【技术实现步骤摘要】
本申请涉及检测，尤其涉及检测α1-酸性糖蛋白的试纸条、试剂盒及方法。
技术介绍
1、α1-酸性糖蛋白(α1-acidg lycoprotei n，agp或aag)，早期称之为血清类粘蛋白(orosomucoid,orm)，是一种非特异性急性时相反应蛋白，也是人类血清中含糖量最多(含糖约45％)、酸性最强(pi为2.7～3.5)的糖蛋白。主要由肝脏巨噬细胞和粒细胞产生，后期研究发现癌细胞也可合成。它与c反应蛋白一起被认为是反映炎症活动急性状态的敏感指标。
2、α1-酸性糖蛋白是一个比较敏感而特异的诊断指标，升高时，可定义有感染、外伤、烧伤、手术、急性心肌梗死、类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、克隆病、恶性肿瘤、癌转移等；降低时可定义为肝细胞病变晚期、服用17α-羟基雄性激素、肾病综合征、遗传因素和营养不良等疾病；
3、aag作为炎症标志物，其检测结果十分重要。目前，市面上常见的aag检测方法多为酶联免疫法、胶乳免疫比浊法、化学发光免疫法等。
4、1)酶联免疫法
5、传统的酶联免疫法操作繁琐，受人为操作影响较大，自动化程度低，不适合高通量检测，目前已逐渐被化学发光等其他方法所取代。
6、2)胶乳免疫比浊法
7、该方法灵敏度不高，对原料以及原料的配比要求较高，增加了研发过程中筛选原料的时间以及成本。
8、3)化学发光免疫法
9、化学发光免疫法是近年来发展较快的技术，更是衍生出了电化学发光免疫分析法，但是免疫分析方法的性能依赖于高质量抗体的制备，
10、综上，目前现有的检测方法灵敏度低，成本较高。
技术实现思路
1、本申请实施例的目的在于提出一种检测α1-酸性糖蛋白的试纸条、试剂盒及方法，本申请提高检测灵敏度。
2、为了解决上述技术问题，本申请实施例提供一种检测α1-酸性糖蛋白的试纸条，采用了如下所述的技术方案：
3、一种检测α1-酸性糖蛋白的试纸条，所述试纸条包括pvc底板和依次搭接设置在树上pvc底板上样品垫、第一结合垫、第二结合垫、硝酸纤维素膜以及吸收垫；
4、其中，所述第一结合垫上含有荧光标记的aag抗体和荧光标记的羊抗鸡i gy抗体；
5、所述第二结合垫上含有偶联生物素的抗aag单克隆抗体；
6、所述硝酸纤维素膜上设置有检测线和质控线，所述检测线包被链霉亲和素，所述质控线包被鸡i gy抗体。
7、进一步的，所述荧光微球为eu3+镧系元素荧光微球；
8、所述荧光微球的直径为290nm～350nm。
9、进一步的，所述样品垫通过下述步骤制得：
10、将初始样品垫放入样品垫处理液中浸泡，温度18～26℃，相对湿度≤30％的条件下干燥处理，获得所述样品垫。。
11、进一步的，所述第一结合垫通过下述步骤制得：
12、分别制备荧光微球标记的aag抗体溶液和荧光微球标记的羊抗鸡i gy抗体溶液；
13、按照体积比1:1混合所述荧光微球标记的aag抗体溶液和荧光微球标记的羊抗鸡igy抗体溶液，获得第一混合标记溶液；
14、将所述第一混合标记溶液按照4.0μl/cm的喷量，喷到玻璃纤维上，获得所述第一结合垫。
15、进一步的，所述分别制备荧光微球标记的aag抗体溶液和荧光微球标记的羊抗鸡igy抗体溶液的步骤包括：
16、向两个离心管中分别加入标记缓冲液，将荧光微球加入所述标记缓冲液中，混匀，其中，所述标记缓冲液包括0.02m的mes；
17、加入标记活化液，离心处理，保留沉淀，加入所述标记缓冲液，超声混匀，其中，所述标记活化液包括0.02m的edc和0.02m的nhs；
18、向两个所述离心管中分别加入aag标记抗体和羊抗鸡i gy标记抗体，混匀反应处理；
19、加入标记封闭液，超声混匀处理，离心，保留沉淀，加入三羟甲基氨基甲烷缓冲液，其中，按质量分数计，所述标记封闭液包括10％的牛血清白蛋白；
20、离心，保留沉淀，加入标记保存液，超声、离心，保留上清液，分别得到荧光微球标记的aag抗体溶液和荧光微球标记的羊抗鸡i gy抗体溶液。
21、进一步的，所述第二结合垫通过下述步骤制得：
22、制备偶联生物素的抗aag单克隆抗体溶液；
23、将所述偶联生物素的抗aag单克隆抗体溶液按照4.0μl/cm的喷量，喷到玻璃纤维上，获得所述第二结合垫。
24、进一步的，所述制备偶联生物素的抗aag单克隆抗体溶液的步骤包括：
25、将生物素加入无水dmso中，获得生物素溶液，并向硼酸盐缓冲液中加入抗aag单克隆抗体，获得抗体溶液；
26、向所述抗体溶液中加入所述生物素溶液，混匀处理，避光孵育处理；
