【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及黑木耳多糖的修饰方法，具体为一种磷酸化修饰黑木耳多糖及其绿色安全的制备方法。
技术介绍
1、黑木耳多糖作为一种重要的天然生物活性物质，近年来受到广泛关注，研究表明，黑木耳多糖组成成分多样、结构复杂，生物活性丰富。在抗氧化、提高免疫、抑菌、抗辐射、抗病毒等方面有显著功效。目前，国内对于黑木耳多糖的研究主要集中于菌丝体的液态深层发酵和子实体的提取、分离和纯化；黑木耳子实体多糖的磷酸化修饰和流变学特性的研究较少，本研究以黑木耳多糖为研究对象，将黑木耳多糖进行磷酸化修饰以探究其体外抗氧化能力。
技术实现思路
1、本专利技术的一种磷酸化修饰黑木耳多糖及其绿色安全的制备方法，具体包括以下步骤：
2、步骤1，黑木耳粗多糖的制备：称取黑木耳子实体，粉碎，过100目筛，于440w超声处20min；并加入纤维素酶酶解90-210min，将其置于沸水中水浴5min，液料比为30:1-70:1，取出冷却后采用4800r/min离心20min，复溶得黑木耳多糖溶液；
3、纤维素酶的添加量为0.5％-2.5％；
4、最适宜的酶解条件(ph＝4.8温度为50℃)下恒温水浴一段时间；
5、步骤2，将上述黑木耳粗多糖溶液经过灭酶、浓缩、冻干后即制得黑木耳粗多糖。
6、步骤3，取上述黑木耳粗多糖加水配置成溶液，经过sevage法脱蛋白纯化、并冷冻干燥，得到纯化黑木耳多糖；
7、所述的脱蛋白质步骤包括加sevag试剂搅拌、分层、分取水
8、取所述纯化黑木耳多糖，加入水进行溶解，得到黑木耳多糖溶液。
9、向所述黑木耳多糖溶液加入硫酸钠和磷酸化试剂，调节溶液ph至6.0～10，在60～100℃水浴中反应5h，随后进行醇沉、干燥、复溶、透析、醇沉、冻干，得到磷酸化黑木耳多糖；
10、在磷酸化试剂中加入黑木耳多糖1g，硫酸钠5g，搅拌混匀；
11、所用磷酸化试剂为称取三聚磷酸钠、三偏磷酸钠，与水混匀配制质量比为1:6-6:1浓度的磷酸化试剂；
12、加入三倍样品体积的95％的乙醇沉淀一整夜进行醇沉处理；
13、在4800r/min的条件下离心15min得到沉淀，复溶后进行冷冻干燥处理；
14、复溶后的黑木耳多糖溶液在3500da透析袋透析3d。
15、本专利技术的优点与效果是：
16、1.本专利技术选择三聚磷酸钠和三偏磷酸钠作为磷酸化试剂，该反应无有机试剂参与，方便后续处理，制备方法环保高效。
17、2.本专利技术采用三聚磷酸钠和三偏磷酸钠磷酸化黑木耳多糖，透析除盐，最后得到磷酸根含量大于11.43％的磷酸化多糖。此方法反应条件温和，反应原料安全，反应过程简单便捷。
18、3.由磷酸化修饰前后黑木耳多糖毒性试验表明，随黑木耳多糖浓度逐渐增大，在较低浓度范围内处理时，毒性曲线与毒性对照曲线无明显差异，当处理浓度达到3.0mg/ml时，对caco-2细胞的毒性为19.80％，而随磷酸化黑木耳多糖处理浓度逐渐增大，其毒性曲线与毒性对照曲线未表现出明显差异，说明磷酸化修饰的黑木耳多糖无明显细胞毒性，磷酸化修饰后降低了黑木耳多糖的细胞毒性。
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1.一种磷酸化修饰黑木耳多糖及其绿色安全的制备方法，其特征在于，步骤如下：
2.根据权利要求1所述的黑木耳多糖的磷酸化修饰方法，所述的步骤1包括超声、酶解、脱蛋白质步骤。
3.根据权利要求1所述的黑木耳多糖的磷酸化修饰方法，所述的步骤1为：称取黑木耳子实体，粉碎，过100目筛，于440w超声处20min；酶解步骤包括将超声后的黑木耳用纤维素酶酶解，最适宜的酶解条件(pH＝4.8温度为50℃)下恒温水浴一段时间；配置成一定的液料比，将其置于沸水中水浴5min，采用4800r/min离心20min，复溶、浓缩及冻干得黑木耳粗多糖。
4.根据权利要求1所述的黑木耳多糖的磷酸化修饰方法，所述的步骤1中的脱蛋白质步骤包括将黑木耳粗多糖粉溶于水中，加Sevag试剂搅拌、分层、分取水层、加入乙醇抽滤干燥、混匀过筛；脱蛋白质步骤中样液与Sevag试剂的体积比为4:1。
5.根据权利要求3所述的黑木耳多糖的制备方法，其特征在于，所述的纤维素酶酶解时间为90-210min。
6.根据权利要求3所述的黑木耳多糖的制备方法，其特征在于，所述液料
7.根据权利要求3所述的黑木耳多糖的制备方法，其特征在于，所述的纤维素酶加酶量为0.5％-2.5％。
8.根据权利要求1所述的黑木耳多糖的磷酸化修饰方法，其特征在于，所述的三聚磷酸钠与三偏磷酸钠质量比为1:6-6:1。
9.根据权利要求1所述的黑木耳多糖的磷酸化修饰方法，其特征在于，所述的提取温度为60℃-100℃。
10.根据权利要求1所述的黑木耳多糖的磷酸化修饰方法，其特征在于，pH为6-10。
...【技术特征摘要】
1.一种磷酸化修饰黑木耳多糖及其绿色安全的制备方法，其特征在于，步骤如下：
2.根据权利要求1所述的黑木耳多糖的磷酸化修饰方法，所述的步骤1包括超声、酶解、脱蛋白质步骤。
3.根据权利要求1所述的黑木耳多糖的磷酸化修饰方法，所述的步骤1为：称取黑木耳子实体，粉碎，过100目筛，于440w超声处20min；酶解步骤包括将超声后的黑木耳用纤维素酶酶解，最适宜的酶解条件(ph＝4.8温度为50℃)下恒温水浴一段时间；配置成一定的液料比，将其置于沸水中水浴5min，采用4800r/min离心20min，复溶、浓缩及冻干得黑木耳粗多糖。
4.根据权利要求1所述的黑木耳多糖的磷酸化修饰方法，所述的步骤1中的脱蛋白质步骤包括将黑木耳粗多糖粉溶于水中，加sevag试剂搅拌、分层、分取水层、加入乙醇抽滤干燥、...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘俊梅，李沁烊，姜欣彤，李琢伟，
申请(专利权)人：吉林省养易多科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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