【技术实现步骤摘要】
本申请涉及核酸快速检测，特别是涉及一种恒温核酸扩增反应产物检测的方法、检测设备及检测装置。
技术介绍
1、目前，恒温核酸扩增技术是即时检验的重要环节。恒温核酸扩增的产物可以在扩增过程中利用特定的核酸内切酶进行检测，也可以在恒温扩增反应结束后进行检测，即反应终点检测。其中，反应终点检测的操作更为简单，探针设计成本低，因此，更容易应用于进行单核苷酸多态性(snp)分型。
2、在恒温核酸扩增检测中，有多种终点检测方法，例如焦磷酸酶沉淀的检测、自发光荧光染料、ph指示剂检测法、电泳分离核酸产物法、恒温扩增与crispr/cas酶体系联用法、线性分子探针杂交法和熔解曲线法。但是这几种方法都存在一些缺陷，例如，焦磷酸酶沉淀的检测、自发光荧光染料、ph指示剂检测存在非特异扩增；电泳分离核酸产物法容易造成扩增产物污染，且存在非特异性扩增，条带无法区分；恒温扩增与crispr/cas酶体系联用法和线性分子探针杂交法不仅无法做到单管检测，容易造成核酸污染；线性分子杂交需要合成多种不同的与snp片段结合的探针，造价成本高；自淬灭荧光探针可以使用熔解曲线分析snp，但是熔解曲线不能区分tm值接近的snp基因型。
3、因此，恒温核酸扩增检测方法检测过程的复杂性、存在非特异性扩增或者检测成本偏高的问题一直困扰着相关研究人员。
技术实现思路
1、基于此，本申请提供一种恒温核酸扩增反应产物检测的方法、检测设备及检测装置，以实现检测的特异性强、灵敏度高、操作步骤简单且检测速度快的目的。>
2、一方面，本申请提供了一种恒温核酸扩增反应产物检测的方法，包括以下步骤：构建扩增-检测反应体系，其中，反应体系中至少包括：核酸模板、荧光探针、核酸内切酶、dna聚合酶、引物和dntp。将扩增-检测反应体系置于扩增温度，以扩增所述核酸模板。对核酸模板被扩增之后的扩增-检测反应体系进行第一退火过程至第一退火温度，以使荧光探针与退火的核酸模板结合，其中，第一退火过程持续第一时长，扩增-检测反应体系在第一退火温度的条件下持续第二时长。收集至少所述第一时长和第二时长期间产生的荧光信号。基于荧光信号获得恒温核酸扩增反应产物的检测结果。
3、根据本申请提供的一个实施例，核酸内切酶用于特异性识别并切割与核酸模板结合的荧光探针，以产生所述荧光信号。
4、根据本申请提供的一个实施例，荧光探针具有淬灭基团和荧光基团。荧光基团用于在核酸内切酶切割与核酸模板结合的荧光探针时产生荧光信号；淬灭基团用于在荧光探针无法与核酸模板结合时淬灭所述荧光基团。
5、根据本申请提供的一个实施例，荧光探针包括taqman探针和分子信标探针中的任意一种。
6、根据本申请提供的一个实施例，在对核酸模板被扩增之后的扩增-检测反应体系进行第一退火过程至第一退火温度之前，还包括：将核酸模板被扩增之后的扩增-检测反应体系升温至解链温度，以使扩增-检测反应体系中的双链核酸解链，并使荧光探针与解链的核酸结合。
7、根据本申请提供的一个实施例，在将核酸模板被扩增之后的扩增-检测反应体系升温至解链温度之前，还包括：对核酸模板被扩增之后的扩增-检测反应体系进行第二退火过程至第二退火温度，以使荧光探针与退火的核酸模板结合。其中，第二退火过程持续第三时长，扩增-检测反应体系在第二退火温度的条件下持续第四时长。收集第三时长和第四时长期间产生的荧光信号。其中，基于荧光信号获得恒温核酸扩增反应产物的检测结果，包括：基于第一时长和第二时长期间产生的荧光信号和第三时长和第四时长期间产生的荧光信号，获得恒温核酸扩增反应产物的检测结果。
8、根据本申请提供的一个实施例，第一退火温度和第二退火温度均小于荧光探针的熔解温度。
9、根据本申请提供的一个实施例，第一时长根据第一退火温度、扩增温度以及第一温度调节速度决定，其中第一温度调节速度为：小于等于0.2℃/s。
10、根据本申请提供的一个实施例，通过链置换扩增、滚环扩增技、环介导等温扩增、rt-环介导等温扩增、重组聚合酶扩增、解旋酶依赖性扩增，对置于扩增温度中的扩增-检测反应体系中的核酸模板进行扩增。
11、根据本申请提供的一个实施例，核酸内切酶包括rnase hii、耐热性核酸内切酶中的任意一种。
12、根据本申请提供的一个实施例，dna聚合酶包括bst dna聚合酶、phi29 dna聚合酶中的任意一种。
13、另一方面，本申请提供了一种恒温核酸扩增反应产物的检测设备，存储器和处理器，其特征在于，所述存储器中存储有计算机程序，所述处理器被设置为运行所述计算机程序以执行所述权利要求1至10中任意一项所述的方法。
14、又一方面，本申请提供了一种恒温核酸扩增反应产物的检测装置，其包括获取模块、扩增模块、退火模块、收集模块和输出模块。获取模块用于获取扩增-检测反应体系，反应体系中至少包括：核酸模板、荧光探针、核酸内切酶、dna聚合酶、引物和dntp。扩增模块用于将扩增-检测反应体系置于扩增温度，以扩增所述核酸模板。退火模块用于对核酸模板被扩增之后的扩增-检测反应体系进行第一退火过程至第一退火温度，以使荧光探针与退火的核酸模板结合，其中，第一退火过程持续第一时长，扩增-检测反应体系在第一退火温度的条件下持续第二时长。收集模块用于收集第一时长和第二时长期间产生的荧光信号。输出模块用于基于荧光信号输出恒温核酸扩增反应产物的检测结果。
