【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物传感，涉及一种基于cofe2o4/mos2纳米酶检测脓毒症相关标志物的纳米酶联免疫吸附分析法，可用于开发纳米酶联免疫吸附试剂盒。
技术介绍
1、脓毒症作为一种由宿主对感染的反应失调引起的危及生命的器官功能障碍，严重危险公众健康，且每延误一小时脓毒症的死亡率增加8％，因此脓毒症的诊断监控和及时的治疗干预是改善临床结果和降低死亡率的关键。然而脓毒症发病机制复杂，涉及体内多器官多系统病理生理变化，缺乏特异的临床表现，这给临床脓毒症早期诊断、病情监测及预后评估造成很大困难。已有报道显示有关脓毒症的临床症状尚处于争议及完善阶段，仅依靠临床指征是不足的。
2、近年来，随着脓毒症基础及临床深入研究，脓毒症发病涉及多器官多系统病理生理变化，不同生物标志物在脓毒症病理生理过程中表现不同，因此利用生物标志物进行脓毒症快速诊断分型及病情即时监测尤为重要。c反应蛋白(crp)是一种急性时相蛋白，在临床检验中是感染和炎症诊断最常用的炎症生物标志物，当机体在应激状态下crp水平迅速升高，升高幅度与脓毒症病情严重程度关系密切；血清淀粉样蛋白a(saa)是一种重要炎症标志物，机体炎症反应时saa水平快速升高，可反映脓毒症患者全身炎症反应的发生、发展过程，与crp联合检测能为疾病感染类型的鉴别提供了极其重要的依据，并在脓毒症诊断监控、指导用药中发挥着重要作用。d-二聚体(dd)是交联纤维蛋白多聚体被降解的释放产物，可反映患者纤维蛋白多聚体的血浆浓度，作为弥散性血管内凝血的重要指标，在脓毒症的诊断、评估病情进展中存在重要作用。监测这三
3、酶联免疫吸附分析法(elisa)由于其检测迅速，操作简单，特异性强和灵敏性高等优点，成为生物分子定量检测的主要分析技术之一。生物酶催化反应在elisa的最终信号转化及放大过程中起着关键作用，但其制备复杂、易变性失活、价格昂贵等不足因素限制了实际应用。因此，研发替代生物酶的酶联免疫吸附技术是目前研究的热点。
4、纳米酶具有与生物酶相似的活性中心或电子传输结构，能够在特定的物理条件下表现出与天然酶相似的类酶催化活性。因其具有稳定性好、生产成本低、制备/纯化过程简单、运输储存方便、活性可调控等优点，在生物传感、生物医学、环境修复和食品科学等领域得到广泛应用。目前已研发多种具有酶催化活性的纳米材料，并建立了针对多种小分子、生物大分子等目标物的检测方法。
5、本专利技术通过利用cofe2o4纳米粒子的磁性和mos2具有丰富的活性位点和高电子迁移率的优势，设计合成cofe2o4/mos2复合纳米酶材料，实现协同作用提高纳米酶催化活性。cofe2o4/mos2纳米酶作为类过氧化物酶，对过氧化氢表现出高特异性的催化性能；在cofe2o4/mos2纳米酶复合材料表面标记上链霉亲和素作为亲和素-纳米酶，通过生物素-链霉亲和素-纳米酶偶联系统替代生物酶偶联第二抗体或生物酶偶联链霉亲和素用于酶联免疫吸附分析法中，利用酶标仪读出纳米酶催化显色信号，实现对待测生物标志物的检测。
6、本专利技术利用cofe2o4/mos2纳米酶的多功能理化特征，包括复合纳米材料的催化性能、磁性与显色效应结合，使催化、分离与显色同步实现，简化实验步骤，有效缩短实验时间；同时建立用于脓毒症相关标志物的纳米酶联免疫吸附分析法(nano-enzyme-linkedimmunosorbent assay，nelisa)，实现对脓毒症相关标志物crp、saa和dd标志物的检测。
技术实现思路
1、1.本专利技术的目的是提供一种基于cofe2o4/mos2纳米酶检测脓毒症相关标志物的纳米酶联免疫吸附分析法。
2、2.本专利技术所述的一种基于cofe2o4/mos2纳米酶检测脓毒症相关标志物的纳米酶联免疫吸附分析法，cofe2o4/mos2纳米酶催化显色信号为读出组件，结合生物素-链霉亲和素系统作为通用方法组件，以特异性抗体作为目标识别组件，能够实现对人血浆样本中c反应蛋白(crp)、血清淀粉样蛋白a(saa)和d-二聚体(dd)的检测。
3、3.本专利技术所述的一种基于cofe2o4/mos2纳米酶检测脓毒症相关标志物的纳米酶联免疫吸附分析法，通过纳米酶对3,3',5,5'-四甲基联苯胺/过氧化氢(tmb/h2o2)系统催化显色性能与目标蛋白含量的关系，实现对样本中特异性蛋白标志物的定量检测。
