一种腺相关病毒Cap蛋白的表达框制造技术

技术编号：42339479 阅读：5 留言：0更新日期：2024-08-14 16:16

本公开涉及基因工程领域，尤其涉及一种腺相关病毒Cap蛋白的表达框。所述Cap蛋白的表达框包含截短型5’UTR序列，用于表达VP2/3多肽。通过本公开的Cap蛋白的表达框，可以实现VP1和VP2/3的拆分表达。

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【技术实现步骤摘要】

本公开属于基因工程领域，尤其涉及一种腺相关病毒cap蛋白的表达框。

技术介绍

1、aav目前作为基因治疗最常用的载体具备许多优点。aav目前大规模生产通常使用悬浮293细胞三质粒共瞬时转染的方式进行。然而该方式存在生产成本高、产量不足且放大较为困难等劣势，这些问题严重限制了aav载体商业化应用时的成本控制及生产可靠性。因此目前业界急需找到提升瞬时转染病毒包装效率的方式以及建立aav生产细胞系的方式。

技术实现思路

1、一方面，本公开提供了一种表达vp2/3多肽的表达框，其中所述表达vp2/3多肽的表达框的5’ utr序列为截短型5’ utr序列，所述截短型5’utr序列长度为400 bp以下，优选为21 bp至351 bp，更优选为 81 bp至261 bp。

2、在一些实施方式中，所述截短型5’ utr序列的5’端被截短90 bp以上，例如90-420bp。

3、在一些实施方式中，所述表达框用于vp2多肽和vp3多肽的表达，但不表达vp1多肽。

4、在一些实施方式中，所述截短型5’ utr序列选自seq id no：2-6所示的核苷酸序列，或者与seq id no：2-6中任一项所示的核苷酸序列具有至少70%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或99.5%同一性的核苷酸序列。

5、另一方面，本公开提供了一种表达vp1多肽的表达框，其中所述表达框的5’ utr序列被替换为sv40内含子或嵌合内含子。

6、在一些实施方式中，所述sv40内含子包含seq id no：8所示的核苷酸序列，或者与seq id no：8所示的核苷酸序列具有至少70%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或99.5%同一性的核苷酸序列。

7、在一些实施方式中，所述嵌合内含子包含seq id no：9所示的序列，或者与seq idno：9所示的核苷酸序列具有至少70%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或99.5%同一性的核苷酸序列。

8、在一些实施方式中，所述表达vp1多肽的表达框用于vp1多肽的表达，但不表达vp2多肽和vp3多肽。

9、在一些实施方式中，所述内含子的剪切位点包含一个或多个核苷酸突变，诸如aav8 vp1表达框起始密码子后18-21 bp的tcca至accc的突变。

10、另一方面，本公开提供了一种载体，其包含上述本公开的表达vp2/3多肽的表达框和/或表达vp1多肽的表达框。

11、另一方面，本公开提供了一种病毒包装系统，其包含表达vp1多肽的表达框、表达vp2/3多肽的表达框、以及用于包装病毒的其他必需元件表达框，其中所述表达vp1多肽的表达框是上述本公开的表达vp1多肽的表达框；和/或所述表达vp2/3多肽的表达框是上述本公开的表达vp2/3多肽的表达框。

12、在一些实施方式中，所述病毒选自aav病毒，所述aav的血清型选自由野生型aav1、aav2、aav3、aav4、aav5、aav6、aav7、aav8、aav9、aav10、aav11、aav12、aav13、aavrh.8、aavrh.10、aavrh.39、aavhsc15、aavhsc17以及基于aav1、aav2、aav3、aav4、aav5、aav6、aav7、aav8、aav9、aav10、aav11、aav12、aav13、aavrh.8、aavrh.10、aavrh.39、aavhsc15、aavhsc17改造的aav血清型组成的组。

13、另一方面，本公开提供了一种细胞系，其包含上述本公开的载体，或者包含上述本公开的病毒包装系统。

14、aav cap蛋白包含vp1,2,3，其原本为嵌套表达形式，表达框无法拆分，vp1与vp2/3均由内源性启动子p40启动表达，从而限制了vp1与vp2/3的表达调控。

15、针对上述问题，本公开通过拆分cap蛋白的表达框并将p40启动子替换为外源启动子，使得vp1与vp2/3蛋白实现拆分表达，表达强度提高并提高vp1表达比例，从而提高aav病毒包装的产量以及病毒活力。本公开中进一步利用拆分后的表达框实现aav包装，包装生成的aav产量高，活性好。同时，这样的表达框结构可使用不同的方式稳定整合至细胞中构建aav生产细胞系。

本文档来自技高网...

