【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种检测试剂盒，特别涉及一种降钙素原化学发光免疫检测试剂盒及配制方法，属于免疫检测。
技术介绍
1、降钙素原(pct)是降钙素的激素原，是由116个氨基酸组成的分子量约为13kda的蛋白质。健康个体中的pct水平通常小于0.1ng/ml。pct水平在感染后2-6小时内增加，并在6-12小时内达到峰值。在脓毒症发展的最初几小时内，早期发现和适当管控可改善患者的预后。pct对细菌感染更具特异性，可以帮助鉴别诊断非细菌性感染与细菌性感染(或脓毒症)；
2、目前临床检测醛固酮的常见方法有酶联免疫吸附法、放射免疫分析法、酶促化学发光法，但这些方法都存在着一些不足之处；
3、一、酶联免疫吸附法
4、酶联免疫吸附法(elisa)被广泛应用，但该方法也存在着下述的不足之处：
5、1)使用12×8型、6×8型、8×12型或整板型96孔专用微孔板作为抗原包被用具和反应容器，在使用时只能分成12批次、6批次、8批次或整板一次使用，无法进行独立的、单人份的检测；
6、2)定量测定所用的试剂种类较多，每一种检测试剂都要用试剂瓶来盛装，并且每使用一种试剂时都需要更换吸液嘴来分别加注到微孔板的微孔中，不但试剂瓶种类多，加注试剂的操作也极为繁琐；
7、3)缺少对检测信息的相应标注，只能通过查看试剂盒外包装盒的标识才能了解或知悉检测试剂的生产批号及有效期信息，而且所知悉的信息在检测过程中不受控，具有很大的随意性；
8、4)检测试剂在检测过程中处于开放的空间，容易引起
9、5)检测过程多采用手工操作，试剂或样本的加量不很精确，操作过程极为繁琐和复杂，容易发生操作差错，检测结果的准确度和精密度较差；
10、6)在检测项目成套试剂的数量配制及使用上均为项目数×48/96人份，如果需要检测10个项目，则试剂的配制及使用数须为10×48/96人份，如果只有一份样本需要检测10个不同的项目，也需要配制10×48/96人份的试剂，存在着不够经济合理的缺点；
11、二、放射免疫分析法
12、放射免疫分析方法放射性污染大、加样步骤繁琐、操作复杂、操作时间长、测定结果不稳定、试剂保存时间短、试剂盒操作自动化程度低、配套仪器价格昂贵等不足之处；
13、三、化学发光法
14、化学发光法按发光原理可分为直接化学发光和酶促化学发光；
15、酶促化学发光主要有辣根过氧化物酶(hrp)和碱性磷酸酶两种，但都有一定的局限性，辣根过氧化物酶主要缺点为：鲁米诺在没有辣根过氧化物酶存在情况下，也会被h202氧化自身发光，本底相对较高，影响信噪比，反应动力学复杂，影响因素多，结果不够稳定，要得到灵敏度高且平台期长的底物不容易。碱性磷酸酶主要缺点为：底物达到平台期的时间长，底物成本高，导致检测成本高，患者负担重。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种降钙素原化学发光免疫检测试剂盒及配制方法，具有特异性强、灵敏度高、检测时间短、检测结果具有更高的准确性与重复性、操作简单的优点，解决了上述
技术介绍
所提出的问题。
2、为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种降钙素原化学发光免疫检测试剂盒，包括降钙素原单克隆抗体包被纳米磁微粒、稀释液和化学发光物质标记的降钙素原抗体。
3、一种降钙素原化学发光免疫检测试剂盒的配制方法，包括以下步骤：
4、s1：取羧基磁微粒溶液，加入磁微粒清洗液充分混匀后，放置于磁分离器上，直至上清无混浊，弃上清，留取磁微粒，重复清洗5次后，加入活化缓冲液重悬，加入新配制的活化液，活化磁微粒表面羧基；加入降钙素原单克隆抗体，室温反应2-3h，去除上清，用1％的bsa封闭液重悬继续反应1h，得到降钙素原单克隆抗体包被纳米磁微粒，加入磁微粒保存液重悬；
5、s2：用蛋白保存液将阻断剂稀释到0.5mg/ml，得到稀释液；
6、s3：取降钙素原单克隆抗体，用超滤离心管进行超滤离心，将其置换为标记缓冲液，进行离心；加入吖啶酯原液，混匀，进行标记；标记反应结束后，加入封闭缓冲液；封闭后用超滤离心管进行超滤离心，超滤结束后，得到化学发光物质标记的降钙素原抗体，用蛋白保存液保存；
7、s4：分装步骤1-3制备的试剂，组装成所述试剂盒。
8、作为本专利技术的一种优选技术方案，活化液为edc-nhs，50mg/ml-50mg/ml。
9、作为本专利技术的一种优选技术方案，所述磁微粒清洗液为tris 20mmol/l，nac1150mmol/l，t-20 0.05％，防腐剂krovin300 0.1％％，ph为7.2～7.4。
10、作为本专利技术的一种优选技术方案，所述磁微粒保存液为tris 50mmol/l，bsa 1％，t-20 0.05％，稳定剂0.05％，cmc 0.05％，防腐剂krovin300 0.1％％，ph为7.2～7.4。
11、作为本专利技术的一种优选技术方案，所述标记缓冲液的浓度为50mmol/l，ph为9.0～9.6。
