【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
1、人类疾病的一个子集可追溯至胚胎发育早期遗传或获得的dna变化。基因疗法开发者特别感兴趣的是由单个基因的突变所致的疾病，称为单基因疾病。据信有超过6,000种单基因疾病。通常，由遗传的突变所致的任何特定遗传疾病均为相对罕见的，但总体来说，遗传相关疾病的死亡率较高。众所周知的遗传疾病包括囊肿纤维化、杜氏肌营养不良(duchenne muscular dystrophy)、亨廷顿病(huntington's disease)及镰状细胞病。其他类别的遗传疾病包括代谢失调，例如有机酸血症及溶酶体贮积症，其中功能异常的基因导致代谢过程的缺陷及毒性副产物的累积，所述毒性副产物可导致短期及长期的严重发病率及死亡率。
技术实现思路
0、概述
1、单基因疾病由于其疾病病理学的简单性而受到生物医学创新者的特别关注。然而，这些疾病及病症中的绝大多数仍实质上无法治疗。因此，在此项技术中仍存在对治疗此类疾病的长期需要。
2、在一些实施方案中，本公开提供了将转基因整合至对象组织中的至少一个细胞群的基因组中的方法。在一些实施方案中，这些方法可包括向对象施用递送编码功能性蛋白的转基因的组合物的步骤，该对象组织中的细胞未能表达由基因产物编码的功能性蛋白，其中该组合物包括：包含表达盒的多核苷酸盒(cassette)，该表达盒包含第一核酸序列及第二核酸序列，其中第一核酸序列编码转基因；且第二核酸序列位于第一核酸序列的5'或3'且在整合至细胞的基因组中的靶整合位点时促进产生两种独立的
3、在一些实施方案中，本公开提供了在一段时间内提高组织中转基因的表达水平的方法，该方法包括向有需要的对象施用递送转基因的组合物的步骤，该转基因整合至对象组织中的至少一个细胞群的基因组中，其中该组合物包括：包含表达盒的多核苷酸盒，该表达盒包含第一核酸序列及第二核酸序列，其中第一核酸序列编码转基因；且第二核酸序列位于第一核酸序列的5'或3'且在整合至细胞的基因组中的靶整合位点时促进产生两种独立的基因产物；第三核酸序列，其位于表达盒的5'且包含与细胞的基因组中的靶整合位点的基因组序列5'实质上同源的序列；以及第四核酸序列，其位于表达盒的3'且包含与细胞的基因组中的靶整合位点的基因组序列3'实质上同源的序列，其中在施用组合物后，转基因被整合至细胞群的基因组中且转基因在组织中的表达水平在一段时间内增加。在一些实施方案中，增加的表达水平包含在组织中表达转基因的细胞的百分比增加。
4、在一些实施方案中，本公开提供了包括向对象施用一定剂量的向对象组织中的细胞递送转基因的组合物的步骤的方法，其中转基因(i)编码延胡索酰乙酰乙酸水解酶(fah)；(ii)在多个细胞的基因组中的靶整合位点处整合；(iii)一旦整合，就功能性表达fah；且(iv)相对于组织中的其他细胞，赋予该多个细胞选择性优势，使得随时间推移，该组织达成fah的功能性表达水平，其中组合物包含：包含表达盒的多核苷酸盒，该表达盒包含第一核酸序列及第二核酸序列，其中第一核酸序列编码转基因；且第二核酸序列位于第一核酸序列的5'或3'且在靶整合位点处整合转基因时促进产生两种独立的基因产物；第三核酸序列，其位于表达盒的5'且包含与靶整合位点的基因组序列5'实质上同源的序列；以及第四核酸序列，其位于表达盒的3'且包含与靶整合位点的基因组序列3'实质上同源的序列。在一些实施方案中，选择性优势包含在组织中表达转基因的细胞的百分比增加。
5、在一些实施方案中，本公开提供了治疗单基因疾病的方法。在一些实施方案中，本公开提供了治疗1型遗传性酪氨酸血症(ht1)的方法。在一些实施方案中，ht1的方法包含向对象施用一定剂量的组合物，该组合物包含：包含表达盒的多核苷酸盒，该表达盒包含第一核酸序列及第二核酸序列，其中第一核酸序列编码fah转基因；且第二核酸序列位于第一核酸序列的5'或3'且在靶整合位点处整合转基因时促进产生两种独立的基因产物；第三核酸序列，其位于表达盒的5'且包含与靶整合位点的基因组序列5'实质上同源的序列；以及第四核酸序列，其位于表达盒的3'且包含与靶整合位点的基因组序列3'实质上同源的序列。在一些实施方案中，第三核酸序列选自seq id no:1、seq id no:3及seq id no:4。在一些实施方案中，第四核酸序列选自seq id no:2及seq id no:5。
6、在一些实施方案中，组合物包含递送载体。在一些实施方案中，递送载体为颗粒，例如纳米颗粒，例如脂质纳米颗粒。在一些实施方案中，递送载体为重组病毒载体。在一些实施方案中，重组病毒载体为重组aav载体。在一些实施方案中，重组病毒载体为或包含衣壳蛋白，该衣壳蛋白包含与aav8、aav-dj、aav-lk03、sl65或aavnp59的氨基酸序列具有至少95％序列一致性的氨基酸序列。在一些实施方案中，组合物进一步包含aav2 itr序列。在一些实施方案中，组合物包含aav2itr序列的一部分。在一些实施方案中，组合物包含与aav2itr具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％序列一致性的itr。在一些实施方案中，组合物包含选自seq id no:27、seq id no:28、seq id no:29及seq id no:30的itr序列。
7、根据各种实施方案，可根据本文所描述的方法及组合物表达多种转基因中的任一者。举例而言，在一些实施方案中，转基因为或包含fah转基因。在一些实施方案中，fah转基因为wt人类fah、经密码子优化的fah、合成fah、fah变异体、fah突变体或fah片段。在一些实施方案中，转基因为或包含与seq id no:18、seq id no:19、seq id no:20、seq id no:21或seq id no:22中的任一者具有80％一致性的序列。
