结合第一方面，s1中所述去蛋白处理的方法为蛋白质沉淀或固相萃取(spe)。
9、结合第一方面，s2中还包括对人参属中药提取物进行检测。人参属中药提取物的制备方法优选采用与生物样品的供体所服用的人参属中药的制备方法一致。对人参属中药提取物进行检测的数据可用作阳性对照，使该鉴别方法对于人参皂苷原型的鉴定更加准确。
10、结合第一方面，s2中所述超高效液相色谱的色谱条件为：
11、色谱柱：极性修饰十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；
12、流动相a为含0.095～0.105％v/v甲酸的水溶液，流动相b为含0.095～0.105％v/v甲酸的乙腈溶液，进行线性梯度洗脱，所述线性梯度洗脱的程序如下：
13、
14、
15、流速：0.3ml/min；
16、柱温：25～35℃。
17、在本专利技术所采用的色谱柱、流动相、线性洗脱程序、流速、柱温等条件下，色谱峰分离效果好，检测离子数多，色谱峰形良好。
18、以上线性梯度洗脱程序中，如果相邻时间点后流动相b的体积百分比有变化，则表示流动相在该时间段内是线性变化的，如，0min流动相b的比例为15％，2min流动相b的比例为22％，表示流动相b在0min至2min从15％线性增加到22％。2min与6min的流动相比例相同，表示这个时间段内流动相比例不变。
19、优选地，所述色谱柱为waters acquity uplc csh c18(2.1×100mm，1.7μm)。
20、优选地，所述流动相a中的甲酸浓度为0.1％v/v。
21、优选地，所述流动相b中的甲酸浓度为0.1％v/v。
22、优选地，所述柱温为30℃。
23、结合第一方面，所述质谱采用离子淌度四极杆飞行时间质谱。
24、优选地，所述质谱的质谱条件包括：离子源为电喷雾离子源，在正离子模式下采集m/z 100～1000范围内的质谱数据；所述离子源的参数为：毛细管电压1.0kv；锥孔电压40v；离子源温度120℃；脱溶剂气体温度500℃；脱溶剂气体流速800l/h；锥形气流速50l/h；ms1碰撞能量为6ev，扫描时间为0.1s；离子淌度分离在默认参数下进行；以10μl/min的流速不断注入200pg/μl亮氨酸脑啡肽溶液进行数据校正。
25、优选地，所述质谱的质谱条件还包括：离子源为电喷雾离子源，在负离子模式下采集m/z 250～1500范围内的质谱数据；所述离子源的参数为：毛细管电压-2.5kv；锥孔电压-40v；离子源温度123℃；脱溶剂气体温度458℃；脱溶剂气体流速900l/h；锥形气流速50l/h；对于hdmse模式，低碰撞能量设置为6ev，高碰撞能量设置为10～80ev，扫描时间为0.2～0.3s；离子淌度分离在默认参数下进行；以10μl/min的流速不断注入200pg/μl亮氨酸脑啡本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种鉴定生物样品中人参皂苷类成分及其代谢产物的质谱示踪方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的鉴定生物样品中人参皂苷类成分及其代谢产物的质谱示踪方法，其特征在于，S1中所述去蛋白处理的方法为蛋白质沉淀或固相萃取；和/或
3.根据权利要求1所述的鉴定生物样品中人参皂苷类成分及其代谢产物的质谱示踪方法，其特征在于，S2中所述超高效液相色谱的色谱条件为：
4.根据权利要求1所述的鉴定生物样品中人参皂苷类成分及其代谢产物的质谱示踪方法，其特征在于，所述色谱柱为Waters Acquity UPLC CSH C18，2.1×100mm，1.7μm；和/或
5.根据权利要求1～4任一项所述的鉴定生物样品中人参皂苷类成分及其代谢产物的质谱示踪方法，其特征在于，所述质谱采用离子淌度四极杆飞行时间质谱。
6.根据权利要求5所述的鉴定生物样品中人参皂苷类成分及其代谢产物的质谱示踪方法，其特征在于，所述质谱的质谱条件包括：离子源为电喷雾离子源，在正离子模式下采集m/z 100～1000范围内的质谱数据；所述离子源的参
7.根据权利要求6所述的鉴定生物样品中人参皂苷类成分及其代谢产物的质谱示踪方法，其特征在于，所述质谱的质谱条件还包括：离子源为电喷雾离子源，在负离子模式下采集m/z 250～1500范围内的质谱数据；所述离子源的参数为：毛细管电压-2.5kV；锥孔电压-40V；离子源温度123℃；脱溶剂气体温度458℃；脱溶剂气体流速900L/h；锥形气流速50L/h；对于HDMSE模式，低碰撞能量设置为6eV，高碰撞能量设置为10～80eV，扫描时间为0.2～0.3s。
8.根据权利要求7所述的鉴定生物样品中人参皂苷类成分及其代谢产物的质谱示踪方法，其特征在于，所述质谱的质谱条件还包括：对于HDDDA模式，一级碰撞能量设置为6eV，当TIC强度超过200个检测器计数时，自动触发前三强母离子的MS/MS碎裂，一级与二级采集时间均为0.2～0.3s；二级扫描设置质量依赖的斜坡碰撞能量，在低质量斜坡中设置为20～70eV，在高质量斜坡中设置为70～100eV。
9.权利要求1～8任一项所述的鉴定生物样品中人参皂苷类成分及其代谢产物的质谱示踪方法在血浆、尿液或粪便样品中构建人参皂苷及其代谢产物特征指纹图谱的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述应用的具体操作包括：
...【技术特征摘要】
1.一种鉴定生物样品中人参皂苷类成分及其代谢产物的质谱示踪方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的鉴定生物样品中人参皂苷类成分及其代谢产物的质谱示踪方法，其特征在于，s1中所述去蛋白处理的方法为蛋白质沉淀或固相萃取；和/或
3.根据权利要求1所述的鉴定生物样品中人参皂苷类成分及其代谢产物的质谱示踪方法，其特征在于，s2中所述超高效液相色谱的色谱条件为：
4.根据权利要求1所述的鉴定生物样品中人参皂苷类成分及其代谢产物的质谱示踪方法，其特征在于，所述色谱柱为waters acquity uplc csh c18，2.1×100mm，1.7μm；和/或
5.根据权利要求1～4任一项所述的鉴定生物样品中人参皂苷类成分及其代谢产物的质谱示踪方法，其特征在于，所述质谱采用离子淌度四极杆飞行时间质谱。
6.根据权利要求5所述的鉴定生物样品中人参皂苷类成分及其代谢产物的质谱示踪方法，其特征在于，所述质谱的质谱条件包括：离子源为电喷雾离子源，在正离子模式下采集m/z 100～1000范围内的质谱数据；所述离子源的参数为：毛细管电压1.0kv；锥孔电压40v；离子源温度120℃；脱溶剂气体温度500℃；脱溶剂气体流速800l/h；锥形气流速50l/h；ms1碰撞能量为6e...
【专利技术属性】
技术研发人员：李雪，杨文志，姚一青，胡莹，宓月光，洪莉丽，王洪达，徐晓艳，王宇，崔殿鑫，
申请(专利权)人：天津中医药大学，
类型：发明
国别省市：
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