【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及包含一个或多个α-l-苏呋喃糖基(tna)核苷的反义寡核苷酸以及通过引入tna核苷来调节反义寡核苷酸的特性的方法。本专利技术特别适用于反义间隔聚体寡核苷酸。
技术介绍
1、近年来，合成寡核苷酸作为治疗剂已取得了显著进展，产生了广泛的经临床验证的分子(包括反义寡核苷酸(诸如核糖核酸酶h(rna酶h)活化间隔聚体)、剪接转换寡核苷酸、微小rna抑制剂、小干扰rna(sirna)和适体)组合，这些分子通过不同机制发挥作用(s.t.crooke,antisense drug technology:principles,strategies,and applications,第2版boca raton,fl:crc press,2008)。
2、可论证地，最成功的修饰之一是引入硫代磷酸酯键合，其中非桥接的磷酸氧原子中的一个被硫原子替换(eckstein,antisense and nucleic acid drug development2009；10:117-121)。与未经修饰的磷酸二酯类似物相比，硫代磷酸寡脱氧核苷酸表现出增加的蛋白质结合以及明显更高的核溶降解稳定性，并因此在血浆、组织和细胞中的半衰期更高。这些关键特征已经使得开发了第一代寡核苷酸疗法，并通过诸如锁核酸(lna)等后代修饰为寡核苷酸疗法的进一步发展打开了大门。其他修饰包括锁核酸(lna)以及各种其他经修饰的核苷。例如，tna已用于例如双链sirna分子中并以低聚物的形式使用(matsuda等人,xxiii international roun
3、然而，仍然需要稳定、安全且有效的基于反义寡核苷酸的治疗剂。
技术实现思路
1、本专利技术人已经发现，可以将一个或多个α-l-苏呋喃糖基(tna)核苷引入至反义寡核苷酸中，特别是引入至反义间隔聚体寡核苷酸中，以调节反义寡核苷酸的特性。令人惊奇的是，当将tna修饰引入至如本文所述的间隔聚体设计中时，这些修饰可以产生具有对于治疗用途来说有利的特性的有效分子。
2、因此，本专利技术涉及包含至少一个tna核苷的反义寡核苷酸，特别涉及包含至少一个tna核苷的反义间隔聚体寡核苷酸。
3、本专利技术还涉及一种反义间隔聚体寡核苷酸，其包含能够募集核糖核酸酶(rna酶)h的式5'-f-g-f'-3'(i)的连续核苷酸序列，其中该连续核苷酸序列包含至少一个tna核苷。
4、本专利技术还涉及一种反义间隔聚体寡核苷酸，其包含能够募集rna酶h的式5'-f-g-f'-3'(i)的连续核苷酸序列，其中
5、g为最多18个连接的核苷的间隔区域，该间隔区域包含至少3个连续dna核苷，
6、f和f'中的每一个为最多15个连接的核苷的侧翼区域，该侧翼区域独立地包含1至15个糖修饰的核苷或由其组成，并且
7、f、f'和g中的至少一个包含其是α-l-苏呋喃糖基(tna)核苷的糖修饰的核苷。
8、本专利技术还涉及一种缀合物，其包含根据本专利技术的反义间隔聚体寡核苷酸以及任选地经由接头共价连接至反义间隔聚体寡核苷酸的至少一个缀合物部分。
9、本专利技术还涉及一种根据本专利技术的反义间隔聚体寡核苷酸或缀合物的药用盐。
10、本专利技术还涉及一种药物组合物，其包含根据本专利技术的反义间隔聚体寡核苷酸、缀合物或药用盐，以及药用稀释剂、溶剂、载体、盐和/或佐剂。
11、本专利技术还涉及根据本专利技术的反义寡核苷酸、缀合物、药用盐或药物组合物，其用作药物。
12、本专利技术还涉及一种制备亲本反义间隔聚体寡核苷酸的修饰形式的方法，其中亲本反义间隔聚体包含能够募集rna酶h的式5'f-g-f'3'(i)的连续核苷酸序列，其中g为5至18个连接的dna核苷的间隔区域，并且f和f'中的每一个为最多8个连接的核苷的侧翼区域，该侧翼区域独立地包含1至8个除tna核苷外的糖修饰的核苷或由其组成，并且其中，在该修饰形式中，亲本反义间隔聚体寡核苷酸的f、f'和/或g中的至少一个核苷已被tna核苷替换，
13、该方法包括通过使核苷酸单元反应形成寡核苷酸中所包含的共价连接的连续核苷酸单元来制造修饰的反义间隔聚体寡核苷酸的步骤，其中核苷酸单元中的至少一个包含tna核苷，并且，
14、任选地纯化或分离修饰的反义间隔聚体寡核苷酸。