4、4.本专利技术所述的一种基于cofe2o4/mos2纳米酶检测脓毒症相关标志物的纳米酶联免疫吸附分析法，包括如下步骤：(1)通过溶剂法和水热法两步合成cofe2o4/mos2磁性纳米酶粒子；(2)通过碳二亚胺缩合法，将链霉亲和素与cofe2o4/mos2磁性纳米酶粒子键合，制得链霉亲和素偶联的cofe2o4/mos2纳米酶；(3)将链霉亲和素偶联的cofe2o4/mos2纳米酶用于纳米酶联免疫吸附分析法，对样品中含有的脓毒症相关蛋白标志物c-反应蛋白(crp)、血清淀粉样蛋白a(saa)和d二聚体(dd)进行检测。
5、进一步地，所述的一种基于cofe2o4/mos2纳米酶检测脓毒症相关标志物的纳米酶联免疫吸附分析法，其特征在于，通过cofe2o4/mos2纳米酶对3,3',5,5'-四甲基联苯胺/过氧化氢tmb/h2o2体系催化显色变化量与脓毒症相关标志物含量的关系，实现对样本中含有的脓毒症相关蛋白标志物c-反应蛋白(crp)、血清淀粉样蛋白a(saa)和d二聚体(dd)的定量检测。
6、进一步地，所述的一种基于cofe2o4/mos2纳米酶检测脓毒症相关标志物的纳米酶联免疫吸附分析法，其特征在于，依序包括如下步骤：
7、(1)采用六水合三氯化铁和六水合氯化钴在含有乙酸钠与聚乙二醇的乙二醇环境中高温溶剂热法合成四氧二铁酸钴cofe2o4；
8、(2)将制得的cofe2o4与钼酸铵、硫脲混合，并分散在超纯水中，采用高温水热法合成cofe2o4/mos2磁性纳米酶粒子；
9、(3)通过碳二亚胺缩合法(edc/nhs)将链霉亲和素与步骤(2)制得的cofe2o4/mos2磁性纳米酶粒子键合，制备得到链霉亲和素偶联的cofe2o4/mos2纳米酶sa-cofe2o4/mos2；
10、(4)bsa封闭步骤(3)中链霉亲和素偶联的cofe2o4/mos2纳米酶表面未反应的活性位点；
11、(5)将脓毒症相关蛋白标志物(crp、saa、dd)的捕获单抗分别孵育在不同的酶标板孔内包被，并采用bsa封闭酶标板孔内未被捕获单抗包被的位点所述的捕获单抗指crp-ab1或saa-ab1或dd-ab1；
12、(6)按顺序向步骤(5)各酶标板孔中加入待测样品，再于各酶标板孔加入对应待测蛋白的生物素标记信号单抗，sa-cofe2o本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种基于CoFe2O4/MoS2纳米酶检测脓毒症相关标志物的纳米酶联免疫吸附分析法，其特征在于，包括如下步骤：（1）通过溶剂法和水热法两步合成CoFe2O4/MoS2磁性纳米酶粒子；（2）通过碳二亚胺缩合法，将链霉亲和素与CoFe2O4/MoS2磁性纳米酶粒子键合，制得链霉亲和素偶联的CoFe2O4/MoS2纳米酶；（3）将链霉亲和素偶联的CoFe2O4/MoS2纳米酶用于纳米酶联免疫吸附分析法，对样品中含有的脓毒症相关蛋白标志物C-反应蛋白（CRP）、血清淀粉样蛋白A（SAA）和 D二聚体（DD）进行检测。
2.如权利要求1所述的一种基于CoFe2O4/MoS2纳米酶检测脓毒症相关标志物的纳米酶联免疫吸附分析法，其特征在于，通过CoFe2O4/MoS2纳米酶对3,3',5,5'-四甲基联苯胺/过氧化氢TMB/H2O2体系催化显色变化量与脓毒症相关标志物含量的关系，实现对样本中含有的脓毒症相关蛋白标志物C-反应蛋白（CRP）、血清淀粉样蛋白A（SAA）和D二聚体（DD）的定量检测。
3.如权利要求1或2所述的一种基于CoFe2O4/MoS2纳米酶检测脓
4.权利要求1-3任一所述的构建一种基于CoFe2O4/MoS2纳米酶检测脓毒症相关标志物的纳米酶联免疫吸附分析法在定量检测样品中的CRP、SAA、DD含量的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种基于cofe2o4/mos2纳米酶检测脓毒症相关标志物的纳米酶联免疫吸附分析法，其特征在于，包括如下步骤：（1）通过溶剂法和水热法两步合成cofe2o4/mos2磁性纳米酶粒子；（2）通过碳二亚胺缩合法，将链霉亲和素与cofe2o4/mos2磁性纳米酶粒子键合，制得链霉亲和素偶联的cofe2o4/mos2纳米酶；（3）将链霉亲和素偶联的cofe2o4/mos2纳米酶用于纳米酶联免疫吸附分析法，对样品中含有的脓毒症相关蛋白标志物c-反应蛋白（crp）、血清淀粉样蛋白a（saa）和 d二聚体（dd）进行检测。
2.如权利要求1所述的一种基于cofe2o4/mos2纳米酶检测脓毒症相关标志物的纳米酶联...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘爱林，雷云，邱清珍，陆泰成，
申请(专利权)人：福建医科大学，
类型：发明
国别省市：
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