【技术保护点】

1. 一种表达AAV病毒的VP2/3多肽的表达框，其特征在于，所述表达AAV病毒的VP2/3多肽的表达框的5’ UTR序列为截短型5’ UTR序列，所述截短型5’UTR序列的长度为21 bp至351 bp，所述截短型5’ UTR序列选自SEQ ID NO：2-6所示的核苷酸序列。

2. 根据权利要求1所述的表达框，其中，所述截短型5’ UTR序列的长度为81 bp至261bp。

3.根据权利要求1所述的表达框，其中，所述表达AAV病毒的VP2/3多肽的表达框用于VP2多肽和VP3多肽的表达，但不表达VP1多肽。

4.一种载体，其包含权利要求1-3中任一项所述的表达AAV病毒的VP2/3多肽的表达框。

5.一种病毒包装系统，其包含表达VP1多肽的表达框、表达VP2/3多肽的表达框、以及用于包装病毒的其他必需元件表达框；

6. 根据权利要求5所述的病毒包装系统，其中，所述表达VP1多肽的表达框的5’ UTR序列被替换为SV40内含子或嵌合内含子。

7. 根据权利要求6所述的病毒包装系统，其中，所述SV40内含子包

8.根据权利要求6所述的病毒包装系统，其中，所述表达VP1多肽的表达框用于VP1多肽的表达，但不表达VP2多肽和VP3多肽。

9.根据权利要求6所述的病毒包装系统，其中，所述SV40内含子或所述嵌合内含子的剪切位点包含一个或多个核苷酸突变。

10.根据权利要求5-9中任一项所述的病毒包装系统，其中，所述病毒选自AAV病毒，所述AAV的血清型选自由野生型AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12、AAV13、AAVrh.8、AAVrh.10、AAVrh.39、AAVHSC15、AAVHSC17以及基于AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12、AAV13、AAVrh.8、AAVrh.10、AAVrh.39、AAVHSC15、AAVHSC17改造的AAV血清型组成的组。

11.一种细胞系，其包含权利要求4所述的载体，或者包含权利要求5-10中任一项所述的病毒包装系统。

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【技术特征摘要】

1. 一种表达aav病毒的vp2/3多肽的表达框，其特征在于，所述表达aav病毒的vp2/3多肽的表达框的5’ utr序列为截短型5’ utr序列，所述截短型5’utr序列的长度为21 bp至351 bp，所述截短型5’ utr序列选自seq id no：2-6所示的核苷酸序列。

2. 根据权利要求1所述的表达框，其中，所述截短型5’ utr序列的长度为81 bp至261bp。

3.根据权利要求1所述的表达框，其中，所述表达aav病毒的vp2/3多肽的表达框用于vp2多肽和vp3多肽的表达，但不表达vp1多肽。

4.一种载体，其包含权利要求1-3中任一项所述的表达aav病毒的vp2/3多肽的表达框。

5.一种病毒包装系统，其包含表达vp1多肽的表达框、表达vp2/3多肽的表达框、以及用于包装病毒的其他必需元件表达框；

6. 根据权利要求5所述的病毒包装系统，其中，所述表达vp1多肽的表达框的5’ utr序列被替换为sv40内含子或嵌合内含子。

7. 根据权利要求6所述的病毒包装系统，其中，所述sv40内含子包含seq id no：...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈意雄，林卿，蒋天祺，盛晓菁，
申请(专利权)人：凌意杭州生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：

全部详细技术资料下载我是这个专利的主人