15、本专利技术还涉及一种通过本专利技术的方法获得或可通过本专利技术的方法获得的反义间隔聚体寡核苷酸。
16、本专利技术还涉及tna核苷酸在制备根据本专利技术的反义间隔聚体寡核苷酸中的用途。
17、在以下具体实施方式和权利要求书中提供了本专利技术的这些和其他方面以及实施方案的进一步细节。
18、具体实施方式
19、定义
20、为了可以更容易地理解本专利技术，以下定义并描述了某些术语。
21、在整个说明书中，词语“包括(comprise)”或变体诸如“包括(comprises)”或“包括(comprising)”应理解为暗示包括所陈述的整数(或组分)或者整数(或组分)组，但不排除任何其他整数(或组分)或者整数(或组分)组。
22、寡核苷酸
23、如本文所用，术语“寡核苷酸”如本领域技术人员通常理解的那样被定义为包含两个或更多个共价连接的核苷(包括经修饰的核苷或核苷酸)的分子。此类共价结合的核苷也可被称为核酸分子或寡聚物。寡核苷酸通常在实验室中通过固相化学合成、之后进行纯化来制备。当提及寡核苷酸序列时，提及的是共价连接的核苷酸或核苷的核碱基部分或其修饰的序列或顺序。本专利技术的寡核苷酸是人造的、化学合成的，且通常是纯化或分离的。核苷可以通过磷酸二酯(po)键合或通过修饰的核苷间键合连接。
24、反义寡核苷酸
25、如本文所用，术语“反义寡核苷酸”定义为能够通过与靶核酸特别是与靶核酸上的连续序列杂交来调节靶基因表达的寡核苷酸。预期的反义寡核苷酸基本上不为双链的，并因此不为sirna或短发夹rna(shrna)。优选地，本专利技术的反义寡核苷酸为单链的。应理解的是，如果分子内或分子间自身互补的程度大于跨寡核苷酸全长度的50％，那么本专利技术的单链寡核苷酸可形成发夹或分子间双链体结构(同一寡核苷酸的两个分子之间的双链体)。
26、连续核苷酸序列
27、术语“连续核苷酸序列”是指与靶核酸互补的寡核苷酸区域。该术语在本文中与术语“连续核碱基序列”和术语“寡核苷酸基序序列”可互换使用。例如，寡核苷酸的所有核苷酸可以构成连续核苷酸序列。可替代地，寡核苷酸可包含连续核苷酸序列，诸如f-g-f'间隔聚体区域，并且可以任选地包含其他核苷本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种反义间隔聚体寡核苷酸，其包含能够募集核糖核酸酶(RNA酶)H的式5'-F-G-F'-3'(I)的连续核苷酸序列，其中
2.根据权利要求1所述的反义间隔聚体寡核苷酸，其中F包含至少一个TNA核苷。
3.根据前述权利要求中任一项所述的反义间隔聚体寡核苷酸，其中F包含至少两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个或十四个TNA核苷。
4.根据前述权利要求中任一项所述的反义间隔聚体寡核苷酸，其中F的所有核苷都是TNA核苷。
5.根据前述权利要求中任一项所述的反义间隔聚体寡核苷酸，其中F'包含至少一个TNA核苷。
6.根据前述权利要求中任一项所述的反义间隔聚体寡核苷酸，其中F'包含至少两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个或十四个TNA核苷。
7.根据前述权利要求中任一项所述的反义间隔聚体寡核苷酸，其中F'的所有核苷都是TNA核苷。
8.根据前述权利要求中任一项所述的反义间隔聚体寡核苷酸，其中F、F'或者F和F'两者的糖修饰的核
9.根据前述权利要求中任一项所述的反义间隔聚体寡核苷酸，其中F、F'或者F和F'两者的所述糖修饰的核苷包含一个或多个2'-O-甲氧基乙基-RNA(2'-O-MOE)核苷。
10.根据权利要求9所述的反义间隔聚体寡核苷酸，其中，除了任何至少一个TNA核苷之外，F'和F中的所有核苷都是2'-O-MOE核苷。
11.根据前述权利要求中任一项所述的反义间隔聚体寡核苷酸，其中G包含至少一个TNA核苷，诸如至少一个、两个或三个TNA核苷。
12.根据前述权利要求中任一项所述的反义间隔聚体寡核苷酸，其中G中的至少最接近5'的核苷和最接近3'的核苷为DNA核苷。
13.根据前述权利要求中任一项所述的反义间隔聚体寡核苷酸，其中，除了任何至少一个TNA核苷之外，G的所有核苷都是DNA核苷。
