【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药，尤其涉及一种修饰scfv-f4/80的载两性霉素b的脂质体微泡及其制备方法和应用。
技术介绍
1、两性霉素b(amphotericin b,amb)是目前马尔尼菲篮状菌病治疗的首选方案，两性霉素b脂质体(liposomal amphotericin b，lamb)将amb包裹在由氢化大豆磷脂酰胆碱、胆固醇和二肉豆蔻酰磷脂酰甘油酯组成的脂质双分子层中，以提高amb的溶解度和稳定性、减轻其毒副作用。由于amb与真菌细胞膜麦角固醇结合的特异性不高，几乎所有患者都出现不同程度的副作用，严重者可致死。而lamb虽然比amb毒性有所减轻，仍存在对马尔尼菲篮状菌靶向性低、多系统毒副作用的缺点。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于克服现有技术的不足之处而提供一种具有高靶向性、安全性、载药率和包封率的优点的修饰scfv-f4/80的载两性霉素b的脂质体微泡及其制备方法和应用。
2、为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：
3、第一方面，本专利技术提供了一种修饰scfv-f4/80的载两性霉素b的脂质体微泡的制备方法，包括以下步骤：
4、s1、混合两性霉素b、脂质体载体成膜材料、脂质体载体脂质材料和有机溶剂，充分溶解和乳化，得乳状液；
5、s2、将步骤s1乳状液与乳化剂混合，充分乳化，得悬浊液；
6、s3、将步骤s2悬浊液与破乳剂混合，充分反应，固液分离，得载两性霉素b的脂质体微泡；
7、s4、将步
8、s5、将步骤s4微泡中间体与scfv-f4/80蛋白混合，充分反应，固液分离，得修饰scfv-f4/80的载两性霉素b的脂质体微泡。
9、本专利技术通过双重乳化法制备载两性霉素b的脂质体微泡，同时负载靶向巨噬细胞的scfv-f4/80蛋白，有利于药物包裹和靶向释放。
10、在本专利技术具体实施方式中，
11、步骤s1所述脂质体载体成膜材料为聚乳酸-羟基乙酸共聚物、聚乳酸中的至少一种。
12、其中，聚乳酸-羟基乙酸共聚物通过掺入脂质材料进行修饰，让其壳膜更加柔软而富有弹性。
13、步骤s1所述脂质体载体脂质材料为二硬脂酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺和胆固醇中的至少一种。
14、其中，二硬脂酰磷脂酰胆碱是一种人工合成磷脂，用来制备脂质体，是脂质体药物制剂中不可缺少的添加性辅料。其含磷酸根的极性端具有亲水性，两个较长的碳氢链非极性端具有亲脂性，这种独特的理化性质使其能自发在水介质中形成闭合双分子层，成为生物膜骨架。
15、步骤s1所述两性霉素b与脂质体载体成膜材料和脂质体载体脂质材料的质量比为：两性霉素b：脂质体载体成膜材料：脂质体载体脂质材料＝(0.25-2)：50：2.5。
16、优选地，为了提高载两性霉素b的脂质体微泡的载药率和包封率，步骤s1所述两性霉素b与脂质体载体成膜材料和脂质体载体脂质材料的质量比为：两性霉素b：脂质体载体成膜材料：脂质体载体脂质材料＝(1.5-2)：50：2.5。
17、进一步地，在本申请具体实施例中，步骤s1的两性霉素b可用碳酸氢铵溶液或氯化铵溶液溶解，预冷后得两性霉素b预冷溶液，再与脂质体载体成膜材料、脂质体载体脂质材料和有机溶剂，充分溶解和乳化。
18、在本专利技术具体实施方式中，用碳酸氢铵溶解两性霉素b，碳酸氢铵可在冻干后分解形成气体，在微泡表面形成气孔。
19、进一步地，碳酸氢铵的浓度可以为5％-10％(w/v)，优选6％(w/v)。
20、进一步地，步骤s1所述有机溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷中的至少一种。
21、在本专利技术具体实施方式中，步骤s1所述有机溶剂为二氯甲烷。
22、进一步地，步骤s1所述有机溶剂与脂质体载体成膜材料的比例为1ml：(30-75)mg，优选1ml：50mg。
23、进一步地，步骤s1中，充分溶解在冰上进行。
24、进一步地，步骤s1中，用超声破碎仪乳化至呈均一乳白色，获得乳状液。
25、在本专利技术具体实施方式中，步骤s2所述乳化剂为聚乙烯醇。
26、进一步地，步骤s2中，聚乙烯醇的浓度为4％-10％(v/v)，优选4％(v/v)。
27、进一步地，步骤s2中，步骤s1有机溶剂与乳化剂的体积比为1:(5-15)，优选1：10。
28、进一步地，步骤s2中，用均质的方式充分反应。
29、进一步地，步骤s3所述破乳剂为异丙醇、乙醇中的至少一种。
30、进一步地，乙醇的浓度可以为4％-6％(v/v)，优选5％(v/v)。
31、在本专利技术具体实施方式中，步骤s3所述破乳剂为异丙醇。
32、进一步地，步骤s3中，异丙醇的浓度为2％-5％(v/v)，优选2％(v/v)。
33、进一步地，步骤s3中，步骤s2乳化剂与破乳剂的体积比为1:(1-10)，优选1：4。
34、进一步地，步骤s3中，将步骤s2悬浊液滴加入2％(v/v)异丙醇中，边搅拌边滴加，反应时间为4-6h，使二氯甲烷完全挥发。
