本发明专利技术涉及一种陶瓷抗细菌性能的检测方法，检测步骤包括：样品制备及前处理；设备选型及试剂、培养基配制；菌种保藏、活化及菌悬液制备；ATP浓度对数值lgCA‑相对荧光强度对数值lgIA标曲建立及接种菌液的活菌ATP浓度CA标定；样品接种、培养及洗脱回收；回收液IA测定及其活菌ATP浓度CA和TA推算；抗菌率R或抗菌活性值A计算；结果评价；其特别之处在于：应用ATP荧光光度计对以R或A表征的陶瓷抗细菌性能进行精准定量测试；规定洗脱回收接触0h及培养24h后的对照样品和抗菌样品，测定回收液IA并以lgIA表征和计算R或A；提供结果评价依据，将以先进的检测技术支撑产品质量提升和市场秩序规范。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及陶瓷的抗细菌性能测试方法，具体是一种应用atp荧光光度计对以抗菌率r或抗菌活性值a表征的抗菌陶瓷抗细菌性能进行检测。
技术介绍
1、中国陶瓷生产历史悠久，陶瓷年产量约占世界总产量的90％，年出口量逾40亿件；其中日用陶瓷、建筑陶瓷、卫生陶瓷分别占据世界总产量的65％、60％和40％，但陶瓷总产值却仅为世界总产值的10％，产品科技含量低导致的同质化竞争愈演愈烈。近年来，采用新型抗菌技术改造传统陶瓷生产工艺已成为国内优势陶企转型发展的主攻方向，抗菌技术在陶瓷产业的应用和普及势不可挡，抗菌功能成为陶瓷产品极具特色的一个“卖点”；但现有检测技术的滞后却严重制约着产业发展。
2、目前，国内外抗菌材料性能检测技术体系主要针对细菌和真菌，各国抗细菌性能测试方法原理多基于对细菌进行分离培养的平板计数法，一是日本工业标准提出的贴膜培养和浸渍定量试验方法；二是源自美国纺织业的抑菌环法；三是国际通用的振荡烧瓶法；四是源于美国纺织企业的滴下法；五是日本企业针对光催化型抗菌制品研发的盖玻片法。截至目前，我国在借鉴国外相关方法的基础上先后制定jc/t 897-2002(2014年修订)《抗菌陶瓷制品抗细菌性能》和gb/t 28116-2011《抗菌骨质瓷》。但现有抗细菌性能检测方法在
技术实现思路
和实际应用中存在以下共性问题：一是所涉实验菌种过少，难以满足企业与时俱进的新品研发与质控需求；二是实验过程繁琐，相关操作受实验员专业经验影响，测试误差大，缺乏可比性；三是测试周期在48小时～72小时之间，时间及经济成本高。
>技术实现思路1、本专利技术要解决的技术问题是提供一种应用atp荧光光度计对以抗菌率r或抗菌活性值a表征的抗菌陶瓷抗细菌性能进行检测的方法，能够解决抗菌陶瓷乃至其他抗菌材料及制品抗细菌性能精准定量测试问题。
2、为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是：
3、一种抗菌陶瓷抗细菌性能的检测方法，包括：1.样品制备及前处理；2.设备选型及试剂、培养基配制；3.菌种保藏、活化及菌悬液制备；4.atp浓度对数值lgca-相对荧光强度对数值lgia标准曲线建立及接种菌液活菌atp浓度ca标定；5.样品接种、培养及洗脱回收；6.回收液相对荧光强度值ia测定；7.回收液活菌atp浓度ca和ta推算以及抗菌率r和抗菌活性值a计算；8.结果评价；其特征在于，应用atp荧光光度计对以抗菌率r或抗菌活性值a表征的抗菌陶瓷抗细菌性能进行精准定量测试的atp生物荧光lgca-lgia标准曲线法，具体的：
4、在回收液相对荧光强度值ia测定中：