14.根据前述权利要求中任一项所述的反义间隔聚体寡核苷酸，其中式5'-F-G-F'-3'(I)的所述连续核苷酸序列具有12至32个核苷的长度，诸如12至28个核苷、诸如12至26个核苷、诸如14至26个核苷、诸如14至24个核苷、诸如14至22个核苷、诸如16至22个核苷、诸如16至20个核苷。
15.根据权利要求14所述的反义间隔聚体寡核苷酸，其中所述连续核苷酸序列具有式
16.根据权利要求15所述的反义间隔聚体寡核苷酸，其中式IVa的连续核苷酸序列具有至少16个核苷的长度，并且
17.根据权利要求16所述的反义间隔聚体寡核苷酸，其中G包含至多10个连续DNA核苷，诸如9、8、7、6、5或4个连续DNA核苷。
18.根据权利要求15所述的反义间隔聚体寡核苷酸，其中式IV的连续核苷酸序列具有至少16个核苷的长度，并且
19.根据权利要求15所述的反义间隔聚体寡核苷酸，其中式IV的连续核苷酸序列具有至少16个核苷的长度，并且
20.根据前述权利要求中任一项所述的反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸为单链反义寡核苷酸。
21.一种缀合物，其包含根据前述权利要求中任一项所述的反义间隔聚体寡核苷酸以及任选地经由接头共价连接至所述寡核苷酸的至少一个缀合物部分。
22.一种根据权利要求1至20中任一项所述的反义间隔聚体寡核苷酸或根据权利要求21所述的缀合物的药用盐。
23.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至20中任一项所述的反义间隔聚体寡核苷酸、根据权利要求21所述的缀合物或根据权利要求22所述的药用盐，以及药用稀释剂、溶剂、载体、盐和/或佐剂。
24.根据权利要求1至20中任一项所述的反义寡核苷酸、根据权利要求21所述的缀合物、根据权利要求22所述的药用盐或根据权利要求23所述的药物组合物，其用作药物。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种反义间隔聚体寡核苷酸，其包含能够募集核糖核酸酶(rna酶)h的式5'-f-g-f'-3'(i)的连续核苷酸序列，其中
2.根据权利要求1所述的反义间隔聚体寡核苷酸，其中f包含至少一个tna核苷。
3.根据前述权利要求中任一项所述的反义间隔聚体寡核苷酸，其中f包含至少两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个或十四个tna核苷。
4.根据前述权利要求中任一项所述的反义间隔聚体寡核苷酸，其中f的所有核苷都是tna核苷。
5.根据前述权利要求中任一项所述的反义间隔聚体寡核苷酸，其中f'包含至少一个tna核苷。
6.根据前述权利要求中任一项所述的反义间隔聚体寡核苷酸，其中f'包含至少两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个或十四个tna核苷。
7.根据前述权利要求中任一项所述的反义间隔聚体寡核苷酸，其中f'的所有核苷都是tna核苷。
8.根据前述权利要求中任一项所述的反义间隔聚体寡核苷酸，其中f、f'或者f和f'两者的糖修饰的核苷包含至少一个包含选自由以下项组成的组的修饰的糖部分糖修饰的核苷：
9.根据前述权利要求中任一项所述的反义间隔聚体寡核苷酸，其中f、f'或者f和f'两者的所述糖修饰的核苷包含一个或多个2'-o-甲氧基乙基-rna(2'-o-moe)核苷。
10.根据权利要求9所述的反义间隔聚体寡核苷酸，其中，除了任何至少一个tna核苷之外，f'和f中的所有核苷都是2'-o-moe核苷。
11.根据前述权利要求中任一项所述的反义间隔聚体寡核苷酸，其中g包含至少一个tna核苷，诸如至少一个、两个或三个tna核苷。
12.根据前述权利要求中任一项所述的反义间隔聚体寡核苷酸，其中g中的至少最接近5'的核苷和最接近3'的核苷为dna核苷。
13.根据前述权利要求中任一项所述的反义间隔聚体寡核...
【专利技术属性】
技术研发人员：K·布莱谢尔，A·朔伊布林，S·施密特，李美玲，E·科勒，J·M·A·巴斯蒂安，H·克里斯蒂安森，H·尼马克，
申请(专利权)人：豪夫迈·罗氏有限公司，
类型：发明
国别省市：
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