【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
技术实现思路
【技术保护点】
1.一种在培养物中扩增细胞群的方法，其包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤(b)中产生的所述细胞群不具有经修饰的基因组。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述一种或多种瞬时永生化因子包含端粒酶逆转录酶(TERT)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)、SV40 T抗原、Epstein-Barr病毒(EBV)、腺病毒E1蛋白、人乳头瘤病毒(HPV)E6蛋白、HPV E7蛋白、c-myc、v-myc、Ras或小分子。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述一种或多种瞬时永生化因子可以是细胞衰老因子的抑制剂，其包含p15、p16、p27、p18或p53的抑制剂。
5.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中所述一种或多种瞬时永生化因子包含mRNA、siRNA、小分子、质粒、小环或蛋白质。
6.根据权利要求1所述的方法，其中所述一种或多种瞬时永生化因子进一步包含CRISPRa或CRISPRi。
7.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中所述细胞群包含原代细胞。
8.根据权利要求7所述的方法
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述肌细胞包含肌卫星细胞。
10.根据权利要求9所述的方法，其中所述细胞包含牛细胞。
11.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中进一步包括(c)在没有所述一种或多种永生化因子的培养条件下培养步骤(b)后产生的细胞群达足够的时间，以在没有外源永生化因子的情况下产生细胞。
12.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中所述一种或多种瞬时永生化因子是至少两种永生化因子。
13.根据权利要求12所述的方法，其中所述一种或多种瞬时永生化因子是(a)端粒酶逆转录酶(TERT)并且靶向细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)；(b)TERT和BmiI(p16抑制剂)；(c)TERT+细胞周期抑制剂(p15、p16、CDK4、BMi1等)；(d)端粒酶延伸因子和克服G1-S期细胞周期检查点的因子(例如，p15抑制剂、p16抑制剂、CDK3、Bmi1等)及(e)其组合。
14.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中与未经工程化的细胞相比，所述细胞的增殖以一致的倍增速率至少进行约50次倍增。
15.根据权利要求13所述的方法，其中所述细胞的增殖是未经工程化的细胞的倍增速率的至少50％或75％。
16.通过上述权利要求中任一项所述的方法所产生的体外衍生的细胞群。
17.包含权利要求16的细胞的食品，其中所述细胞是未经遗传修饰的。
18.用于大规模产生包含肌细胞群的体外培养的肉制品的方法，所述方法包括：
19.根据权利要求18所述的方法，其中所述一种或多种瞬时永生化因子包含端粒酶逆转录酶(TERT)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)、Bmi1或SV40T抗原。
20.根据权利要求18所述的方法，其中所述一种或多种瞬时永生化因子可以是细胞衰老因子的抑制剂，其包含p15、p16、p27、p18或p53的抑制剂。
21.根据权利要求18-20中任一项所述的方法，其中所述一种或多种瞬时永生化因子包含mRNA、siRNA、小分子、质粒、小环或蛋白质。
22.根据权利要求18-21中任一项所述的方法，其中所述一种或多种瞬时永生化因子进一步包含CRISPRa或CRISPRi。
23.根据权利要求18-22中任一项所述的方法，其中所述细胞群包含原代细胞。
24.根据权利要求18-23中任一项所述的方法，其中所述细胞群包含肌细胞。
25.根据权利要求18-23中任一项所述的方法，其中所述肌细胞包含肌卫星细胞。
26.根据权利要求18-23中任一项所述的方法，其中所述细胞包含牛细胞。
27.根据权利要求1-15和18-24中任一项所述的方法，其中所述细胞包含海鲜细胞。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种在培养物中扩增细胞群的方法，其包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤(b)中产生的所述细胞群不具有经修饰的基因组。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述一种或多种瞬时永生化因子包含端粒酶逆转录酶(tert)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(cdk4)、sv40 t抗原、epstein-barr病毒(ebv)、腺病毒e1蛋白、人乳头瘤病毒(hpv)e6蛋白、hpv e7蛋白、c-myc、v-myc、ras或小分子。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述一种或多种瞬时永生化因子可以是细胞衰老因子的抑制剂，其包含p15、p16、p27、p18或p53的抑制剂。
5.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中所述一种或多种瞬时永生化因子包含mrna、sirna、小分子、质粒、小环或蛋白质。
6.根据权利要求1所述的方法，其中所述一种或多种瞬时永生化因子进一步包含crispra或crispri。
7.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中所述细胞群包含原代细胞。
8.根据权利要求7所述的方法，其中所述细胞群包含肌细胞。
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述肌细胞包含肌卫星细胞。
10.根据权利要求9所述的方法，其中所述细胞包含牛细胞。
11.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中进一步包括(c)在没有所述一种或多种永生化因子的培养条件下培养步骤(b)后产生的细胞群达足够的时间，以在没有外源永生化因子的情况下产生细胞。
12.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中所述一种或多种瞬时永生化因子是至少两种永生化因子。
13.根据权利要求12所述的方法，其中所述一种或多种瞬时永生化因子是(a)端粒酶逆转录酶(tert)并且靶向细胞周期蛋白依赖性激酶4(cdk4)；(b)tert和bmii(p16抑制剂)；(c)tert+细胞周期抑制剂(p15、p16、c...
【专利技术属性】
技术研发人员：D·L·卡普兰，A·斯陶特，J·小羽恩，N·卢比奥，
申请(专利权)人：塔夫茨大学理事会，
类型：发明
国别省市：
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