【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，涉及一种预处理试剂及其应用，尤其是涉及其在dsdna包被中的应用。
技术介绍
1、包被是指将目标核酸或者蛋白质固定在固相载体(多为聚苯乙烯材质)的过程，在酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assays，elisa)实验中是不可或缺的关键步骤。
2、在包被过程中，蛋白质分子上的疏水基团通过物理吸附，与固相载体的疏水基团之间产生作用力，从而使得蛋白质牢牢固定在固相载体上。这种包被过程可能受多种因素影响，包括：蛋白质的分子量、浓度、等电点、缓冲液成分等。例如，大分子蛋白质具有较多疏水基团的概率往往比小分子蛋白更大，所以更容易包被在固相载体表面。因此筛选合适的包被条件是elisa实验的关键之一。
3、核酸不同于蛋白质的特性，不含有疏水基团，而是含有带负电的磷酸基团。因此，在检测核酸抗体时，核酸作为待包被抗原，采用传统的包被方法不能使其有效的固定在固相载体表面。现有解决办法往往采用碱性蛋白质(例如多聚赖氨酸、鱼精蛋白)或无机物feso4预处理固相载体表面，以提高其核酸的负载能力。其中，碱性蛋白质因为带有一定的正电荷，因此可以与带负电的核酸结合，然而引入的碱性蛋白质和人组蛋白有交叉反应性，所以当待检血清中含有抗组蛋白抗体时，导致出现假阳性，而feso4的应用则收效甚微。除此之外，也可用链酶亲和素预包被固相载体，再将生物素化修饰的核酸与其孵育，这种方法的优点是包被牢固且均匀，但是由于需要首先制备生物素化核酸，导致这种方法成本高昂、步骤繁琐、费时费力，不适合大规模工
4、有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种预处理试剂、基于该预处理试剂得到的用于dsdna包被用固相载体及其制备方法，以提高dsdna的包被效果；本专利技术还进一步提供了使用该dsdna包被用固相载体包被dsdna的方法及包被有dsdna的材料。本专利技术的目的还在于提供基于上述多种组分/材料制得的试剂/试剂盒和它们的应用。
2、为解决上述技术问题，本专利技术特采用如下技术方案：
3、第一方面，提供了一种预处理试剂，所述预处理试剂含有pei(聚乙烯亚胺)和缓冲液。
4、通过将预处理试剂作用于固相载体中，可制得具有较佳dsdna包被效果的dsdna包被用固相载体。具体地，所述固相载体为常用的包被用板材，如聚苯乙烯板。
5、可选的实施方式中，所述pei的分子聚合度为4000～20000，例如可以为但不限于4000、5000、6000、7000、8000、9000、10000、11000、12000、13000、14000、15000、16000、17000、18000、19000或20000，优选为10000；所述pei的终浓度为0.001～0.1％wt，例如可以为但不限于0.001、0.005、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09或0.1％wt，优选为0.01％wt。
6、可选的实施方式中，所述缓冲液包括pbs、tris、hepes中的任一种，优选hepes，优选为ph为7.4。
7、可选的实施方式中，所述预处理试剂还包括表面活性剂。
8、可选的实施方式中，所述表面活性剂的终浓度为0.1～10v/v％，例如可以为但不限于0.1、0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10v/v％，优选1v/v％。
9、可选的实施方式中，所述表面活性剂包括tween系列中的至少一种，优选包括tween-20。
10、第二方面，还提供了第一方面的预处理试剂在用于制备dsdna包被用固相载体中的用途。
11、第三方面，还提供了一种dsdna包被用固相载体的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：将固相载体与第一方面的预处理试剂孵育，孵育后弃去溶液，干燥。
12、可选的实施方式中，所述固相载体为塑料板。
13、可选的实施方式中，所述塑料板为聚苯乙烯板。
14、可选的实施方式中，所述孵育条件为37℃静置4～10h，例如可以为但不限于2、3、4、5、6、7、8、9或10h。
15、可选的实施方式中，所述孵育条件为37℃静置6h。
16、第四方面，还提供了第三方面方法制备得到的dsdna包被用固相载体。
