【技术实现步骤摘要】
本申请涉及有机多孔材料，尤其涉及一种多孔共价有机框架磁性微球及其制备方法与应用。
技术介绍
1、微蛋白通常由少于100个氨基酸组成，也称为短开放阅读框编码多肽。微蛋白在所有生命领域的各种生物过程中发挥着非常关键的作用。微蛋白含有单一蛋白质-蛋白质相互作用(ppi)结构域，使微蛋白能够调节许多生物途径。研究发现微蛋白在心力衰竭和癌症等多种细胞活动中具有一定的调控潜力，例如，dworf和serca微蛋白在心脏组织中的钙离子平衡中发挥着重要作用。此外，cip2a-bp、miac和mp31微蛋白不仅参与肿瘤进展，对乳腺癌、脑癌等具有一定的治疗意义。可见微蛋白具有极高的研究价值。
2、一般来说，质谱(ms)可以作为一种检测微蛋白的研究手段。然而，由于微蛋白尺寸小、丰度低，在微蛋白进行质谱分析时，容易被丰富的典型蛋白质掩盖，导致其无法被检测。因此，蛋白富集是进行微蛋白质谱分析前的必要步骤之一。常规的蛋白富集方法有酸沉淀法、乙腈沉淀法和分子量截留过滤法(mwco)等，这些方法中使用的刺激性化学物质可能会导致微蛋白变性，且预处理步骤多容易造成微蛋白损失，限制了在临床样品上的应用。
3、因此，需要一种快速、温和、靶向性强的微蛋白富集方法。
技术实现思路
1、鉴于上述现有技术的不足，本申请的目的在于提供一种多孔共价有机框架磁性微球及其制备方法与应用。
2、本申请的技术方案如下：
3、本申请的第一方面，提供一种多孔共价有机框架磁性微球的制备方法，包括步骤：
4、将磁性二氧化硅颗粒分散在乙腈中，加入1,3,5-三(4-氨基苯基)苯和2,5-二乙烯基对苯醛，再加入乙酸，在室温下反应，得到所述多孔共价有机框架磁性微球；其中，所述1,3,5-三(4-氨基苯基)苯、所述2,5-二乙烯基对苯醛和所述乙酸的体积比为20：20：4～9。
5、可选地，所述磁性二氧化硅颗粒的制备方法包括：提供磁性颗粒；在所述磁性颗粒的表面包覆二氧化硅，得到所述磁性二氧化硅颗粒。
6、可选地，所述磁性颗粒的制备方法包括：将六水三氯化铁和无水乙酸钠溶于乙二醇中，得到混合液；将所述混合液转移至高压釜中并在200℃条件下静置12h，得到固体混合物；将所述固体混合物冷却至室温，分别用去离子水和乙醇洗涤多次，得到所述磁性颗粒。
7、可选地，用stober法在所述磁性颗粒的表面包覆二氧化硅。
8、可选地，所述在所述磁性颗粒的表面包覆二氧化硅包括步骤：将所述磁性颗粒溶解在乙醇、去离子水和氨水的混合溶液中，得到分散液；向所述分散液中滴加硅酸乙酯，并在70℃下搅拌混合，得到磁性二氧化硅颗粒前体；将所述磁性二氧化硅颗粒前体分别使用去离子水和氢氧化钠清洗多次，得到所述磁性二氧化硅颗粒；所述乙醇、去离子水和氨水的混合溶液中，所述乙醇、所述去离子水和所述氨水的体积比为40：1：1。
9、可选地，所述在室温下反应后，还包括步骤：将在室温下反应的产物分别使用四氢呋喃和乙醇清洗多次，并在60℃下真空干燥，得到所述多孔共价有机框架磁性微球。
10、本申请的第二方面，提供一种采用上述多孔共价有机框架磁性微球的制备方法制备的多孔共价有机框架磁性微球。
11、可选地，所述多孔共价有机框架磁性微球包括多孔共价有机框架基材以及接枝在所述多孔共价有机框架基材上的接枝部分；所述多孔共价有机框架基材为磁性二氧化硅颗粒；所述接枝部分为1,3,5-三(4-氨基苯基)苯和1,4-二醛基-2,5-二乙烯基苯醛缩合反应的产物。
12、本申请的第三方面，提供一种上述多孔共价有机框架磁性微球在富集微蛋白中的应用。
13、可选地，所述微蛋白的来源包括血浆、组织提取物、细胞裂解产物中的至少一种。
14、与现有技术相比，本申请具有如下优势：
15、本申请通过1,3,5-三(4-氨基苯基)苯和2,5-二乙烯基对苯醛的缩合反应在磁性二氧化硅颗粒上完成多孔共价有机框架磁性微球的构建，通过控制反应过程中乙酸的添加量，调整多孔共价有机框架磁性微球的孔径和疏水性，以实现对微蛋白快速、温和、有效的富集。此外，使用本申请制备的共价有机框架磁性微球进行微蛋白的富集，具有样品需求量小，操作简单、材料重复利用率高等优点。
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1.一种多孔共价有机框架磁性微球的制备方法，其特征在于，包括步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述磁性二氧化硅颗粒的制备方法包括：
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述磁性颗粒的制备方法包括：
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，采用Stober法在所述磁性颗粒的表面包覆二氧化硅。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述在所述磁性颗粒的表面包覆二氧化硅包括步骤：
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述在室温下反应后，还包括步骤：
7.一种权利要求1至6任一项所述的多孔共价有机框架磁性微球的制备方法制备的多孔共价有机框架磁性微球。
8.根据权利要求7所述的多孔共价有机框架磁性微球，其特征在于，所述多孔共价有机框架磁性微球包括多孔共价有机框架基材以及接枝在所述多孔共价有机框架基材上的接枝部分；
9.一种权利要求7或8所述的多孔共价有机框架磁性微球在富集微蛋白中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于
...【技术特征摘要】
1.一种多孔共价有机框架磁性微球的制备方法，其特征在于，包括步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述磁性二氧化硅颗粒的制备方法包括：
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述磁性颗粒的制备方法包括：
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，采用stober法在所述磁性颗粒的表面包覆二氧化硅。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述在所述磁性颗粒的表面包覆二氧化硅包括步骤：
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所...
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