【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因工程，具体而言，涉及一种重组ii型胶原蛋白、组合物及其应用。
技术介绍
1、ii型胶原蛋白(天然)是一种结构性蛋白质，是动物和人类软骨、骨骼和其他类型结缔组织的一部分，它主要存在于关节、鼻子和耳朵等部位。软骨组织中ii型胶原蛋白的含量最高，它构成了软骨组织的弹性支架和保护层。ii型胶原蛋白的存在能够促进软骨组织的再生和修复，起到重要的生理功能。还能更好地抵抗压力和摩擦，保护关节和其他局部组织的健康。
2、ii型胶原蛋白在人体内发挥作用的机制主要有三方面：1)ii型胶原蛋白具有支撑和保护软骨组织的功能。ii型胶原蛋白通过其特殊的三维结构，能够形成网状结构，为软骨提供强大的支撑力和抗拉力，从而保护关节免受外力的损伤。2)ii型胶原蛋白对软骨组织再生和修复具有重要作用。软骨组织的再生和修复能力较差，而ii型胶原蛋白可促进软骨细胞的增殖和胶原纤维的生成，加快软骨组织的再生和修复过程。同时，ii型胶原蛋白还可以提高软骨细胞合成软骨基质的能力，促进新生软骨的形成和修复。3)ii型胶原蛋白具有较好的保湿特性，能够吸收大量水分并锁住水分，从而有效滋润和保护皮肤。此外，ii型胶原蛋白还能增加皮肤的弹性和紧实度，使皮肤更加有弹性和年轻。
3、根据ii型胶原蛋白的作用机制，目前市场上ii型胶原蛋白主要在医学领域中有着广泛的应用。首先，它被广泛用于治疗和预防关节疾病，如关节炎和软骨损伤。多项研究表明，ii型胶原蛋白能够减少关节疼痛和炎症，并促进关节软骨的生长和修复。通过补充ii型胶原蛋白，可以改善关节功能，减轻
4、目前，市面上广泛使用的胶原材料主要是来源于动物组织提取获得的各种不同类型胶原蛋白。从动物组织提取胶原蛋白成分虽然已有很长历史，但是工艺复杂且单体分离较难，还可能携带病毒存在安全隐患，其产量较低不能满足人们对胶原蛋白的巨大需求。
5、鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种重组ii型胶原蛋白、组合物及其应用以解决上述技术问题。
2、本专利技术是这样实现的：
3、第一方面，本专利技术提供了一种重组ii型胶原蛋白，其氨基酸序列为如下任意一种：
4、(1)重组ii型胶原蛋白的氨基酸序列如seq id no.1所示；
5、(2)重组ii型胶原蛋白的氨基酸序列为(1)中所示的氨基酸序列经过替换、缺失或插入一个或多个氨基酸后的衍生蛋白，且衍生蛋白具有ii型胶原蛋白活性。
6、seq id no.1所示的氨基酸序列如下：
7、dqaagglrqhdaevdatlkslnnqiesirspegsrknpartcrdlklchpewksgdywidpn
8、qgctldamkvfcnmetgetcvypnpanvpkknwwsskskekkhiwfgetinggfhfsygddnl
9、apntanvqmtflrllstegsqnityhcknsiayldeaagnlkkalliqgsndveiraegnsrftytalkd
10、gctkhtgkwgktvieyrsqktsrlpiidiapmdiggpeqefgvdigpvcfl。
11、seq id no.1所示的氨基酸序列来源于人全长ii型胶原蛋白α1链，是从全长序列中截取的一段序列，通过基因工程技术将目标片段在微生物、植物、动物等宿主体内进行大量表达，再经过分离获得重组ii型胶原蛋白。该重组ii型胶原蛋白基因与天然ii型胶原蛋白具有一定的相似性，表达的蛋白具有天然蛋白的优良特性。与全长ii型胶原蛋白相比，重组ii型胶原蛋白分子长度较小，表达的蛋白不易降解。
12、该重组ii型胶原蛋白可通过口服、皮肤涂沫、注射等方式在人体内发挥作用。采用本专利技术提供的方法生产的重组ii型胶原蛋白具有无免疫源性，产量高、成本低等优点。可将其与类固醇混合，用于制备组合物，从而提升抗炎效果，本专利技术提供的重组ii型胶原蛋白具有良好的药物联用效果。
13、第二方面，本专利技术提供了一种分离的核酸分子，其编码上述的重组ii型胶原蛋白。
14、术语“编码重组ii型胶原蛋白的核酸分子”可以是包括编码本专利技术重组ii型胶原蛋白的多核苷酸，也可以是还包括附加编码和/或非编码序列的多核苷酸。
15、在本专利技术提供了上述氨基酸序列的情况下，本领域技术人员根据密码子的简并性容易获得编码上述重组人源xvii型胶原蛋白的核酸序列。
