【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及药物分析，尤其涉及一种盐酸利多卡因中基因毒性杂质的检测方法。
技术介绍
1、盐酸利多卡因英文名称为lidocaine hydrochloride，cas号为：73-78-9。盐酸利多卡因是局部麻醉及抗心律失常药，它是可卡因的一种衍生物，但没有可卡因产生幻觉和上瘾的成分，局部麻醉效果较强而持久，有良好的表面穿透力，可注射也可作表面麻醉。
2、近年来国内外对于药品中基因毒性杂质的控制愈发严格，对于药品中可能存在的各类含有基因毒性警示结构的物质均需要进行充分研究以证明药品安全性。
3、现有工艺生成盐酸利多卡因过程中，可能残留一种含有基因毒性警示结构的杂质：2,2,-二氯-n-(2,6-二甲基苯基)乙酰胺，cas号为：39084-88-3，结构式如下。按照ichm7指导原则，2,2,-二氯-n-(2,6-二甲基苯基)乙酰胺的可接受限度＝ttc(μg/天)×1000/mdd(mg/天)＝1.5μg/天×1000/400mg/天＝3.75ppm(ng/mg)，其中ttc表示毒理学关注阈值，mdd表示最大每日剂量。
4、
5、目前，尚未有2,2,-二氯-n-(2,6-二甲基苯基)乙酰胺相关检测方法的报道，常规液相、气相色谱检测方法的灵敏度均无法满足该杂质限度的检测要求(3.75ppm)，为了更好地监控盐酸利多卡因原料或其制剂产品的质量，保证盐酸利多卡因产品的临床用药安全，有必要研发一种准确可靠检测盐酸利多卡因中2,2,-二氯-n-(2,6-二甲基苯基)乙酰胺的方法。
>技术实现思路
1、针对现有技术中不能对盐酸利多卡因中2,2,-二氯-n-(2,6-二甲基苯基)乙酰胺进行有效检测的问题，本专利技术提供一种盐酸利多卡因中基因毒性杂质的检测方法。
2、为解决上述技术问题，本专利技术提供的技术方案是：
3、一种盐酸利多卡因中基因毒性杂质的检测方法，所述基因毒性杂质为2,2,-二氯-n-(2,6-二甲基苯基)乙酰胺，采用高效液相色谱与质谱联用法进行检测，包含以下步骤：
4、(1)供试品溶液和对照品溶液的配制：
5、取盐酸利多卡因原料配制成供试品溶液；
6、取2,2,-二氯-n-(2,6-二甲基苯基)乙酰胺对照品制成对照品溶液；
7、(2)对所述对照品溶液和供试品溶液进行检测，其中，所述高效液相色谱的条件：
8、色谱柱：c18色谱柱；
9、流动相a：体积浓度为0.05％～0.15％甲酸的水溶液，流动相b：体积浓度为0.05％～0.15％甲酸的甲醇溶液；
10、洗脱方式：梯度洗脱；
11、质谱条件为：esi离子源，负离子扫描模式，所述2,2,-二氯-n-(2,6-二甲基苯基)乙酰胺的定量离子为：母离子230m/z，子离子为83m/z，碰撞电压为25v；所述2,2,-二氯-n-(2,6-二甲基苯基)乙酰胺的定性离子为：母离子230m/z，子离子为230m/z，碰撞电压为5v。
12、本专利技术提供的盐酸利多卡因中基因毒性杂质的检测方法，采用c18色谱柱，通过特定的流动相，以梯度洗脱方式，配合特定的质谱条件，实现了盐酸利多卡因中痕量的2,2,-二氯-n-(2,6-二甲基苯基)乙酰胺的准确检出，2,2,-二氯-n-(2,6-二甲基苯基)乙酰胺的检测限为2.19ng/mg，定量限为7.30ng/mg，符合ich m7的指导原则的检测要求。并且本专利技术提供的检测方法专属性强，灵敏度高，线性关系良好，可作为盐酸利多卡因质量监控的依据，弥补了现有技术无法对盐酸利多卡因中2,2,-二氯-n-(2,6-二甲基苯基)乙酰胺进行有效检测的空白，进而有利于降低盐酸利多卡因药品的用药安全风险。
13、优选的，所述梯度洗脱的洗脱程序如下：
14、0min，94％-96％流动相a，6％-4％流动相b；
15、3min，94％-96％流动相a，6％-4％流动相b；
16、5min，79％-81％流动相a，21％-19％流动相b；
17、9min，0％-1％流动相a，100％-99％流动相b；
18、12min，0％-1％流动相a，100％-99％流动相b；
19、12.1min，94％-96％流动相a，6％-4％流动相b；
20、16min，94％-96％流动相a，6％-4％流动相b。
21、进一步优选的，所述梯度洗脱的洗脱程序如下：
22、0min，95％流动相a，5％流动相b；
23、3min，95％流动相a，5％流动相b；
24、5min，80％流动相a，20％流动相b；
25、9min，0％流动相a，100％流动相b；
26、12min，0％流动相a，100％流动相b；
27、12.1min，95％流动相a，5％流动相b；
28、16min，95％流动相a，5％流动相b。
29、优选的，流速为0.55ml/min-0.65ml/min，柱温为27℃-33℃。
30、进一步优选的，流速为0.6ml/min，柱温为30℃。
31、优选的，所述色谱柱的规格为100mm*4.5mm，填料直径为3μm。
