【技术实现步骤摘要】
本申请涉及生物医学，特别涉及一种罗伊氏乳杆菌的外膜囊泡的应用。
技术介绍
1、目前临床对于骨缺损的治疗方法主要是：髂骨、腓骨等自体骨移植、同种异体骨移植、诱导膜技术(masquelet技术)、ilizarov骨延长技术等。这些治疗方式对于小的骨组织缺损已看到令人较为满意的效果，但对于大面积骨缺损，即超过临界尺寸的骨缺损(csd)，其应用尚存在许多不足与缺陷。传统的治疗方法，首先难以满足超过临界尺寸骨缺损愈合的需要，其次是自体骨移植取骨本身带来的伤害、异体骨移植的免疫排斥、masquelet技术及ilizarov骨延长技术手术操作要求高、时间长等问题。据统计，大约5％-10％的骨缺损无法愈合并发展为不愈合，极大影响了患者的生活质量，促使我们迫切需要探索新的治疗策略。
2、大面积骨缺损的主要治疗难点在于感染控制、软组织修复及骨缺损重建。目前临床上应用较为成熟的骨修复治疗方案包括传统的自体骨、同种异体骨及异种骨移植技术，仍存在许多不足。随着生物医学的不断发展，以生物材料为基础的骨组织工程技术为大段骨缺损的临床治疗提供了新思路，有望通过促进机体骨再生克服传统骨移植的缺点。然而，组织工程技术亦存在引发宿主炎症反应、纤维增生等局限性，使之在临床应用中进展缓慢。
3、骨免疫学是一个不断发展的跨学科研究领域，专注于骨骼和免疫系统之间的相互作用。骨愈合过程涉及三个连续但相互依存的阶段：炎症，修复和重塑。骨愈合过程起始于损伤后的炎症反应，同时也影响随后的骨修复和重塑阶段。骨愈合是一种再生过程，涉及多种活性分子和细胞的参与，例
技术实现思路
1、基于此，本申请实施例的目的包括提供罗伊氏乳杆菌的外膜囊泡的应用，包括如下技术方案：
2、本申请实施例的第一方面，提供罗伊氏乳杆菌的外膜囊泡在制备促进巨噬细胞m2型极化的试剂、诱导骨髓间充质干细胞成骨细胞的试剂或者骨组织愈合产品中的应用。
3、在申请的一些实施方式中，所述罗伊氏乳杆菌为罗伊氏乳杆菌dsm20016。
4、在申请的一些实施方式中，所述巨噬细胞为raw264.7。
5、本申请实施例的第二方面，提供一种m2型巨噬细胞的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：
6、使巨噬细胞内吞罗伊氏乳杆菌的外膜囊泡从对而诱导所述巨噬细胞m2型极化，制备m2型巨噬细胞。
7、在申请的一些实施方式中，所述罗伊氏乳杆菌为罗伊氏乳杆菌dsm20016。
8、在申请的一些实施方式中，所述巨噬细胞为raw264.7。
9、在申请的一些实施方式中，诱导过程满足如下条件(1)和(2)中的一个或者多个：
10、(1)所述巨噬细胞的密度为1×105个/ml-3×105个/ml以及，
11、(2)所述外膜囊泡的浓度为1μg/ml-80μg/ml。
12、在申请的一些实施方式中，诱导所述巨噬细胞m2型极化的条件满足：温度为35℃-39℃，时间为20h-30h。
13、本申请实施例的第三方面，提供一种成骨细胞的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：
14、采用所述的制备方法制备m2型巨噬细胞；
15、制备所述m2型巨噬细胞的培养上清；以及，
16、以添加有所述培养上清的培养基诱导培养骨髓间充质干细胞成骨，制备成骨细胞。
17、在申请的一些实施方式中，制备所述m2型巨噬细胞的培养上清的步骤包括：培养所述m2型巨噬细胞，从所得培养物中分离所述培养上清；可选地，制备所述m2型巨噬细胞的培养上清的步骤满足如下条件中的一个或者多个：
18、(1)所述m2型巨噬细胞的初始培养密度为1×105个/ml-3×105个/ml；培养的温度为35℃-39℃，培养的时间为20h-30h，培养的培养基为添加8％-12％(v/v)fbs和0.8％-1.2％(w/w)青霉素-链霉素的dmem培养基；以及，