16、本专利技术多核苷酸全长序列通常可以通过pcr扩增法、重组法或人工合成的方法获得。对于pcr扩增法，可根据本专利技术所公开的有关核苷酸序列，尤其是开放阅读框序列来设计引物，并用市售的cdna库或按本领域技术人员已知的常规方法所制备的cdna库作为模板，扩增而得有关序列。当序列较长时，常常需要进行两次或多次pcr扩增，然后再将各次扩增出的片段按正确次序拼接在一起。
17、一旦获得了有关的序列，就可以用重组法来大批量地获得有关序列。这通常是将其克隆入载体，再转入细胞，然后通过常规方法从增殖后的宿主细胞中分离得到有关序列。
18、此外，还可用人工合成的方法来合成有关序列，尤其是片段长度较短时。通常，通过先合成多个小片段，然后再进行连接可获得序列很长的片段。
19、目前，已经可以完全通过化学合成来得到编码本专利技术蛋白(或其片段，或其衍生物)的dna序列。然后可将该dna序列引入本领域中已知的各种现有的dna分子(或如载体)和细胞中。
20、应用pcr技术扩增dna/rna的方法被优选用于获得本专利技术的多核苷酸。特别是很难从文库中得到全长的cdna时，可优选使用race法(race-cdna末端快速扩增法)，用于pcr的引物可根据本文所公开的本专利技术的序列信息适当地选择，并可用常规方法合成。可用常规方法如通过凝胶电泳分离和纯化扩增的dna/rna片段。
21、在一种可选的实施方式中，核酸分子选自dna、rna、或其组合。
22、第三方面，本专利技术提供了一种表达盒，其包括上述的分离的核酸分子。
23、在本专利技术应用较佳的实施方式中，表达盒还包括启动子和终止子。启动子用于启动上述核酸分子的转录，终止子用于终止上述核酸分子的转录。本领域熟知的用于细菌表达载体启动子、真菌表达载体启动子均可行。
24、第四方本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种重组II型胶原蛋白，其特征在于，其氨基酸序列为如下任意一种：
2.一种分离的核酸分子，其特征在于，其编码权利要求1所述的重组II型胶原蛋白。
3.一种表达盒，其特征在于，其包括权利要求2所述的分离的核酸分子。
4.一种载体，其特征在于，其包括权利要求2所述的分离的核酸分子或权利要求3所述的表达盒；
5.一种重组细胞或重组菌，其特征在于，其包括权利要求4所述的载体；
6.一种生产权利要求1所述的重组II型胶原蛋白的方法，其特征在于，培养权利要求5所述的重组细胞或重组菌；
7.一种组合物，其特征在于，其包括：权利要求1所述的重组II型胶原蛋白和类固醇；
8.如权利要求1所述的重组II型胶原蛋白或权利要求7所述的组合物在制备预防或治疗如下至少一种疾病的药物中的应用，其特征在于，所述疾病为骨关节炎、风湿性关节炎和类风湿性关节炎；
9.如权利要求1所述的重组II型胶原蛋白或权利要求7所述的组合物在制备预防或治疗如下至少一种疾病的联用药物中的应用，其特征在于，所述疾病为骨关节炎、风湿性关节
10.根据权利要求8或9所述的应用，其特征在于，所述药物或联用药物还包括药学上可接受的添加剂或辅料；
11.如权利要求1所述的重组II型胶原蛋白或权利要求7所述的组合物在制备组织工程材料或医疗器械中的应用；
...【技术特征摘要】
1.一种重组ii型胶原蛋白，其特征在于，其氨基酸序列为如下任意一种：
2.一种分离的核酸分子，其特征在于，其编码权利要求1所述的重组ii型胶原蛋白。
3.一种表达盒，其特征在于，其包括权利要求2所述的分离的核酸分子。
4.一种载体，其特征在于，其包括权利要求2所述的分离的核酸分子或权利要求3所述的表达盒；
5.一种重组细胞或重组菌，其特征在于，其包括权利要求4所述的载体；
6.一种生产权利要求1所述的重组ii型胶原蛋白的方法，其特征在于，培养权利要求5所述的重组细胞或重组菌；
7.一种组合物，其特征在于，其包括：权利要求1所述的重组ii型胶原蛋白和类固醇；
8.如权利要求1所述的重组ii型胶原蛋白或权利要求7所述的组合物在制备预防或治疗如下至少一种疾病的药物中的应用，其特征在于，所述疾病为骨关节炎、...
【专利技术属性】
技术研发人员：范代娣，黄蓉，段志广，董杨芳，刘红艳，陈志奇，徐茹，
申请(专利权)人：陕西巨子生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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