5、明确对照样品和抗菌样品的数量、尺寸及吸水率要求，对样品采取灭菌和吸水处理；将试验标准菌株进行传代、活化后，取连续转接2次的新鲜细菌培养物制备菌悬液并对其菌数进行初筛，用试验菌种培养液将1.0×10-3mol/l的atp标准原液稀释为高、低浓度标准系列溶液：7.0×10-9mol/l、7.0×10-8mol/l、7.0×10-7mol/l和4.2×10-11mol/l、4.2×10-10mol/l、4.2×10-9mol/l，并测定其相对荧光强度值ia；绘制两条相应浓度的lgca-lgia标准曲线，推导得出高浓度曲线方程式y＝aa0x+ba0、低浓度曲线方程式y＝aax+ba和高浓度曲线线性相关系数ra02、低浓度曲线线性相关系数ra2，对细菌总量为6.0×108cfu/ml的菌悬液进行10倍梯度稀释后，测定其相对荧光强度值ia，根据高浓度标准曲线方程式y＝aa0x+ba0推算相应的活菌atp浓度ca；经调整得到ca范围为5.0×10-8mol/l～9.0×10-8mol/l的接种菌液；然后，向各组对照样品和抗菌样品待测釉面分别滴加0.3ml菌液，立即用4.7ml洗脱液对6组0h接触样品进行洗脱回收；应用atp荧光光度计测定回收液的相对荧光强度值iac0ij、iat0ij，根据低浓度标准曲线方程式y＝aax+ba推算其活菌atp浓度caoij和taoij；同时，将6组24h接触样品密封于无菌平皿内，37℃±1℃、90％±2％rh培养24h±2h后；采用与0h接触样品相同的方式回收釉面残留菌并测定其回收液的相对荧光强度值iactij、iattij，推算相应的活菌atp浓度catij和tatij；其中，如果仪器检测上限无法达到10-7mol/l量级或高浓度标准曲线的线性较差，可将其atp浓度系列改为7.0×10-10mol/l、7.0×10-9mol/l、7.0×10-8mol/l；
6、在抗菌率r及抗菌活性值a计算中：
7、根据atp低浓度标准曲线lgca-lgia的线性方程式y＝aax+ba，以0h接触及24h培养后每件对照样品和抗菌样品回收液的相对荧光强度测定值和作为基础数据；在试验有效条件下，计算其经24h培养后的细菌增长值fij、gij以及抗菌率rij和抗菌活性值aij；对每组样品的rij和aij取算术平均值得到相应的ri和ai；每批抗菌陶瓷样品的抗菌率r和抗菌活性值a为其3组样品ri和ai的算术平均值；并明确相关数据修约和测量不确定度要求；
8、在结果评价中：
9、参考卫生行业通用做法和相关抗菌产品标准要求，确定抗细菌性能分级判定标准；当某组/件抗菌陶瓷样品的抗菌率ri/rij或抗菌活性值ai/aij与其他两组/四件样品的抗细菌性能相比至少相差一个水平级时，重新提取一组/件样品重复实验；计算其经atp生物荧光lgca─lgia标准曲线法测得的抗菌率或抗菌活性值；如果前后两组/件抗菌陶瓷样品抗细菌性能水平相同，则弃之；取另外两组/四件剩余样品抗菌率ri/rij或抗菌活性值ai/aij的算术平均值作为该批次/组抗菌陶瓷样品抗细菌性能的评价结果。
10、采用上述技术方案的本专利技术，与现有技术相比，有益效果是：
11、(1)先进性：应用现代精密仪器—atp荧光光度计作为测试设备，达到了活菌atp浓度测定和陶瓷抗细菌性能检测的现代化；可有效降低实验过程中人为因素影响，避免了传统平皿培养法普遍存在的较大误差；能够确保检测结果的定量化，同时大幅度提高检测数据的准确性；检测技术具备一定的先进性。