27、加入氯化铵溶液，用pbs透析，以去除未结合的生物素，获得透析溶液；
28、将所述透析溶液上分子筛柱，加入0.1mo l/l的硼酸盐缓冲液至分子筛柱中，吹打；
29、将所述分子筛柱的滤芯倒转放置于一离心管中，离心后收集离心管中的溶液，获得所述偶联生物素的抗aag单克隆抗体溶液。
30、为了解决上述技术问题，本申请实施例还提供一种检测α1-酸性糖蛋白的试剂盒，采用了如下所述的技术方案：
31、一种检测α1-酸性糖蛋白的试剂盒，所述试剂盒包括aag检测卡，所述aag检测卡包括上述的试纸条。
32、进一步的，所述试剂盒还包括aag稀释液，其中，所述aag稀释液包括磷酸盐缓冲液。
33、为了解决上述技术问题，本申请实施例还提供一种检测α1-酸性糖蛋白的方法，采用了如下所述的技术方案：
34、一种使用上述试剂盒检测α1-酸性糖蛋白的方法，包括下述步骤：
35、将待测样本加入至aag稀释液中，混匀，加入aag检测卡中；
36、将所述aag检测卡防御仪器卡槽内，进行测试操作，获得α1-酸性糖蛋白的检测结果。
37、与现有技术相比，本申请实施例主要有以下有益效果：
38、本申请提供一种α1-酸性糖蛋白检测试剂盒，该试剂盒本申请采用链霉亲和素标记技术与荧光标记技术结合的方法来检测血清中α1-酸性糖蛋白含量，aag浓度与相对发光强度成正相关，根据aag浓度标准曲线即可得到被测样本中aag的含量，由于链霉亲和素与生物素之间亲和力极强，因而可提高检测灵敏度。同时结合发光强度和灵敏度都较高的镧系元素螯合物对aag进行标记，可有效地排除非特异荧光的干扰，降低了本底荧光，实现高性价比。
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1.一种检测α1-酸性糖蛋白的试纸条，其特征在于，所述试纸条包括PVC底板和依次搭接设置在树上PVC底板上样品垫、第一结合垫、第二结合垫、硝酸纤维素膜以及吸收垫；
2.根据权利要求1所述的检测α1-酸性糖蛋白的试纸条，其特征在于，所述荧光微球为Eu3+镧系元素荧光微球；
3.根据权利要求1所述的检测α1-酸性糖蛋白的试纸条，其特征在于，所述样品垫通过下述步骤制得：
4.根据权利要求1所述的检测α1-酸性糖蛋白的试纸条，其特征在于，所述第一结合垫通过下述步骤制得：
5.根据权利要求4所述的检测α1-酸性糖蛋白的试纸条，其特征在于，所述分别制备荧光微球标记的AAG抗体溶液和荧光微球标记的羊抗鸡IgY抗体溶液的步骤包括：
6.根据权利要求1所述的检测α1-酸性糖蛋白的试纸条，其特征在于，所述第二结合垫通过下述步骤制得：
7.根据权利要求6所述的检测α1-酸性糖蛋白的试纸条，其特征在于，所述制备偶联生物素的抗AAG单克隆抗体溶液的步骤包括：
8.一种检测α1-酸性糖蛋白的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括
9.根据权利要求8所述的检测α1-酸性糖蛋白的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括AAG稀释液，其中，所述AAG稀释液包括磷酸盐缓冲液。
10.一种使用如权利要求8或9所述的试剂盒检测α1-酸性糖蛋白的方法，其特征在于，包括下述步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种检测α1-酸性糖蛋白的试纸条，其特征在于，所述试纸条包括pvc底板和依次搭接设置在树上pvc底板上样品垫、第一结合垫、第二结合垫、硝酸纤维素膜以及吸收垫；
2.根据权利要求1所述的检测α1-酸性糖蛋白的试纸条，其特征在于，所述荧光微球为eu3+镧系元素荧光微球；
3.根据权利要求1所述的检测α1-酸性糖蛋白的试纸条，其特征在于，所述样品垫通过下述步骤制得：
4.根据权利要求1所述的检测α1-酸性糖蛋白的试纸条，其特征在于，所述第一结合垫通过下述步骤制得：
5.根据权利要求4所述的检测α1-酸性糖蛋白的试纸条，其特征在于，所述分别制备荧光微球标记的aag抗体溶液和荧光微球标记的羊抗鸡igy抗体溶液的步骤...
【专利技术属性】
技术研发人员：蒋析文，齐文闯，潘秀华，刘双，陈泽壮，李俊玉，
申请(专利权)人：广州达安基因股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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