【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种化合物单体制备领域，具体涉及一种高纯度北美芹素的制备及其质量检测方法。
技术介绍
1、化学对照品又称标准品，是中药质量标准研究、质量检测和质量检测的实物对照，中药化学对照品的研究，是中药标准化研究的重要部分，对产品的质量评价，特别是在药品生产的质量检测中，中药化学对照品起着极其重大的作用，是中药质量检测的基础与核心。
2、北美芹素是一种酯类化学成分，是植物活性成分之一，也是许多植物和药品标准质量检测的指标性成分。目前国内外对北美芹素的系统研究未见报道，参照中药化学对照品(供含量测定用)的技术要求，对北美芹素化学对照品进行研究，建立北美芹素对照品的批量提取工艺、纯度与含量以及杂质检查的分析测定方法，从而建立北美芹素化学对照品的技术标准，为其作为中药化学对照品及药材和制剂的质量标准研究提供科学基础和保证。
3、北美芹素作为植物、药材及其产品的化学对照品，是质量检测的技术关键，众多企业、科研和检验部门都需要高纯度的北美芹素对照品，由于北美芹素在药材中的含量低，提取分离技术要求很高、难度很大。本专利技术进行北美芹素中药化学标准品制备及其质量检测技术研究，解决高纯度北美芹素化学对照品的问题，对中药现代化的作用是显而易见的，具有重大的实际意义和学术价值。
4、现有技术从不同伞形科药材中提取分离北美芹素，虽分离纯度能达到中药化学对照品的要求，但其药材中北美芹素含量相对较低，提取成本较高，无法满足市场需求。
技术实现思路
1、本专利技术为首次从
2、本专利技术是从伞形科前胡属植物华中前胡peucedanum medicum dunn的干燥根中经提取、分离、精制、纯化而得到的北美芹素，化学名：[(9r,10r)-9-乙酰氧基-8,8-二甲基-2-氧代-9,10-二氢吡喃[2,3-f]苯并吡喃-10-基](z)-2-甲基丁-2-烯酸酯。其结构式如下：
3、
4、本专利技术的目的是通过以下方案来实现的：
5、一种高纯度北美芹素的制备方法，包括以下步骤：取伞形科前胡属植物华中前胡的干燥根，粉碎，加甲醇提取，滤过，合并滤液，减压浓缩，干燥，得到浸膏，经硅胶柱层析，第一次用石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，收集含北美芹素的流分，再次用石油醚-乙酸乙酯洗脱，即得纯度为重量含量80～90％的北美芹素粗结晶；将北美芹素粗结晶用制备高效液相色谱法分离纯化，收集北美芹素组分，并对所收集的每一份洗脱液利用hplc分析，合并保留时间相同且纯度在90％-98％之间和纯度在98％以上的北美芹素，减压浓缩，得到纯度90％-98％之间及98％以上的北美芹素。
6、作为优选方案，本专利技术所述的一种高纯度北美芹素的制备方法，用8～15倍体积量的甲醇，超声提取30～60min，重复提取1～3次。
7、作为优选方案，本专利技术所述的一种高纯度北美芹素的制备方法，先后两次洗脱中，第一次石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱配比为1:0～0:1；第二次石油醚-乙酸乙酯配比为：10:1。
8、作为优选方案，本专利技术所述的一种高纯度北美芹素的制备方法，所述的制备高效液相色谱法色谱柱为c-18柱，利用统计比为70:30的甲醇-水为流动相洗脱，检测波长321nm，流速1ml/min，柱温30-35℃。
9、作为优选方案，本专利技术一种高纯度北美芹素的制备方法，所述的hplc分析条件为：色谱柱为c-18柱；流动相为甲醇-水＝70:30；检测波长为321nm；流速为1ml/min。
10、本专利技术还提供了一种北美芹素的检测方法，其采用薄层色谱分析方法：取北美芹素适量，用甲醇制成一定浓度的北美芹素溶液，在同一硅胶板上，按不同的点样量梯度点样，置展开缸分别展开，取出，晾干，置紫外灯下检视，波长选择365nm，结果在goodlook-1000型薄层色谱成像系统中，可见蓝色的单一的荧光斑点。
