【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种可靶向缺血脑区用于治疗缺血性脑卒中的纳米药物的制备方法和用途，特别涉及一种借由靶向多肽，用于靶向治疗缺血性脑卒中的纳米颗粒药物，可以靶向缺血脑区，促进缺血区域血管修复和新生；属于生物医药。
技术介绍
1、缺血性脑卒中是严重危害人类健康和生命安全的一种难治性疾病，具有发病率高、死亡率高和致残率高的特征。随着人口老龄化的进程，脑卒中已经成为我国国民的第一死因，且发病率正呈现年轻化趋势，其中缺血性脑卒中约占到70％-80％。卒中后脑组织缺血缺氧可导致大量神经元发生不可逆性的变性和坏死，出现严重的神经功能缺失，约75％的卒中存活患者遗留不同程度的残疾。因此，探索新的治疗策略和手段，对改善缺血性脑卒中患者临床预后具有重要意义。
2、近年来，纳米技术作为一种突破性的科技手段，已成为药物递送和诊断领域的创新工具，应用于治疗各种疾病。纳米颗粒黏附性强、体积小，可随血液循环，并透过血管壁进入各种脏器的细胞内，延长包裹到纳米颗粒中的药物血浆半衰期，以及药物在局部组织或部位的滞留时间，从而提高药物的吸收和生物利用度，因此纳米材料介导的血脑屏障穿透性的提高，有望为脑部疾病的药物治疗提供新的前景。纳米药物在缺血性脑卒中治疗中具有非常广阔的应用前景。目前正在研究和开发的纳米药物载体包括脂质体、胶束、树状大分子、聚合物和外泌体等，这些载体可以携载治疗药物作用于缺血性脑卒中缺血级联的不同阶段，如溶解血栓和挽救缺血半暗带、减轻缺血后神经免疫炎症反应等，从而延缓病情进展，并促进神经功能的恢复。聚乳酸-羟基乙酸共聚物(polylacti
3、尽管纳米药物在缺血性脑卒中治疗中显示出了巨大潜力，但其不能被准确输送至缺血脑区极大地限制了治疗效果，同时也难以避免sirna、mirna等基因药物对正常脑组织的毒副作用。采用缺血脑区靶向技术，有望成为缺血性脑卒中纳米药物治疗的突破口。急性缺血性脑卒中能够引发大脑神经组织的一系列应激反应，包括酸中毒、兴奋性氨基酸释放、细胞内钙超载、氧自由基释放、炎症反应及细胞凋亡，这些反应相互交联，引起脑缺血中心及周边脑组织相应的生理活动变化，使得缺血脑组织在组织构成、蛋白表达和代谢上均有别于正常脑组织，这些病理特征是纳米微粒系统主动靶向脑缺血部位的前提和基础。因此，能够特异性结合缺血脑组织中特有靶标蛋白的抗体或多肽，即可作为靶向识别分子用于纳米药物的研发。与抗体相比，多肽具有分子量小、免疫原性低、组织穿透能力强、构建简单、可原核表达和大量生产等优点，非常适用于分子探针或靶向药物的构建。利用多肽配体修饰设计纳米载药系统，穿透bbb(blood-brain barrier，血脑屏障)将治疗药物高效递送至缺血脑区，以发挥神经保护和促血管新生的治疗作用，有望为缺血性脑卒中的精准治疗提供新的治疗策略和应用依据。
4、尿激肽原酶(urinary kallidinogenase，uk)，目前在国内主要用于改善脑梗塞侧支循环。huk(human urinary kallidinogenase，人尿激肽原酶)被认为可以通过增加局部脑组织血流量，改善脑组织血供，缩小脑梗死范围，从而减轻脑梗塞后神经功能损害，已广泛应用于临床治疗急性缺血性脑卒中。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是：针对现有的用于治疗脑卒中的纳米药物疗效不佳的技术问题，本专利技术旨在提供一种具有靶向能力，易于穿透血脑屏障，发挥促血管生成和神经保护作用的纳米治疗药物及其制备方法。
2、为了达到解决上述技术问题的目的，本专利技术提供一种可靶向缺血脑区的载药纳米粒istp-plga@uk在制备治疗缺血性脑卒中的药物中的应用，所述载药纳米粒istp-plga@uk是以plga为药物递送载体负载尿激肽原酶uk得到plga@uk后，再修饰靶向肽istp制备而成，所述靶向肽istp的氨基酸序列如seq id no：1所示。
3、优选地，所述plga@uk是采用水包油包水(w1/o/w2)复乳溶剂挥发法制备得到。
4、优选地，所述水包油包水复乳溶剂挥发法的反应体系为外水相包油相包内水相体系，所述外水相为尿激肽原酶的水溶液，所述油相为plga溶液，所述内水相为聚乙烯醇水溶液。
5、优选地，所述靶向肽istp的修饰是将plga@uk中的羧基(羧基来源于plga)活化后与靶向肽进行偶联反应。
6、优选地，所述羧基活化是采用n-羟基琥珀酰亚胺(nhs)和1-乙基(3-二甲基氨基丙基)碳酰氯(edc)进行活化。
7、优选地，所述药物包括医学上可接受的载体和有效量的活性成分，所述活性成分为载药纳米粒istp-plga@uk。
8、优选地，所述药物的剂型包括注射剂、片剂、粉剂、混悬剂、胶囊剂、丸剂或糖浆。
9、本专利技术还提供了一种可靶向缺血脑区的载药纳米粒istp-plga@uk的制备方法，包括以下步骤：
10、步骤1：采用水包油包水(w1/o/w2)复乳溶剂挥发法制备负载尿激肽原酶的plga载药纳米粒plga@uk，其中plga作为药物载体；
11、步骤2：将步骤1得到的plga@uk修饰靶向肽istp制备得到istp-plga@uk，所述靶向肽istp的氨基酸序列如seq id no：1所示。