17、第五方面，还提供了第四方面的dsdna包被用固相载体在用于dsdna包被中的用途。
18、第六方面，还提供一种dsdna的包被方法，该包被方法包括使用dsdna包被第四方面的dsdna包被用固相载体。
19、包被步骤可采用本领域已知的、常规的任何方法将dsdna包被于经预处理的固相载体。具体的工艺选择，以及选择工艺涉及的具体操作步骤、工艺参数以及设备等，可根据本领域众所周知，且如各种一般和更具体的教材、参考文献、工艺手册、商品说明、标准文件、设备说明书等记载的方法来进行，本专利技术对此不做限制。
20、可选的实施方式中，该包被方法包括如下步骤：将dsdna溶液与所述固相载体孵育，用洗涤液洗涤，移除溶液。
21、可选的实施方式中，所述dsdna溶液包括dsdna和碳酸盐缓冲液，碳酸盐缓冲液优选为ph为9.6、浓度为50mm的碳酸盐缓冲液。
22、可选的实施方式中，所述孵育条件为4℃静置过夜。
23、可选的实施方式中，所述洗涤液为pbst。
24、第七方面，还提供了第六方面的包被方法制得的包被有dsdna的材料。
25、第八方面，还提供了第一方面的预处理试剂、或第四方面的dsdna包被用固相载体，或第七方面的材料在用于制备dsdna抗体检测试剂或试剂盒中的用途。
26、第九方面，还提供了一种用于检测与dsdna抗体的试剂或试剂盒，所述试剂或试剂盒包含(a)～(c)中的至少一种：
27、(a)第一方面的预处理试剂，本领域技术人员可使用该试剂盒中的预处理试剂对所需的固相载体进行预处理。
28、(b)第四方面的dsdna包被用固相载体，本领域技术人员可使用该试剂盒中经预处理的固相载体包被所需的dsdna。
29、(c)第七方面的材料，本领域技术人员可使用该包被有dsdna的材料直接进行检测。
30、上述试剂盒还任选地包括本领域用于检测反应的，本领域技术人员熟知的试剂和/或耗材，包括但不限于缓冲试剂、盐、二抗、显色底物、封闭液、洗涤液、溶剂、洗脱液、偶联剂、阴性对照、阳性对照、标准品、质控品和标记物中的一种或多种。
31、第十方面，还提供了第七方面的材料在用于dsdna抗体检测中的用途，所述用途是非诊断和治疗目的的。
32、非诊断和治疗目的地检测dsdna抗体，包括：用于体外制备的dsdna抗体的鉴定。
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1.一种预处理试剂，其特征在于，所述预处理试剂含有PEI和缓冲液；
2.如权利要求1所述预处理试剂在用于制备dsDNA包被用固相载体中的用途。
3.一种dsDNA包被用固相载体的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：将固相载体与权利要求1所述的预处理试剂孵育，孵育后弃去溶液，干燥；
4.如权利要求3所述方法制备得到的dsDNA包被用固相载体。
5.如权利要求4所述的dsDNA包被用固相载体在用于dsDNA包被中的用途。
6.一种dsDNA的包被方法，其特征在于，包括使用dsDNA包被如权利要求4所述的dsDNA包被用固相载体；
7.根据权利要求6所述包被方法制得的包被有dsDNA的材料。
8.根据权利要求1所述的预处理试剂、或根据权利要求4所述的dsDNA包被用固相载体，或如权利要求7所述的材料在用于制备dsDNA抗体检测试剂或试剂盒中的用途。
9.用于检测与dsDNA抗体的试剂或试剂盒，其特征在于，包含(A)～(C)中的至少一种：
10.如权利要求7所述的材料非
...【技术特征摘要】
1.一种预处理试剂，其特征在于，所述预处理试剂含有pei和缓冲液；
2.如权利要求1所述预处理试剂在用于制备dsdna包被用固相载体中的用途。
3.一种dsdna包被用固相载体的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：将固相载体与权利要求1所述的预处理试剂孵育，孵育后弃去溶液，干燥；
4.如权利要求3所述方法制备得到的dsdna包被用固相载体。
5.如权利要求4所述的dsdna包被用固相载体在用于dsdna包被中的用途。
6.一种dsdna的包被方法...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐立超，游方芳，徐亮，曾敏霞，
申请(专利权)人：珠海丽珠试剂股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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