11、薄层色谱的展开剂系统包括：系统(1)石油醚(60-90)-乙酸乙酯的配比为2∶1；系统(2)环己烷-乙酸乙酯-甲醇的配比为8:2:0.5；系统(3)三氯甲烷-丙酮-环已烷的配比为9:1:0.5。
12、另外本专利技术还提供了一种北美芹素的检测方法，其采用高效液相色谱分析方法测定含量：精密称取北美芹素对照品适量，加甲醇水溶液制成一定浓度的北美芹素溶液，注入液相色谱仪，用面积归一化法计算含量，结果系统测定对照品含量；
13、峰纯度检测：取北美芹素对照品适量，按流动相系统，在高效液相色谱仪上，用二极管阵列dad检测器进行峰纯度检查。
14、作为优选方案，检测方法的色谱条件为：色谱柱amethyst c18-h，规格4.6×250mm，5μm，流动相：乙腈-水或甲醇-水，梯度洗脱，流速：1ml/min，进样量：10ul。
15、作为优选方案，含量检测时，流动相为乙腈-水时，梯度洗脱方式为：0～20min，30％乙腈、20～30min，30％～50％乙腈、30～50min，50％乙腈、50～60min，50％～30％％乙腈、60～90min，30～30％％乙腈；检测波长334nm；
16、或者流动相为甲醇-水时，梯度洗脱方式为：0～20min，70％甲醇、20～30min，70％～75％甲醇、30～50min，75％甲醇、50～60min，75％～70％甲醇、60～90min，70％甲醇；检测波长：334nm；
17、峰纯度检测时，流动相为甲醇-水时，梯度洗脱方式为：0～20min，70％甲醇、20～30min，70％～75％甲醇、30～50min，75％甲醇、50～60min，75％～70％甲醇、60～90min，70％甲醇；检测波长：321nm。
18、本专利技术分离、纯化的北美芹素化学对照品，经红外光谱、紫外光谱、核磁共振、质谱以及理化检测确认化学结构。经3个展开系统，5个不同浓度的tlc检测，2个流动相系统和2个不同波长的hplc检测，同时对色谱峰用dad做纯度检查，均表明符合中药含量测定用化学对照品的要求，含量大于98％。
19、与现有技术相比，本专利技术突出的实质性特点和显著的进步是：
20、1、本专利技术首次从华中前胡中制备出纯度符合化学对照品要求(含量98％以上)的北美芹素，可解决北美芹素化学对照品的供应问题，为华中前胡药材的质量检测提供了提供科学基础和保证。
21、2、本专利技术提取工艺设计合理，工艺简单，利用醇-水溶剂提取，经过硅胶柱层析后重结晶即可得到纯度较高的北美芹素，最后经制备高效液相色谱法制备出纯度达到98％以上的北美芹素化学对照品，方法简便易行。
22、3、本专利技术分离速度快，生产周期短，成本低，适合工业化生产，有很好的应用前景及社会价值。
23、4、本专利技术采用薄层色谱法和高本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种高纯度北美芹素的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：取伞形科前胡属植物华中前胡的干燥根，粉碎，加甲醇提取，滤过，合并滤液，减压浓缩，干燥，得到浸膏，经硅胶柱层析，用石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，收集含北美芹素的流分，再次用石油醚-乙酸乙酯洗脱，即得纯度为重量含量80～90％的北美芹素粗结晶；将北美芹素粗结晶用制备高效液相色谱法分离纯化，收集北美芹素组分，并对所收集的每一份洗脱液利用HPLC分析，合并保留时间相同且纯度在90％-98％之间和纯度在98％以上的北美芹素，减压浓缩，得到纯度90％-98％之间及98％以上的北美芹素。
2.根据权利要求1所述的一种高纯度北美芹素的制备方法，其特征在于，用8～15倍体积量的甲醇，超声提取30～60min，重复1～3次。
3.根据权利要求1所述的一种高纯度北美芹素的制备方法，其特征在于，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱配比为1:0～0:1；再次用体积比10:1的石油醚-乙酸乙酯洗脱。