12、作为本专利技术的一种优选技术方案，所述封闭液为pb 20mmol/l,bsa 1％，ph7.2～7.4。
13、作为本专利技术的一种优选技术方案，所述封闭缓冲液为pb 20mmol/l,nac1150mmol/l,赖氨酸10％，ph7.2～7.4。
14、作为本专利技术的一种优选技术方案，所述蛋白保存液为mes100mmol/l pb,bsa0.25％，防腐剂krovin300 0.1％％，ph6.5。
15、作为本专利技术的一种优选技术方案，所述降钙素原抗体与吖啶酯原液的摩尔比为20：1；所述磁微粒中的磁微粒的粒径为1-3μm。
16、与相关技术相比较，本专利技术提供的一种降钙素原化学发光免疫检测试剂盒及配制方法具有如下有益效果：
17、1、选择吖啶酯作为标记材料，并应用于化学发光免疫分析系统，该发光体系为直接化学发光，与传统的酶促化学发光相比，该反应不需要酶的参与，更加节约成本；
18、2、选用的吖啶酯化学发光免疫分析系统检测，磁微粒重悬后1h内不会有下沉，形成稳定的胶体溶液；
19、3、选用的吖啶酯化学发光免疫分析系，加入特殊稳定剂，可有效延长试剂的稳定性；
20、4、选用的吖啶酯化学发光免疫分析系统重复性高，批内及批间差均在5％以内。
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1.一种降钙素原化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，包括降钙素原单克隆抗体包被纳米磁微粒、稀释液和化学发光物质标记的降钙素原抗体。
2.一种降钙素原化学发光免疫检测试剂盒的配制方法，其特征在于，包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的降钙素原化学发光免疫检测试剂盒的配制方法，其特征在于，活化液为EDC-NHS，50mg/ml-50mg/ml。
4.根据权利要求2所述的降钙素原化学发光免疫检测试剂盒的配制方法，其特征在于，所述磁微粒清洗液为Tris 20mmol/L，NaC1 150mmol/L，T-200.05％，防腐剂KroVin3000.1％％，pH为7.2～7.4。
5.根据权利要求2所述的降钙素原化学发光免疫检测试剂盒的配制方法，所述磁微粒保存液为Tris 50mmol/L，BSA 1％，T-20 0.05％，稳定剂0.05％，CMC 0.05％，防腐剂KroVin300 0.1％％，pH为7.2～7.4。
6.根据权利要求2所述的降钙素原化学发光免疫检测试剂盒的配制方法，所述标记缓冲液的浓度为50mmol/L，
7.根据权利要求2所述的降钙素原化学发光免疫检测试剂盒的配制方法，所述封闭液为PB 20mmol/L,BSA 1％，pH7.2～7.4。
8.根据权利要求2所述的降钙素原化学发光免疫检测试剂盒的配制方法，所述封闭缓冲液为PB 20mmol/L,NaC1 150mmol/L,赖氨酸10％，pH7.2～7.4。
9.根据权利要求2所述的降钙素原化学发光免疫检测试剂盒的配制方法，所述蛋白保存液为MES100mmol/L PB,BSA 0.25％，防腐剂KroVin300 0.1％％，pH6.5。
10.根据权利要求2所述的降钙素原化学发光免疫检测试剂盒的配制方法，所述降钙素原抗体与吖啶酯原液的摩尔比为20：1；所述磁微粒中的磁微粒的粒径为1-3μm。
...【技术特征摘要】
1.一种降钙素原化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，包括降钙素原单克隆抗体包被纳米磁微粒、稀释液和化学发光物质标记的降钙素原抗体。
2.一种降钙素原化学发光免疫检测试剂盒的配制方法，其特征在于，包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的降钙素原化学发光免疫检测试剂盒的配制方法，其特征在于，活化液为edc-nhs，50mg/ml-50mg/ml。
4.根据权利要求2所述的降钙素原化学发光免疫检测试剂盒的配制方法，其特征在于，所述磁微粒清洗液为tris 20mmol/l，nac1 150mmol/l，t-200.05％，防腐剂krovin3000.1％％，ph为7.2～7.4。
5.根据权利要求2所述的降钙素原化学发光免疫检测试剂盒的配制方法，所述磁微粒保存液为tris 50mmol/l，bsa 1％，t-20 0.05％，稳定剂0.05％，cmc 0.05％，防腐剂krovin300 0.1％％，ph为7...
【专利技术属性】
技术研发人员：石晓天，石凯，
申请(专利权)人：重庆诺达医疗器械股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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