12、(2)科学性：根据atp荧光分析法测试原理，建立了适用于多菌种的活菌atp浓度对数值lgca─相对荧光强度对数值lgia标准曲线；构建了抗菌陶瓷抗细菌性能atp生物荧光实时定量分析方法的数学模型；同时，兼顾不同国家消费者认知习惯，采取抗菌率r及抗菌活性值a为相关性能评价指标，提高了检测方法的科学性和通用性。
13、(3)创新性：与现行操作繁、误差大、周期长的传统方法相比，本方法在测试过程中引入自动化和智能化水平较高的atp荧光光度计，极大地简化了实验步骤，实现了陶瓷抗细菌性能检测结果的精准化和定量化并具备良好的重现性和可比性；同时大幅度缩短测试周期、降低检测成本；可有效填补目前相关测试
空白。
14、(4)前瞻性：建立了以lgca、lgia线性关系本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种陶瓷抗细菌性能的检测方法，包括：①样品制备及前处理；②设备选型及试剂、培养基配制；③菌种保藏、活化及菌悬液制备；④ATP浓度对数值lgCA-相对荧光强度对数值lgIA标准曲线建立及接种菌液活菌ATP浓度CA标定；⑤样品接种、培养及洗脱回收；⑥回收液相对荧光强度值IA测定；⑦回收液活菌ATP浓度CA和TA推算以及抗菌率R和抗菌活性值A计算；⑧结果评价；其特征在于，应用ATP荧光光度计对以抗菌率R或抗菌活性值A表征的陶瓷抗细菌性能进行测试，具体的：
2.根据权利要求1所述的陶瓷抗细菌性能的检测方法，其特征在于，所述的样品制备及前处理，按下述步骤进行：
3.根据权利要求1所述的陶瓷抗细菌性能的检测方法，其特征在于，所述的菌种保藏、活化及菌悬液制备，按下述步骤进行：
4.根据权利要求1所述的陶瓷抗细菌性能的检测方法，其特征在于，所述的ATP浓度对数值lgCA-相对荧光强度对数值lgIA标准曲线建立及接种菌液活菌ATP浓度CA标定，按下述步骤进行：
5.根据权利要求1所述的陶瓷抗细菌性能的检测方法，其特征在于，所述的样品接种、培养及洗脱回收，按下述步骤进行：
6.根据权利要求1所述的陶瓷抗细菌性能的检测方法，其特征在于，所述的回收液相对荧光强度值IA测定，按下述步骤进行：
7.根据权利要求1所述的陶瓷抗细菌性能的检测方法，其特征在于，所述的回收液活菌ATP浓度CA和TA推算以及抗菌率R和抗菌活性值A计算，按下述步骤进行：
8.根据权利要求1所述的陶瓷抗细菌性能的检测方法，其特征在于，所述的结果评价，按下述步骤进行：
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【技术特征摘要】
1.一种陶瓷抗细菌性能的检测方法，包括：①样品制备及前处理；②设备选型及试剂、培养基配制；③菌种保藏、活化及菌悬液制备；④atp浓度对数值lgca-相对荧光强度对数值lgia标准曲线建立及接种菌液活菌atp浓度ca标定；⑤样品接种、培养及洗脱回收；⑥回收液相对荧光强度值ia测定；⑦回收液活菌atp浓度ca和ta推算以及抗菌率r和抗菌活性值a计算；⑧结果评价；其特征在于，应用atp荧光光度计对以抗菌率r或抗菌活性值a表征的陶瓷抗细菌性能进行测试，具体的：
2.根据权利要求1所述的陶瓷抗细菌性能的检测方法，其特征在于，所述的样品制备及前处理，按下述步骤进行：
3.根据权利要求1所述的陶瓷抗细菌性能的检测方法，其特征在于，所述的菌种保藏、活化及菌悬液制备，按下述步骤进行：
【专利技术属性】
技术研发人员：李文杰，潘北辰，黄慧超，张进杰，崔宗岩，
申请(专利权)人：李文杰，
类型：发明
国别省市：
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