4.根据权利要求1所述的一种高纯度北美芹素的制备方法，其特征在于：
5.根据权利要求1所述的一种高纯度北美芹素的制备方
6.一种如权利要求1所述的制备方法制备得到的高纯度北美芹素的检测方法，其特征在于：采用薄层色谱分析方法：取北美芹素适量，用甲醇制成一定浓度的北美芹素溶液，在同一硅胶板上，按不同的点样量梯度点样，置展开缸分别展开，取出，晾干，置紫外灯下检视，波长选择365nm，结果在GoodLook-1000型薄层色谱成像系统中，可见蓝色的单一的荧光斑点。
7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于：展开剂系统包括：系统(1)石油醚-乙酸乙酯的配比为2∶1；系统(2)环己烷-乙酸乙酯-甲醇的配比为8:2:0.5；系统(3)三氯甲烷-丙酮-环已烷的配比为9:1:0.5。
8.一种如权利要求1所述的制备方法制备得到的高纯度北美芹素的检测方法，其特征在于：采用高效液相色谱分析方法测定含量：精密称取北美芹素对照品适量，加甲醇水溶液制成一定浓度的北美芹素溶液，注入液相色谱仪，用面积归一化法计算含量，结果系统测定对照品含量；
9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于：色谱条件为：色谱柱Amethyst C18-H，规格4.6×250mm，5μm，流动相为甲醇-水或乙腈-水，梯度洗脱，检测波长：334nm或321nm，流速：1ml/min，进样量：10ul。
10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于：含量检测时，流动相为乙腈-水时，梯度洗脱方式为：0～20min，30％乙腈、20～30min，30％～50％乙腈、30～50min，50％乙腈、50～60min，50％～30％％乙腈、60～90min，30～30％％乙腈；检测波长334nm；
...【技术特征摘要】
1.一种高纯度北美芹素的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：取伞形科前胡属植物华中前胡的干燥根，粉碎，加甲醇提取，滤过，合并滤液，减压浓缩，干燥，得到浸膏，经硅胶柱层析，用石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，收集含北美芹素的流分，再次用石油醚-乙酸乙酯洗脱，即得纯度为重量含量80～90％的北美芹素粗结晶；将北美芹素粗结晶用制备高效液相色谱法分离纯化，收集北美芹素组分，并对所收集的每一份洗脱液利用hplc分析，合并保留时间相同且纯度在90％-98％之间和纯度在98％以上的北美芹素，减压浓缩，得到纯度90％-98％之间及98％以上的北美芹素。
2.根据权利要求1所述的一种高纯度北美芹素的制备方法，其特征在于，用8～15倍体积量的甲醇，超声提取30～60min，重复1～3次。
3.根据权利要求1所述的一种高纯度北美芹素的制备方法，其特征在于，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱配比为1:0～0:1；再次用体积比10:1的石油醚-乙酸乙酯洗脱。
4.根据权利要求1所述的一种高纯度北美芹素的制备方法，其特征在于：
5.根据权利要求1所述的一种高纯度北美芹素的制备方法，其特征在于：
6.一种如权利要求1所述的制备方法制备得到的高纯度北美芹素的检测方法，其特征在于：采用薄层色谱分析方法：取北美芹素适量，用甲醇制成一定浓度的北美芹素溶液，在同一硅胶板上，按不同的点样...
【专利技术属性】
技术研发人员：倪亮，甘兴林，易建欢，庞会明，张先林，孙乐明，郑籼，姚毅，
申请(专利权)人：江苏省中医院，
类型：发明
国别省市：
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