【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及用于rna甲基化检测的组合物，尤其是用于检测rna中m5c甲基化的组合物。本专利技术还涉及该组合物在白血病诊断中的应用。
技术介绍
1、急性髓系白血病(acute myeloid leukemia，aml)为起源于骨髓的髓系造血干/祖细胞的恶性疾病，是成年人急性白血病中的常见的形式。aml占小儿白血病的约30％。aml临床表现为贫血、出血、感染和发热、脏器浸润、代谢异常等，如不及时治疗常可危及生命。
2、目前对包括aml在内的各种白血病的诊断大多建立在骨髓细胞形态学检验的基础之上。例如，医生对患者进行骨髓穿刺获取抽吸液，染色后通过电子显微镜进行观察，统计计算各类细胞占比，再根据做出诊断。这种aml诊断方法费时费力，并且依赖于检验人员的专业水平，检测结果有一定的主观性。另外，如果检测需要进行骨髓穿刺，也会增加患者痛苦。对aml的诊断还包括通过分子遗传学检测发现基因突变和基因重排等遗传特征，只是这类检测方法往往侧重于特定的aml分型，并不适合于早期aml诊断。本领域还报道了一些用于诊断aml的生物标志物，但目前为止都还未在临床上广泛应用。
3、继dna胞嘧啶甲基化被发现后，本领域技术人员也发现了细胞中存在rna胞嘧啶甲基化(m5c)现象，并且已经发现了与rna胞嘧啶甲基化相关的一系列蛋白酶及其作用机制。目前，已经在一些疾病中发现存在差异性rna甲基化现象，但还未见有利用这些甲基化差异进行aml诊断的报道。
技术实现思路
1、在一方面，本文通过了一种
2、1)第一扩增引物对，其核苷酸序列分别如seq id no：5和6所示；第一阻断引物，其核苷酸序列如seq id no：11所示；
3、2)第二扩增引物对，其核苷酸序列分别如seq id no：8和9所示；第二阻断引物，其核苷酸序列如seq id no：12所示，
4、其中所述第一阻断引物和所述第二阻断引物的3’端核苷酸为经修饰核苷酸，以便阻止dna聚合酶以所述第一阻断引物或所述第二阻断引物为引物进行引物延伸。
5、在一些实施方案中，所述rna甲基化检测组合物还包括第一荧光探针，其核苷酸序列如seq id no：7所示；第二荧光探针，其核苷酸序列如seq id no：10所示。
6、在一些实施方案中，所述经修饰核苷酸为3’-oh被spacer c3修饰的核苷酸。
7、在一些实施方案中，所述第一荧光探针和第二荧光探针均为taqman探针。
8、在一些实施方案中，所述第一荧光探针和第二荧光探针的5’端连接有不同的荧光基团。
9、在一些实施方案中，所述第一荧光探针在5’端连接有荧光基团texas red，3’端连接有荧光淬灭基团bhq2；所述第二荧光探针在5’端连接为荧光基团fam，3’端连接有荧光淬灭基团bhq2。
10、另一方面，本文还提供了上述rna甲基化检测组合物在制备用于诊断急性髓系白血病的诊断试剂盒中的应用。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.RNA甲基化检测组合物，包括：
2.如权利要求1所述的RNA甲基化检测组合物，其中还包括第一荧光探针，其核苷酸序列如SEQ ID NO：7所示；第二荧光探针，其核苷酸序列如SEQ ID NO：10所示。
3.如权利要求1所述的RNA甲基化检测组合物，其中所述经修饰核苷酸为3’-OH被Spacer C3修饰的核苷酸。
4.如权利要求2所述的RNA甲基化检测组合物，其中所述第一荧光探针和第二荧光探针均为Taqman探针。
5.如权利要求4所述的RNA甲基化检测组合物，其中所述第一荧光探针和第二荧光探针的5’端连接有不同的荧光基团。
6.如权利要求5所述的RNA甲基化检测组合物，其中所述第一荧光探针在5’端连接有荧光基团TEXAS RED，3’端连接有荧光淬灭基团BHQ2；所述第二荧光探针在5’端连接为荧光基团FAM，3’端连接有荧光淬灭基团BHQ2。
7.如权利要求1所述的RNA甲基化检测组合物，其中所述RNA为mRNA。
8.权利要求1-7任一项所述的RNA甲基化检测组合物在制备用于诊断急性髓系
...【技术特征摘要】
1.rna甲基化检测组合物，包括：
2.如权利要求1所述的rna甲基化检测组合物，其中还包括第一荧光探针，其核苷酸序列如seq id no：7所示；第二荧光探针，其核苷酸序列如seq id no：10所示。
3.如权利要求1所述的rna甲基化检测组合物，其中所述经修饰核苷酸为3’-oh被spacer c3修饰的核苷酸。
4.如权利要求2所述的rna甲基化检测组合物，其中所述第一荧光探针和第二荧光探针均为taqman探针。
5.如权利要求4所述的rna甲基化检测...
【专利技术属性】
技术研发人员：李松谕，刘雅，杨志刚，张幸，黎光儒，吴旻晖，贾志荣，
申请(专利权)人：湛江中心人民医院，
类型：发明
国别省市：
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