19、(2)分离所述培养上清的方式包括离心；可选地，离心的条件包括：转速为7500rpm-8500rpm。
20、在申请的一些实施方式中，诱导培养骨髓间充质干细胞成骨的步骤满足如下条件中的一个或者多个：
21、1)诱导成骨培养基包括体积比为1：(0.8-1.2)的成骨诱导培养基和所述培养上清，所述成骨诱导培养基包括8％-12％(v/v)胎牛血清、0.8％-1.2％(v/v)青霉素-链霉素混合液、0.35mm-0.45mm抗坏血酸、18mm-22mmβ-甘油磷酸酯以及2×10-6-2×10-8m地塞米松；湿度饱和；温度为35℃-39℃；诱导时间为3d-21d；以及，
22、2)所述骨髓间充质干细胞的传代代数为5代-8代。
23、相对于传统技术，本申请的有益效果包括：
24、本申请通过对lrevs进行研究，由动物体内及细胞体外实验发现，lrevs具有较为明显的促进巨噬细胞m2极化及小鼠骨髓间充质干细胞(bmscs)成骨作用。由此可知，lrevs有望能够作为一种促进抗炎及骨组织愈合的附加材料，为大面积骨组织的愈合治疗修复提供临床参考。
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1.罗伊氏乳杆菌的外膜囊泡在制备促进巨噬细胞M2型极化的试剂、诱导骨髓间充质干细胞成骨细胞的试剂或者骨组织愈合产品中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述罗伊氏乳杆菌为罗伊氏乳杆菌DSM20016。
3.根据权利要求1或者2所述的应用，其特征在于，所述巨噬细胞为Raw264.7。
4.一种M2型巨噬细胞的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：
5.根据权利要求4所述的M2型巨噬细胞的制备方法，其特征在于，所述罗伊氏乳杆菌为罗伊氏乳杆菌DSM20016。
6.根据权利要求4所述的M2型巨噬细胞的制备方法，其特征在于，所述巨噬细胞为Raw264.7。
7.根据权利要求4至6中任一项所述的M2型巨噬细胞的制备方法，其特征在于，诱导过程满足如下条件(1)和(2)中的一个或者多个：
8.根据权利要求4至6中任一项所述的M2型巨噬细胞的制备方法，其特征在于，诱导所述巨噬细胞M2型极化的条件满足：温度为35℃-39℃，时间为20h-30h。
9.一种成骨细胞的制备方法，其
10.根据权利要求9所述的成骨细胞的制备方法，其特征在于，制备所述M2型巨噬细胞的培养上清的步骤包括：培养所述M2型巨噬细胞，从所得培养物中分离所述培养上清；可选地，制备所述M2型巨噬细胞的培养上清的步骤满足如下条件中的一个或者多个：
...【技术特征摘要】
1.罗伊氏乳杆菌的外膜囊泡在制备促进巨噬细胞m2型极化的试剂、诱导骨髓间充质干细胞成骨细胞的试剂或者骨组织愈合产品中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述罗伊氏乳杆菌为罗伊氏乳杆菌dsm20016。
3.根据权利要求1或者2所述的应用，其特征在于，所述巨噬细胞为raw264.7。
4.一种m2型巨噬细胞的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：
5.根据权利要求4所述的m2型巨噬细胞的制备方法，其特征在于，所述罗伊氏乳杆菌为罗伊氏乳杆菌dsm20016。
6.根据权利要求4所述的m2型巨噬细胞的制备方法，其特征在于，所述巨噬细胞为raw264.7。...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨岚，王丽萍，葛林虎，黄茵茵，李建玲，江艺琴，刘雪妍，
申请(专利权)人：广州医科大学附属口腔医院广州医科大学羊城医院，
类型：发明
国别省市：
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