35、进一步地，步骤s3中，所述固液分离方式为离心加水重悬。
36、进一步地，步骤s3中，离心条件为：5000-8000rpm，4℃，离心5-15min,优选5000r/min，离心5min。
37、进一步地，步骤s4中，所述载两性霉素b的脂质体微泡与碳二亚胺和n-羟基琥珀酰亚胺的质量比为：载两性霉素b的脂质体微泡：碳二亚胺：n-羟基琥珀酰亚胺＝50:(2.587-25.87):(1.26-12.6)；优选载两性霉素b的脂质体微泡与碳二亚胺和n-羟基琥珀酰亚胺的质量比为：载两性霉素b的脂质体微泡：碳二亚胺：n-羟基琥珀酰亚胺＝50：2.587：1.26。
38、进一步的，步骤s4中，充分反应条件为搅拌反应，25℃，密封防尘，避光，反应时间为15min-1h，优选15min，反应结束后，调ph值至7.5-8.0，得微泡中间体。
39、步骤s5所述scfv-f4/80蛋白与修饰scfv-f4/80的载两性霉素b的脂质体微泡的质量比为1:25-50，优选1:25。
40、进一步的，步骤s5中，充分反应条件为搅拌反应，25℃，密封防尘，避光，反应时间为2-8h，优选2h。
41、进一步的，步骤s5中，所述固液分离为离心和清洗。
42、进一步的，步骤s5中，离心条件为5000-8000r/min，离心5-15min,优选5000r/min，离心5min。
43、进一步的，步骤s5中，用水清洗离心后的沉淀3-5次，优选3次。
44、进一步的，步骤s5中，所述scfv-f4/80蛋白在genbank上的登陆号为本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种修饰ScFv-F4/80的载两性霉素B的脂质体微泡的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S1所述脂质体载体成膜材料为聚乳酸-羟基乙酸共聚物、聚乳酸中的至少一种。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S1所述脂质体载体脂质材料为二硬脂酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺和胆固醇中的至少一种。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S1所述有机溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷中的至少一种，和/或，步骤S2所述乳化剂为聚乙烯醇；和/或，步骤S3所述破乳剂为异丙醇、乙醇中的至少一种。
5.根据权利要求1-3任一所述的制备方法，其特征在于，步骤S1所述两性霉素B与脂质体载体成膜材料和脂质体载体脂质材料的质量比为：两性霉素B：脂质体载体成膜材料：脂质体载体脂质材料＝(0.25-2)：50：2.5。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S5所述ScFv-F4/80蛋白与载两性霉素B的脂质体微泡的质量比为1:(25-50)。
7.根据
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S4中，充分反应后，调pH值至7.5-8.0。
9.权利要求1-8任一所述制备方法制备得到的修饰ScFv-F4/80的载两性霉素B的脂质体微泡。
10.权利要求9所述修饰ScFv-F4/80的载两性霉素B的脂质体微泡在制备治疗马尔尼菲篮状菌病的药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种修饰scfv-f4/80的载两性霉素b的脂质体微泡的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤s1所述脂质体载体成膜材料为聚乳酸-羟基乙酸共聚物、聚乳酸中的至少一种。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤s1所述脂质体载体脂质材料为二硬脂酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺和胆固醇中的至少一种。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤s1所述有机溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷中的至少一种，和/或，步骤s2所述乳化剂为聚乙烯醇；和/或，步骤s3所述破乳剂为异丙醇、乙醇中的至少一种。
5.根据权利要求1-3任一所述的制备方法，其特征在于，步骤s1所述两性霉素b与脂质体载体成膜材料和脂质体载体脂质材料的质...
【专利技术属性】
技术研发人员：何艳，柳建华，
申请(专利权)人：广州市第一人民医院广州消化疾病中心，广州医科大学附属市一人民医院，华南理工大学附属第二医院，
类型：发明
国别省市：
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