15、本申请提供了一种恒温核酸扩增反应产物检测的方法，包括：构建扩增-检测反应体系，所述反应体系中至少包括：核酸模板、荧光探针、核酸内切酶、dna聚合酶、引物和dntp；将所述扩增-检测反应体系置于扩增温度，以扩增所述核酸模板；对所述核酸模板被扩增之后的扩增-检测反应体系进行第一退火过程至第一退火温度，以使所述荧光探针与退火的所述核酸模板结合，其中，所述第一退火过程持续第一时长，所述扩增-检测反应体系在第一退火温度的条件下持续第二时长；收集所述第一时长和第二时长期间产生的荧光信号；以及基于所述荧光信号获得所述恒温核酸扩增反应产物的检测结果。在该方法中，荧光探针是根据特定序列特异性设计的，其对模板序列的识别的特异性较强，灵敏度高。并且荧光信号的产生是基于核酸内切酶的特异性识别实现的，因此该方法在snp分型方面的应用性很强。并且在上述过程中，只要将反应物放入反应体系管中即可，中途不需要开管、或者倒置等，对于操作人员来说，相当于只执行了一步向管中添加物质的操作。这样可以避免中途开管，从而避免了产物污染。
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1.一种恒温核酸扩增反应产物检测的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述核酸内切酶用于特异性识别并切割与所述核酸模板结合的荧光探针，以产生所述荧光信号。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述荧光探针具有淬灭基团和荧光基团；
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述荧光探针包括Taqman探针和分子信标探针中的任意一种。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述对所述核酸模板被扩增之后的扩增-检测反应体系进行第一退火过程至第一退火温度之前，还包括：
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，在所述将所述核酸模板被扩增之后的扩增-检测反应体系升温至解链温度之前，还包括：
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述第一退火温度和所述第二退火温度均小于所述荧光探针的熔解温度。
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一时长根据所述第一退火温度、所述扩增温度以及第一温度调节速度决定，其中第一温度调节速度为：小于等于0.2℃/s。
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10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述核酸内切酶包括RNase HII、耐热性核酸内切酶中的任意一种。
11.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述DNA聚合酶包括Bst DNA聚合酶、phi29DNA聚合酶。
12.一种恒温核酸扩增反应产物的检测设备，包括：存储器和处理器，其特征在于，所述存储器中存储有计算机程序，所述处理器被设置为运行所述计算机程序以执行所述权利要求1至10中任意一项所述的方法。
13.一种恒温核酸扩增反应产物的检测装置，包括：
...【技术特征摘要】
1.一种恒温核酸扩增反应产物检测的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述核酸内切酶用于特异性识别并切割与所述核酸模板结合的荧光探针，以产生所述荧光信号。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述荧光探针具有淬灭基团和荧光基团；
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述荧光探针包括taqman探针和分子信标探针中的任意一种。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述对所述核酸模板被扩增之后的扩增-检测反应体系进行第一退火过程至第一退火温度之前，还包括：
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，在所述将所述核酸模板被扩增之后的扩增-检测反应体系升温至解链温度之前，还包括：
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述第一退火温度和所述第二退火温度均小于所述荧光探针的熔解温度。
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于...
【专利技术属性】
技术研发人员：孙琦琦，张颖，刘新红，王腾飞，
申请(专利权)人：深圳市理邦精密仪器股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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