12、优选地，所述步骤1中水包油包水复乳溶剂挥发法的反应体系为外水相包油相包内水相体系，所述外水相为尿激肽原酶的水溶液，所述油相为plga溶液，所述内水相为聚乙烯醇水溶液；
13、和/或，所述步骤2中靶向肽istp的修饰是将plga@uk中的羧基(羧基来源于plga)活化后与靶向肽istp进行偶联反应。
14、优选地，所述羧基活化是采用n-羟基琥珀酰亚胺(nhs)和1-乙基(3-二甲基氨基丙基)碳酰氯(edc)进行活化。
15、优选地，所述步骤1中制备plga@uk所采用的uk和plga的投料比为5～200pna：180g；投料比更优选为5～150pna：180g。
16、优选地，所述步骤2中plga@uk与靶向肽istp的投料质量比为4～6：1，所得的istp-plga@uk中uk的载药率为90％以上。
17、与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：
18、本专利技术提供的纳米药物经检测证明其细胞毒性低，生物相容性较好，bbb穿透能力突出，细胞摄取效率高；同时对缺氧诱导的脑微血管内皮细胞具有保护作用，能够增强其体外血管形成能力；并且可以准确将药物递送至缺血脑区发挥作用；因此，本专利技术的纳米药物具有良好的临床应用价值和应用前景。
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1.一种可靶向缺血脑区的载药纳米粒ISTP-PLGA@UK在制备治疗缺血性脑卒中的药物中的应用，其特征在于，所述载药纳米粒ISTP-PLGA@UK是以PLGA为药物递送载体负载尿激肽原酶UK得到PLGA@UK后，再修饰靶向肽ISTP制备而成，所述靶向肽ISTP的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述PLGA@UK是采用水包油包水复乳溶剂挥发法制备得到。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述水包油包水复乳溶剂挥发法的反应体系为外水相包油相包内水相体系，所述外水相为尿激肽原酶的水溶液，所述油相为PLGA溶液，所述内水相为聚乙烯醇水溶液。
4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述靶向肽ISTP的修饰是将PLGA@UK中的羧基活化后与靶向肽进行偶联反应。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述羧基活化是采用N-羟基琥珀酰亚胺和1-乙基(3-二甲基氨基丙基)碳酰氯进行活化。
6.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物包括医学上可接受的载体和有效量的活性成分，所
7.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述药物的剂型包括注射剂、片剂、粉剂、混悬剂、胶囊剂、丸剂或糖浆。
8.一种可靶向缺血脑区的载药纳米粒ISTP-PLGA@UK的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
9.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1中水包油包水复乳溶剂挥发法的反应体系为外水相包油相包内水相体系，所述外水相为尿激肽原酶的水溶液，所述油相为PLGA溶液，所述内水相为聚乙烯醇水溶液；
10.如权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述羧基活化是采用N-羟基琥珀酰亚胺和1-乙基(3-二甲基氨基丙基)碳酰氯进行活化。
...【技术特征摘要】
1.一种可靶向缺血脑区的载药纳米粒istp-plga@uk在制备治疗缺血性脑卒中的药物中的应用，其特征在于，所述载药纳米粒istp-plga@uk是以plga为药物递送载体负载尿激肽原酶uk得到plga@uk后，再修饰靶向肽istp制备而成，所述靶向肽istp的氨基酸序列如seq id no：1所示。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述plga@uk是采用水包油包水复乳溶剂挥发法制备得到。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述水包油包水复乳溶剂挥发法的反应体系为外水相包油相包内水相体系，所述外水相为尿激肽原酶的水溶液，所述油相为plga溶液，所述内水相为聚乙烯醇水溶液。
4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述靶向肽istp的修饰是将plga@uk中的羧基活化后与靶向肽进行偶联反应。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述羧基活化...
【专利技术属性】
技术研发人员：薛丽霞，陈浩，孔明，周忠政，
申请(专利权)人：上海市第六人民医院，
类型：发明
国别省市：
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