8、在一些实施方案中，本专利技术提供了用于将转基因整合至细胞的基因组中的靶整合位点中的重组病毒载体，其包括：包含表达盒的多核苷酸盒，该表达盒包含第一核酸序列及第二核酸序列，其中第一核酸序列包含fah转基因；且第二核酸序列位于第一核酸序列的5'或3'且在整合至细胞的基因组中的靶整合位点中时促进产生两种独立的基因产物；第三核酸序列，其位于表达盒的5'且包含与细胞的基因组中的靶整合位点的基因组序列5'实质上同源的序列；以及第四核酸序列，其位于表达盒的3'且包含与细胞的基因组中的靶整合位点的基因组序列3'实质上同源的序列。在一些实施方案中，第二核酸序列为编码p2a肽的序列。在一些实施方案中，第二核酸序列与seq id no:6具有至少80％一致性。在一些实施方案中，第二核酸序列编码与seq id no:7具有至少90本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种组合物，其包含：
2.根据权利要求1所述的组合物，其中该闭合环状DNA包含序列SEQ ID NO:23、SEQ IDNO:24、SEQ ID NO:25或SEQ ID NO:26。
3.根据权利要求1或2所述的组合物，其中该闭合环状DNA由以下序列组成：SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25或SEQ ID NO:26。
4.根据上述权利要求中任一项所述的组合物，其中该5'同源臂序列包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3。
5.根据上述权利要求中任一项所述的组合物，其中该3'同源臂序列包含SEQ ID NO:2。
6.根据上述权利要求中任一项所述的组合物，其中该P2A编码序列包含SEQ ID NO:6。
7.根据权利要求6所述的组合物，其中该P2A编码序列编码包含SEQ ID NO:7的肽。
8.根据上述权利要求中任一项所述的组合物，其中编码FAH的该转基因序列包含SEQID NO:20、SEQ ID NO:21或SEQ ID NO:22。<...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种组合物，其包含：
2.根据权利要求1所述的组合物，其中该闭合环状dna包含序列seq id no:23、seq idno:24、seq id no:25或seq id no:26。
3.根据权利要求1或2所述的组合物，其中该闭合环状dna由以下序列组成：seq id no:23、seq id no:24、seq id no:25或seq id no:26。
4.根据上述权利要求中任一项所述的组合物，其中该5'同源臂序列包含seq id no:1或seq id no:3。
5.根据上述权利要求中任一项所述的组合物，其中该3'同源臂序列包含seq id no:2。
6.根据上述权利要求中任一项所述的组合物，其中该p2a编码序列包含seq id no:6。
7.根据权利要求6所述的组合物，其中该p2a编码序列编码包含seq id no:7的肽。
8.根据上述权利要求中任一项所述的组合物，其中编码fah的该转基因序列包含seqid no:20、seq id no:21或seq id no:22。
9.根据上述权利要求中任一项所述的组合物，其中编码fah的该转基因序列由以下组成：seq id no:20、seq id no:21或seq id no:22。
10.根据上述权利要求中任一项所述的组合物，其中该组合物进一步包含aav衣壳蛋白。
11.根据权利要求10所述的组合物，其中该aav衣壳蛋白包含与aav8、aav-dj、aav-lk03、sl65或aavnp59的氨基酸序列具有至少95％序列一致性的氨基酸序列。
12.一种治疗1型遗传性酪氨酸血症(ht1)的方法，该方法包含向对象施用一个剂量的包含以下的组合物：
13.根据权利要求12所述的方法，其中该闭合环状dna包含序列seq id no:23、seq idno:24、seq id no:25或seq id no:26。
14.根据权利要求12或13所述的方法，其中该闭合环状dna由以下序列组成：seq idno:23、seq id no:24、seq id no:25或seq id no:26。
15.根据权利要求12至14中任一项所述的方法，其中该5'同源臂序列包含seq id no:1或seq id no:3。
16.根据权利要求12至15中任一项所述的方法，其中该3'同源臂序列包含seq id no:2。
17.根据权利要求12至16中任一项所述的方法，其中该p2a编码序列包含seq id no:6。
18.根据权利要求17所述的方法，其中该p2a编码序列编码包含seq id no:7的肽。
19.根据权利要求12至18中任一项所述的方法，其中编码fah的该转基因序列包含seqid no:20、seq id no:21或seq id no:22。
20.根据权利要求12至18中任一项所述的方法，其中编码fah的该转基因序列由以下组成：seq id no:20、seq id no:21或seq id no:22。
21.根据权利要求12至20中任一项所述的方法，其中该组合物进一步包含aav衣壳蛋白。
22.根据权利要求21所述的方法，其中该aav衣壳蛋白包含与aav8、aav-dj、aav-lk03、sl65或aavnp59的氨基酸序列具有至少95％序列一致性的氨基酸序列。
23.根据权利要求12至22中任一项所述的方法，其中该组合物以1e12
24.根据权利要求23所述的方法，其中该组合物以3e12 vg/kg与1e13
25.根据权利要求23所述的方法，其中该组合物以3e12 vg/kg与3e13
26.根据权利要求23所述的方法，其中该组合物以不多于3e13 vg/kg的剂量向对象施用。
27.根据权利要求23所述的方法，其中该组合物以不多于3e12 vg/kg的剂量向对象施用。
28.根据权利要求12至27中任一项所述的方法，其中该组合物仅施用一次。
29.根据权利要求12至27中任一...
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