32、进一步优选的，所述色谱柱为ymc triart-c18。
33、优选的，所述流动相a为体积浓度为0.1％甲酸的水溶液。
34、优选的，所述流动相b为体积浓度为0.1％甲酸的甲醇溶液。
35、在流动相中加入特定浓度的甲酸水溶液和特定浓度的甲酸甲醇溶液有助于待测物质在色谱中电离，提高检测结果的准确度及精密度；进一步优选0.1％甲酸的水溶液和0.1％甲酸的甲醇溶液作为流动相，一方面配置简单方便，另一方面也符合质谱仪器以及色谱柱的耐受范围。
36、优选的，进样体积为5μl。
37、优选的，所述供试品溶液的浓度为20mg/ml。
38、优选的，所述对照品溶液的浓度为75ng/ml。
39、优选的液相色谱的检测条件有利于盐酸利多卡因中2,2,-二氯-n-(2,6-二甲基苯基)乙酰胺的有效检出，提高检测的灵敏度，从而达到有效准确检测盐酸利多卡因中2,2,-二氯-n-(2,6-二甲基苯基)乙酰胺的目的。
40、优选的，所述质谱条件还包括：扫描模式为多反应监测，气帘气体压力为40psi；碰撞气压力为medium；去簇电压为50v；离子化电压为5000v-5500v；射入电压为5v-15v；碰撞室射出电压为5v-15v；喷雾气为50psi-60psi；辅助加热气为50psi-60psi；离子化温度(tem)为500℃-600℃。
41、优选的质谱分析条件在具有较高的响应强度的前提下，具有高选择性和较低的基线，使得目标化合物具有较高的信噪比，较高的灵敏度，从而能够最大限度本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种盐酸利多卡因中基因毒性杂质的检测方法，所述基因毒性杂质为2,2,-二氯-N-(2,6-二甲基苯基)乙酰胺，其特征在于，采用高效液相色谱与质谱联用法进行检测，包含以下步骤：
2.如权利要求1所述的盐酸利多卡因中基因毒性杂质的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱的洗脱程序如下：
3.如权利要求2所述的盐酸利多卡因中基因毒性杂质的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱的洗脱程序如下：
4.如权利要求1所述的盐酸利多卡因中基因毒性杂质的检测方法，其特征在于，所述色谱柱的规格为100mm*4.5mm，填料直径为3μm。
5.如权利要求5所述的盐酸利多卡因中基因毒性杂质的检测方法，其特征在于，所述色谱柱为YMC Triart-C18。
6.如权利要求1所述的盐酸利多卡因中基因毒性杂质的检测方法，其特征在于，所述流动相A为体积浓度为0.1％甲酸的水溶液；和/或
7.如权利要求1所述的盐酸利多卡因中基因毒性杂质的检测方法，其特征在于，供试品溶液的浓度为20mg/mL；和/或
8.如权利要求1所述的盐酸利多卡因中
9.如权利要求8所述的盐酸利多卡因中基因毒性杂质的检测方法，其特征在于，流速为0.6mL/min，柱温为30℃。
10.如权利要求1所述的盐酸利多卡因中基因毒性杂质的检测方法，其特征在于，所述质谱条件还包括：扫描模式为多反应监测，气帘气体压力为40psi；碰撞气压力为Medium；去簇电压为50V；离子化电压为5000V-5500V；射入电压为5V-15V；碰撞室射出电压为5V-15V；喷雾气为50psi-60psi；辅助加热气为50psi-60psi；离子化温度(TEM)为500℃-600℃。
...【技术特征摘要】
1.一种盐酸利多卡因中基因毒性杂质的检测方法，所述基因毒性杂质为2,2,-二氯-n-(2,6-二甲基苯基)乙酰胺，其特征在于，采用高效液相色谱与质谱联用法进行检测，包含以下步骤：
2.如权利要求1所述的盐酸利多卡因中基因毒性杂质的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱的洗脱程序如下：
3.如权利要求2所述的盐酸利多卡因中基因毒性杂质的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱的洗脱程序如下：
4.如权利要求1所述的盐酸利多卡因中基因毒性杂质的检测方法，其特征在于，所述色谱柱的规格为100mm*4.5mm，填料直径为3μm。
5.如权利要求5所述的盐酸利多卡因中基因毒性杂质的检测方法，其特征在于，所述色谱柱为ymc triart-c18。
6.如权利要求1所述的盐酸利多卡因中基因毒性杂质的检测方法，其特征在于，所述流动相a为体积浓度为0.1％甲酸的水溶液；和...
【专利技术属性】
技术研发人员：范燕龙，姜云云，王亚静，范思雨，刘玉晴，薛童萱，李晓梅，高明伟，
申请(专利权)人：石家庄四药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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